用于治疗法布里病的组合物和方法技术

本文提供了编码功能性人α

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗法布里病的组合物和方法

技术介绍

[0001]法布里病(Fabry disease)是一种X连锁溶酶体病症，是由负责酰基鞘鞍醇三己糖(GL
‑
3或Gb3)分解的酶α
‑
半乳糖苷酶A(GLA)的基因突变引起的。GLA的缺乏导致GL
‑
3和相关的鞘糖脂在全身血管、神经、组织和器官的血浆和细胞溶酶体中积累。这种病症是一种全身性疾病，表现为进行性肾衰竭、心脏病、脑血管疾病、小纤维周围神经病和皮肤病变等异常。导致α
‑
半乳糖苷酶A活性缺失的GLA基因突变导致典型的、严重形式的法布里病。降低但小消除酶活性的突变通常会导致通常仅影响心脏或肾脏的更温和的迟发型法布里病。
[0002]目前，法布里病的标准治疗包括酶替代疗法和治疗和预防疾病的其它症状的药物。在发生肾衰竭的严重病例中可能需要肾移植。
[0003]本领域需要用于安全有效治疗法布里病患者的组合物和方法。

技术实现思路

[0004]在一个方面，本文提供了包含其中包装有载体基因组的AAVhu68衣壳的重组AAV(rAAV)，其中载体基因组包含功能性人α
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半乳糖苷酶A(hGLA)的编码序列和指导hGLA在靶细胞中表达的调节序列，其中编码序列包含SEQ ID NO：4的核苷酸94至1287，或与其至少85％相同的序列，并且其中hGLA在位置233和/或位置359处具有半胱氨酸残基。在某些实施例中，hGLA至少包含SEQ ID NO：2的氨基酸32至429，或与其至少95％相同的序列。在某些实施例中，hGLA包含SEQ ID NO：7的氨基酸32至429。在某些实施例中，其中hGLA包含天然信号肽。在其它实施例中，hGLA包含异源信号肽。在某些实施例中，hGLA包含SEQ ID NO：17的全长(氨基酸1至429)，或与其至少95％相同的序列。在某些实施例中，载体基因组包含组织特异性启动子。在某些实施例中，调节序列包含CB7启动子、内含子和polyA。在某些实施例中，调节序列包含土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)。在某些实施例中，载体基因组包含一个或多个miRNA靶序列。
[0005]在一个方面，本文提供了包含编码功能性人α
‑
半乳糖苷酶A(hGLA)的核酸序列和指导hGLA在含有表达盒的靶细胞中表达的一个或多个调节序列的表达盒，其中核酸序列包含SEQ ID NO：4的核苷酸94至1287，或与其至少85％相同的序列，并且其中hGLA在位置233和/或位置359处具有半胱氨酸残基。在某些实施例中，hGLA包含SEQ ID NO：7的氨基酸32至429。在某些实施例中，hGLA包含天然信号肽。在其它实施例中，hGLA包含异源信号肽。在某些实施例中，hGLA包含SEQ ID NO：7的全长(氨基酸1至429)，或与其至少95％相同的序列。在某些实施例中，根据权利要求12至16中任一项所述的表达盒，其中表达盒包含组织特异性启动子。在某些实施例中，调节序列包含CB7启动子、内含子和polyA。在某些实施例中，调节序列包含土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)。在某些实施例中，表达盒包含一个或多个miRNA靶序列。
[0006]在一个方面，本文提供了包含表达盒和一个或多个调节序列的质粒，该表达盒包含编码功能性人α
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半乳糖苷酶A(hGLA)的核酸序列，该调节序列指导hGLA在含有表达盒的靶细胞中表达，其中核酸序列包含SEQ ID NO：4的核苷酸94至1287，或与其至少85％相同的
序列，并且其中hGLA在位置233和/或位置359处具有半胱氨酸残基。在某些实施例中，表达盒的侧翼为AAV 5
′
ITR和AAV 3
′
ITR。在进一步的实施例中，提供了含有表达盒或质粒的宿主细胞。
[0007]在又一方面，提供了包含rAAV或包含编码功能性人α
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半乳糖苷酶A(hGLA)的核酸序列的表达盒的药物组合物。
[0008]在另一方面，提供了治疗诊断为GLA缺乏症(法布里病)的人类受试者的方法，其包含向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含rAAV或具有编码功能性人α
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半乳糖苷酶A(hGLA)的序列的表达盒。在另一方面，提供了用于治疗GLA缺乏症(法布里病)的rAAV、表达盒和药物组合物。
[0009]根据下文对本专利技术的详细描述，本专利技术的其它方面和优点将变得显而易见。
附图说明
[0010]图1示出了CB7.CI.hGLAco(D233C_1359C).WPRE.rBG载体基因组(SEQ ID NO：6)的图谱。
