本发明专利技术属于分析化学领域，涉及蒸馏酒中氨基甲酸乙酯的高效液相色谱-质谱检测方法。本发明专利技术的目的是提供一种对蒸馏酒中的氨基甲酸乙酯进行定量检测方法。本发明专利技术的技术方案是蒸馏酒中氨基甲酸乙酯的高效液相色谱-质谱检测方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）样品预处理；（2）检测。本发明专利技术方法操作简单，检测时间短，灵敏度高，结果精确。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析化学领域，涉及。
技术介绍
氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate，简称EC)，又名尿烷，早在1943年EC就被证实为一种致癌物质，大量试验数据表明，EC在动物体内存在多种代谢方式，是一种具有遗传毒性且多位点致癌的物质，国际癌症研究所将其对人类的致癌毒性归为2B组。2007年，国际癌症研究机构(IARC)重新评估了 EC，将其列入2A组，与铅、汞并列，这意味着EC对人类可能致癌。饮料酒中的氨基甲酸乙酯来源于其生产及贮存过程中，目前，只有有少数国家制定了饮料酒中EC的限量标准。 蒸馏酒中氨基甲酸乙酯的检测可用GC-MS(气相色谱-质谱)法、HPLC法等。GC-MS分析法准确，灵敏度高，但前处理方法较复杂(目前对样品所使用的前处理方法主要有液液萃取，固液萃取，固相萃取，固相微萃取等)，所需时间也较长；HPLC (高效液相色谱)法需要对样品进行衍生处理(蒸馏酒中EC含量较低，紫外检测器无法检测ppb级的EC，因此，需要使用灵敏度相对较高的荧光检测器，而EC本身又不产生荧光，所以必须对EC进行衍生处理，使其带上荧光基团)，相对于GC-MS分析法而言，HPLC法前处理较简单，但是灵敏度较低，色谱分离的时间也较长，且只依靠保留时间定性，准确性较差。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种对蒸馏酒中的氨基甲酸乙酯进行定量检测方法。本专利技术的技术方案是，包括如下步骤(I)样品预处理量取一定体积的蒸馏酒样品，在3(T40°C下用旋转蒸发仪减压蒸馏除去样品中的乙醇，用蒸馏水定容至原来的体积，过滤；(2)检测取处理过的蒸馏酒样品直接进LC-MS (液相色谱-质谱)，选择质子化氨基甲酸乙酯分子离子[Μ+ΗΓ90. 055为定量离子进行检测，经标准曲线的计算得到样品中氨基甲酸乙酯的含量。进一步的，所述的液相色谱条件如下流动相由A和B组成，其中A为含O. 05、. 3%甲酸或乙酸的水溶液，B为乙腈或甲醇，洗脱梯度为流动相B :109Γ100%，流速0. 2^0. 6mL/min ;色谱柱为C18柱。进一步的，所述质谱条件如下采用电喷雾离子源，毛细管电压4000V，毛细管出口电压55 135V，锥孔电压55 75V，离子源温度18(T300°C，干燥气流量5 13L/min。进一步的,所述的C18柱长50mnT250mm,内径为2. Imm或4. 6_。进一步的，所述的洗脱梯度为0 3min, 10 100%B ;3 8min, 100%B ;postime (后运行时间)2min。本专利技术方法创造性的将LC-MS应用到蒸馏酒中氨基甲酸乙酯的检测。专利技术人对检测过程中色谱和质谱的操作参数进行了选择，使得检测时间短，同时又能保证检测的准确性和灵敏度。此外，为了进一步提高检测的准确性，专利技术人对样品进行了预处理，该预处理方法操作简单、成本低廉。通过样品的预处理和检测过程的配合，使得本专利技术的方法操作简单，准确性和灵敏度都较高。因此，本专利技术方法为蒸馏酒中氨基甲酸乙酯的检测提供了新的选择。附图说明图I、浓度为50μ g/L的基甲酸乙酯标准品提取离子轮廓2、浓度为20 μ g/L的氨基甲酸乙酯标准品提取离子轮廓3、样品1#中氨基甲酸乙酯提取离子轮廓图 图4、样品2#中氨基甲酸乙酯提取离子轮廓5、样品3#中氨基甲酸乙酯提取离子轮廓广5中纵坐标为采集点数，横坐标为采集时间。具体实施例方式本专利技术的技术方案是，包括如下步骤(I)样品预处理量取一定体积的蒸馏酒样品，在3(T40°C下用旋转蒸发仪减压蒸馏除去样品中的乙醇，用蒸馏水定容至原来的体积，过滤；(2)检测取处理过的蒸馏酒样品直接进LC-MS (液相色谱-质谱)，选择质子化氨基甲酸乙酯分子离子[Μ+ΗΓ90. 055为定量离子进行检测，经标准曲线的回归方程计算得到样品中氨基甲酸乙酯的含量。