一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备及其应用，属于生物医药技术领域。胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备包括制备Zfyve19基因敲除的小鼠，并对Zfyve19基因敲除的小鼠进行异硫氰酸

【技术实现步骤摘要】
一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备及其应用


[0001]本专利技术涉及一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备及其应用，属于生物医药


技术介绍

[0002]胆汁性肝纤维化/肝硬化是导致儿童和成人死亡或需要肝移植的重要原因。动物模型在致病机制研究以及新的治疗靶标发现中具有不可替代的作用。现有技术中胆汁性肝纤维化小鼠模型有胆管结扎、药物/毒物诱导、以及一些基因操纵(Mdr2
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鼠、Cftr
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鼠、CDH1
ΔL
鼠、Vil2
kd/kd
鼠等)疾病模型等。胆管结扎手术造模虽然造模速度快，但死亡率较高，手术操作环境要求高，且不能很好模拟人类疾病。药物/毒物诱导模型包括DDC、TAA和CCI4等，也不能很好模拟人类疾病。Mdr2
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鼠、Cftr
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鼠、CDH1
ΔL
鼠、Vil2
kd/kd
鼠各有特色，但也有各自的局限性，因此本
亟需新的胆汁性肝纤维化/肝硬化模型。
[0003]专利技术人团队国际上率先鉴定了ZFYVE19双等位基因完全失功能突变可引起人类胆管增生和胆汁性肝纤维化，最终引起门脉高压导致死亡或需要肝移植才能长期存活。该发现已获国际同行重复，并被OMIM收录(MIM#619849)。基于上述发现，专利技术人制备了Zfyve19基因敲除的小鼠，并使用异硫氰酸
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萘酯诱导，发现可模拟人类ZFYVE19病，可望作为胆汁性肝纤维化小鼠模型用于胆汁性肝纤维化的致病机制和新药研究的动物模型。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题之一是解决如何获得一种能较好模拟人类胆汁性肝纤维化的小鼠模型的技术问题。
[0005]为达到解决上述问题的目的，本专利技术所采取的技术方案是提供一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备方法，包括制备Zfyve19基因敲除的小鼠，并对Zfyve19基因敲除的小鼠进行异硫氰酸
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A
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萘酯诱导，获得胆汁性肝纤维化小鼠模型。
[0006]优选地，所述制备Zfyve19基因敲除的小鼠是利用CRISPR基因编辑技术获得基因敲除小鼠模型。
[0007]优选地，所述Zfyve19基因敲除选择小鼠Zfyve19基因的3
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6外显子作为靶位点。
[0008]优选地，所述CRISPR基因编辑技术获得基因敲除小鼠模型过程中，采用的sgRNA包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的gRNA1和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的gRNA2。
[0009]优选地，所述异硫氰酸
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A
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萘酯诱导过程包括选取Zfyve19
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小鼠，在造模第0，7，14天，给异硫氰酸
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萘酯60mg/kg灌胃，诱导获得胆汁性肝纤维化小鼠模型。
[0010]本专利技术提供根据上述的一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备方法获得的小鼠模型的应用。
[0011]优选地，所述应用包括在制备用于预防或治疗先天性肝纤维化的药物上的应用。
[0012]优选地，所述应用包括在制备用于预防或治疗胆汁性肝纤维化的药物上的应用。
[0013]优选地，所述应用包括在制备用于预防或治疗肝纤维化的药物上的应用。
[0014]相比现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
[0015]本专利技术采用引起人类胆汁性肝纤维化、硬化性胆管病和胆汁淤积的致病基因的同源基因Zfyve19全身敲除小鼠为基础模型动物，再利用异硫氰酸
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A
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萘酯灌胃造模，较好模拟人ZFYVE19缺陷病，模拟人类在一定遗传背景基础上的获得性胆汁性肝纤维化和肝硬化；同时造模稳定性高，造模效率高。采用本专利技术提供的模型制作方法具有更类似于人类患病过程的优点。
附图说明
[0016]图1为本专利技术基因敲除方案示意图；
[0017]图2为本专利技术模型构造成功后获得的小鼠肝组织、胆囊改变图；
[0018]图3为本专利技术模型构造成功后获得的小鼠肝组织H&amp;E及天狼星红染色切片。
[0019]其中A图为H&amp;E染色，比例尺＝100μm；B图为天狼星红染色，比例尺＝100μm。
[0020]图4为本专利技术胆汁性肝纤维化小鼠模型经PCR验证阳性F0代小鼠基因PCR图；
[0021]图5为本专利技术胆汁性肝纤维化小鼠模型经PCR验证阳性F1代小鼠基因PCR图；
[0022]图6为本专利技术胆汁性肝纤维化小鼠模型经PCR验证阳性F2代小鼠基因PCR图一；
[0023]图7为本专利技术胆汁性肝纤维化小鼠模型经PCR验证阳性F2代小鼠基因PCR图二；
[0024]图8为本专利技术胆汁性肝纤维化小鼠模型经ANIT用药后获得的小鼠肝组织H&amp;E及天狼星红染色切片图；
具体实施方式
[0025]为使本专利技术更明显易懂，兹以实施例作详细说明如下：
[0026]本专利技术所采取的技术方案是提供一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备方法，包括制备Zfyve19基因敲除的小鼠，并对Zfyve19基因敲除的小鼠进行异硫氰酸
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A
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萘酯诱导，获得胆汁性肝纤维化小鼠模型。
[0027]制备Zfyve19基因敲除的小鼠是利用CRISPR基因编辑技术获得基因敲除小鼠模型。
[0028]Zfyve19基因敲除过程中选择小鼠Zfyve19基因的3
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6外显子作为靶位点。
[0029]CRISPR基因编辑技术获得基因敲除小鼠模型过程中，采用的sgRNA包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的gRNA1和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的gRNA2。
[0030]异硫氰酸
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萘酯诱导过程包括选取6
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8周龄体重18
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22g的Zfyve19
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雄鼠，在造模第0，7，14天，给异硫氰酸
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萘酯60mg/kg灌胃；诱导获得胆汁性肝纤维化小鼠模型。
[0031]本专利技术提供根据上述的一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备方法获得的小鼠模型的应用。
[0032]上述应用包括在制备用于预防或治疗先天性肝纤维化的药物上的应用。
[0033]上述应用包括在制备用于预防或治疗胆汁性肝纤维化的药物上的应用。
[0034]上述应用包括在制备用于预防或治疗肝纤维化的药物上的应用。
[0035]小鼠模型制备方法，包括以下步骤：
[0036](1)Zfy本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备方法，其特征在于，包括制备Zfyve19基因敲除的小鼠，并对Zfyve19基因敲除的小鼠进行异硫氰酸
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萘酯诱导，获得胆汁性肝纤维化小鼠模型。2.根据权利要求1所述的一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备方法，其特征在于，所述制备Zfyve19基因敲除的小鼠是利用CRISPR基因编辑技术获得基因敲除小鼠模型。3.根据权利要求1所述的一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备方法，其特征在于，所述Zfyve19基因敲除选择小鼠Zfyve19基因的3
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6号外显子作为靶位点。4.根据权利要求1所述的一种胆汁性肝纤维化小鼠模型的制备方法，其特征在于，所述CRISPR基因编辑技术获得基因敲除小鼠模型过程中，采用的sgRNA包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的gRNA1和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的g...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建设，杨静，
申请(专利权)人：复旦大学附属儿科医院，
类型：发明
国别省市：