嗜热长链烷醇醇脱氢酶及其晶体结构制造技术

本发明专利技术涉及一株嗜热脱氮芽孢杆菌正烷烃末端降解途径中的嗜热长链烷醇醇脱氢酶的晶体结构。本发明专利技术利用大肠杆菌E.coli异源表达该醇脱氢酶。通过蛋白质纯化方法获得该酶的纯品。利用悬滴结晶法得到该酶适宜衍射的晶体。利用X射线衍射方法对该酶的晶体结构进行解析。结果表明，一个亚基中含有两个结构域，其被一个裂缝隔开。N-端结构域含有一对类似于罗斯曼折叠的α/β折叠。该结构域含有一个NAD+辅酶结合位点。C-端结构域含有一个脱氢奎尼酸盐合成酶类似的α结构域布局。一个金属铁离子结合到C-端结构域，并暴露于中间裂缝。这些结果能全方位反应该酶的空间构象，为进一步研究醇脱氢酶的结构与功能之间的关系、提高酶的降解活性提供理论上的指导。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到用X射线晶体衍射方法确定的一种嗜热长链烷醇醇脱氢酶晶体结构，属于分子生物学和应用微生物学领域。
技术介绍
醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase, ADHs, EC I. I. I. I)是生物体内重要的氧化还原剂之一，很多醇类代谢都是通过醇脱氢酶催化完成的。在动物、植物、微生物、真核生物以及原核细菌中都已发现醇脱氢酶，至少有25个EC编号的酶被称为醇脱氢酶。醇脱氢酶能够催化醇类物质到醛类物质的可逆氧化。ADHs的底物范围很广，其所起到的生理学作用也是多种多样的。在微生物烷烃类物质的末端降解途径中，ADHs催化反应中的第二步，末端降解途径如图3所示。 在正烷烃类物质末端降解途径中，由烷烃加氧酶将烷烃氧化为长链烷醇，再由醇脱氢酶进一步脱氢为长链烷醛，生成的长链烷醛在醛脱氢酶的作用下脱氢生成长链脂肪酸。在长链脂肪酸辅酶A连接酶作用下生成长链烷酸辅酶A后进入三羧酸循环，最终完全氧化为二氧化碳和水。醇脱氢酶来源广泛，种类繁多。依赖NAD(P)H的醇脱氢酶，根据它们的分子性质和金属含量，能够分为三类。I型Zn2+依赖的长链醇脱氢酶(每个亚基含有约350个氨基酸残本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株嗜热脱氮芽孢杆菌内的嗜热长链烷醇醇脱氢酶，其特征在于该嗜热长链烷醇醇脱氢酶的晶体结构如下：其空间群为C2221，晶胞参数为α=β=γ=90°；其为二聚体，一个亚基中含有两个结构域，这两个结构域被一个裂缝隔开；N？端结构域含有一对罗斯曼折叠类似的α/β折叠，其中包含β折叠1？5和β折叠8，α螺旋1？4位于侧面，N？端结构域含有一个NAD+辅酶结合位点；C？端结构域含有一个脱氢奎尼酸盐合成酶类似的α结构域布局，其由9个α螺旋排成了一个螺旋束，一个金属铁离子结合到C？端结构域，并暴露于中间裂缝，该金属离子处于由四个严格保守的残基Asp194、His198、His261和His267所构成的金字塔...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马克·巴特兰姆，王莹莹，纪玉蕊，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：