进一步的，所述的液相色谱条件如下流动相由A和B组成，其中A为含O. 05、. 3%甲酸或乙酸的水溶液，B为乙腈或甲醇，洗脱梯度为B :109Γ100%，流速O. 2^0. 6mL/min ;色谱柱为C18柱。进一步的，所述质谱条件如下采用电喷雾离子源，毛细管电压4000V，毛细管出口电压55 135V，锥孔电压55 75V，离子源温度18(T300°C，干燥气流量5 13L/min。进一步的,所述的C18柱长50mnT250mm,内径为2. Imm或4. 6_。进一步的，所述的洗脱梯度为0 3min, 10 100%B ;3 8min, 100%B ;postime (后运行时间)2min。本专利技术中，由于蒸馏酒成分比较复杂，所以必须进行预处理，去掉一些非目标化合物的干扰，避免在检测的过程中影响目标化合物而使得定量不准确。特别是乙醇在白酒中浓度较高，直接进样检测会导致EC的峰开叉、变宽、变形等，使得检测不准确。在样品预处理过程中，若温度过高，一方面有可能会引起某些反应，导致EC的含量升高，另一方面，EC可能会随着乙醇蒸出。因此在预处理过程中，温度不宜过高，以300C 40°C为佳。在标准大气压下，乙醇的沸点是78. 40C (高于前述30°C 40°C)，因此必须进行减压蒸馏。在控制温度为30°C 40°C的条件下，真空度必须低于-O. 085MPa(比标准大气压低O. 085MPa)乙醇才能蒸出。经预处理后的样品中可能会存在一些小颗粒或者不溶物质，直接进样分析会导致色谱柱堵塞，因此，在进样前需过滤，采用常用的滤膜过滤即可。本专利技术中，建立合适的液相色谱条件，目的是让化合物能够良好的分离，使目标化合物不受其它物质的干扰；质谱条件的建立依据是让目标化合物丰度最大，信噪比最高。这两个部分条件的建立是根据目标化合物的保留时间与丰度来调节的。检测限为分析方法在规定的实验条件下所能检出被测组分的最低浓度或最低量。当被测组分的量高于检测限时，即可被检出，但不一定能准确测定。按信(号)噪(音)比确定可被检出的最低浓度。一般以信噪比(S/N)为3 : I或2 : I时相应的浓度或注入仪器的量确定检测限。依据S/N为3推算，本专利技术方法的检测限可低至I. 6 μ g/L。 定量限为样品中被测物能被定量测定的最低量。定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定量检测能力。常用信噪比(S/N)法确定定量限。一般以信噪比为10 I时相应的浓度或注入仪器的量确定定量限。依据S/N为10推算，本专利技术方法定量限为5. 5 μ g/L。 在本专利技术液相色谱条件中，流动相的流速低则出峰慢，流速高则出峰快。一般情况下，液相色谱检测中均设定30°C左右的柱温。色谱柱其它条件相同，内径小则出峰较快，内径大则出峰相对较慢。在满足样品中目标化合物分离的情况下，采用长的色谱柱(250mm)时，分离时间较长，为了更快的分析，可采用短的色谱柱(50mm)。用标准样品配制成不同浓度的标准溶液，在与待测组分相同的条件下，等体积准确进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制一条相关曲线，即标准曲线y=bx+a (χ-试样中被测组分含量，y_试样中被测组分的峰面积),相关系数R2。本专利技术中先配制氨基甲酸乙酯标准溶液以无水乙醇/甲醇为溶剂，配制浓度为1000mg/L的氨基甲酸乙酯母液，4°C冰箱保存，以蒸馏水为溶剂，稀释母液，配制浓度分别为500μ本文档来自技高网...
【技术保护点】
蒸馏酒中氨基甲酸乙酯的高效液相色谱?质谱检测方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）样品预处理：量取一定体积的蒸馏酒样品，在30~40℃下用旋转蒸发仪减压蒸馏除去样品中的乙醇，用蒸馏水定容至原来的体积，过滤；（2）检测：取处理过的蒸馏酒样品直接进LC?MS，选择质子化氨基甲酸乙酯分子离子[M+H]+90.055为定量离子进行检测，经标准曲线的计算得到样品中氨基甲酸乙酯的含量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：唐桥，陈林，周韩玲，练顺才，李杨华，廖勤俭，
申请(专利权)人：宜宾五粮液股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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