[0011]图2示出了CB7.CI.hGLAnat.WPRE.rBG载体基因组(SEQ ID NO：10)的图谱。
[0012]图3示出了TBG.PI.hGLAnat.WPRE.bGH载体基因组(SEQ ID NO：8)的图谱。
[0013]图4示出了CB7.CI.hGLAco.WPRE.rBG载体基因组(SEQ ID NO：14)的图谱。
[0014]图5示出了TBG.PI.hGLAco.WPRE.bGH载体基因组(SEQ ID NO：12)的图谱。
[0015]图6示出了CB7.CI.hGLAco(M51C_G360C).WPRE.rBG载体基因组(SEQ ID NO：18)的图谱。
[0016]图7示出了TBG.PI.hGLAco(M51C_G360C).WPRE.bGII载体基因组(SEQ ID NO：16)的图谱。
[0017]图8A和8B示出了hGLAnat(SEQ ID NO：1)、hGLAco(SEQ ID NO：3)、hGLAco(M51C_G360C)(SEQ ID NO：5)、hGLA(D233C_I359C)(SEQ ID NO：4)的核苷酸序列比对。
[0018]图9示出了hGLAnat(SEQ ID NO：2)、hGLAco(SEQ ID NO：13)、hGLAco(M51C_G360C)(SEQ ID NO：17)、hGLA(D233C_I359C)(SEQ ID NO：7)的氨基酸序列比对。
[0019]图10A和图10B示出了未处理的雄性和雌性对照、Gla KO、WT/TgG3S和Gla KO/TgG3S小鼠的体重。年龄匹配的对照(WT雄性和Gla HET雌性)、Gla KO、WT/TgG3S和Gla KO/TgG3S小鼠保持未处理以评估这些模型的自然史。记录雄性(图10A)和雌性(图10B)小鼠在6周龄、12周龄、18周龄、25周龄、30周龄和35周龄的体重。给出了平均体重。误差条代表标准偏差。缩写：Gla，α
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半乳糖苷酶A；TgG3S，人Gb3合酶
‑
转基因的。
[0020]图11A和图11B示出了未处理的雄性和雌性对照、Gla KO、WT/TgG3S和Gla KO/TgG3S小鼠的热板应答本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组AAV(rAAV)，其包含其中包装有载体基因组的AAVhu68衣壳，其中所述载体基因组包含功能性人α
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半乳糖苷酶A(hGLA)的编码序列和指导所述hGLA在靶细胞中表达的调节序列，其中所述编码序列包含SEQ ID NO：4的核苷酸94至1287，或与其至少85％相同的序列，并且其中所述hGLA在基于SEQ ID NO：2的氨基酸残基编号的位置233和/或位置359处具有半胱氨酸残基。2.根据权利要求1所述的rAAV，其中所述hGLA包含SEQ ID NO：2的至少氨基酸32至429，或与其至少95％相同的序列。3.根据权利要求1或2所述的rAAV，其中所述hGLA包含SEQ ID NO：7的氨基酸32至429。4.根据权利要求1至3中任一项所述的rAAV，其中所述hGLA包含天然信号肽。5.根据权利要求1至3中任一项所述的rAAV，其中所述hGLA包含异源信号肽。6.根据权利要求1至4中任一项所述的rAAV，其中所述hGLA包含SEQ ID NO：17的全长(氨基酸1至429)，或与其至少95％相同的序列。7.根据权利要求1至6中任一项所述的rAAV，其中所述载体基因组包含组织特异性启动子。8.根据权利要求1至6中任一项所述的rAAV，其中所述调节序列包含CB7启动子、内含子和polyA。9.根据权利要求1至8中任一项所述的rAAV，其中所述调节序列包含土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)。10.根据权利要求9所述的rAAV，其中所述WPRE包含SEQ ID NO：27。10.根据权利要求1至9中任一项所述的rAAV，其中所述载体基因组包含一个或多个miRNA靶序列。11.根据权利要求1所述的rAAV，其中所述载体基因组包含与SEQ ID NO：6至少85％相同的序列。12.一种表达盒，其包含编码功能性人α
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半乳糖苷酶A(hGLA)的核酸序列和指导所述hGLA在含有所述表达盒的靶细胞中表达的一个或多个调节序列，其中所述核酸序列包含SEQ ID NO：4的核苷酸94至1287，或与其至少85％相同的序列，并且其中所述hGLA在基于SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：7的氨基酸残基编号的位置233和/或位置359处具有半胱氨酸残基。13.根据权利要求12所述的表达盒，其中所述hGLA包含SEQ ID NO：7的氨基酸32至429。14.根据权利要求12或13所述的表达盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州大学信托人，
类型：发明
国别省市：