一种发酵生产葡萄糖氧化酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种发酵生产葡萄糖氧化酶酶活的方法，属于发酵工程领域。本发明专利技术采用本实验室在前期工作中构建的可以产较高活性葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母Pichia?pastorisGS115-pPIC9K-GOX基因工程菌，保藏编号为CCTCC?NO：M?2012266。在甲醇诱导阶段通过添加山梨醇来提高葡萄糖氧化酶的酶活:即控制发酵液中甲醇残留浓度1.8%(W/V)，且甲醇与山梨醇混合添加比例为10:1(W/W)时，葡萄糖氧化酶的酶活为645.3U/mL，比不添加山梨醇(427.6U/mL)提高了50.9%，而且有效缩短了发酵周期，这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于遗传工程领域。
技术介绍
葡萄糖氧化酶(β-D-glucose:oxygenl-oxidoreductase;EC I. I. 2. 3. 4,简称GOD)，是一种富含糖基的黄体蛋白，它能够在有氧气的条件下专一性催化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢。葡萄糖氧化酶(GOD)是生物领域中最主要的工具酶之一。自1967年Updike和Hicks将GOD固定在Clark氧电极表面，将其应用于血糖测定以来，GOD被广泛应用于食品、饲料、医药等许多相关领域。 在食品工业中，由于氧的存在，引起许多不利于产品质量的化学反应，并为许多微生物生长创造了条件。目前，许多国家已将GOD作为工人的安全抗氧剂而广泛应用于各种食品和食品加工工艺中。虽然用途多样，GOD的作用主要在于除葡萄糖、除氧、形成过氧化氢、形成葡萄糖酸四个方面。利用其专一氧化酶的原理，制成葡萄糖氧化酶分析仪，能快速准确简易地测定各种食品中的葡萄糖含量，指导生产。在医药工业中，GOD作为试剂盒、酶电极等用于血清(浆)、尿液及脑脊液中葡萄糖的体外定量分析；G0D制成的酶制剂还可用于除去或缓解牙斑、牙垢和龋齿的形成防止口腔本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种发酵生产葡萄糖氧化酶的方法，以一种产葡萄糖氧化酶的基因工程菌为生产菌株，保藏编号为CCTCC？NO：M？2012266，于2012年7月3日保藏于中国典型培养物保藏中心；其特征在于将活化后YPD扩培的菌液接入全自动发酵罐中的发酵培养基进行发酵处理，接种量为10%，以25%氨水控制pH？5.5，温度30℃，调节搅拌转速和通气量维持溶氧30%以上；当甘油耗尽DO迅速上升时，开始流加50%甘油补料生长培养基，当菌体干重达到100g/L后，停止补料；待甘油再次耗尽，继续保持基质匮乏状态约1h后，开始流加诱导培养基，诱导条件为：温度降低至20？25℃，控制甲醇和山梨醇的混合添加比例为10:1？5:1...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张娟，陈坚，顾磊，堵国成，沈伊娜，李婷，李梦洁，殷政，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：