本发明专利技术涉及新的人源化拮抗性抗-CD40抗体，及使用该抗体的治疗及诊断方法及组合物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
概言之，本专利技术涉及用于诊断及治疗应用的人源化抗-CD40抗体。更具体而言，本专利技术公开了人源化抗-CD40抗体及用于治疗特征在于表达CD40的细胞的各种疾病或病症的方法。本专利技术还公开了包含人源化抗-CD40抗体的药物组合物及试剂盒。
技术介绍
⑶40为48kDa I型膜内在糖蛋白，且为肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的成员。多种类型的细胞上表达CD40，包括正常及肿瘤性B细胞、交错突细胞、癌瘤细胞、上皮细胞(例如角质化细胞)、成纤维细胞(例如滑膜细胞)及血小板。CD40亦存在于单核细胞、巨噬细胞、一些内皮细胞及滤泡树突细胞上。⑶40在B细胞个体发育的早期表达，其在⑶10及⑶19出现后、且在表达⑶21、⑶23、⑶24及出现表面免疫球蛋白M(sIgM)之前出现在B细胞前体上(Uckun等人，1990，Blood 15:2449)。亦已在扁桃体及来自骨髓的浆细胞上检测到 CD40 (Pellat-Decounynck 等人，1994, Blood 84:2597)。CD40的配体为CD40L(亦称作CD154、gp39及TRAP)，其为TNF超家族成员。CD40L为主要在活化⑶4+T细胞及一小亚群⑶8+T细胞上表达的跨膜蛋白(Van Kooten C.及Banchereau,2000)。⑶40与⑶40L的相互作用诱导体液及细胞介导的免疫应答。⑶40调节此配体-受体对以活化B细胞及其他抗原呈递细胞(APC)，包括树突细胞(DC)(由Toubi及Shoenfeld，2004 ；Kiener等人，1995综述)。业内已广泛研究了⑶40对B细胞的功能。在次级淋巴样器官的生发中心中，CD40对B细胞的活化诱导增殖、分化为抗体分泌细胞及同种型(isotype)转换。体外研究已显示，⑶40活化对细胞因子(IL-6、IL-10、TNF-α ,LTa)的产生、黏着分子及共刺激受体(ICAM、⑶23、CD80及⑶86)的表达、以及B淋巴细胞表达MHC I类、MHCII类及TAP转运蛋白的提高具有直接效应(Liu等人，1996)。在大多数所述过程中，⑶40与细胞因子或其他受体-配体相互作用发生协同作用。⑶40在单核细胞及DC上的信号传导导致存活延长以及细胞因子(IL-1、IL_6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-a及MIP-1 a )的分泌。CD40在所述APC上的配基化亦导致共刺激分子(例如ICAM-I、LFA-3、⑶80及⑶86)上调。⑶40受体的活化为使得DC可完全成熟为有效APC、从而驱动T细胞活化的一个关键信号(Banchereau及Steinman, 1998) (VanKooten C.及 Banchereau,2000)。在小鼠模型中的最新研究显示，CD40在树突细胞上的信号传导在TH17细胞产生中亦具有重要作用，TH17细胞被视为例如关节炎及多发性硬化等疾病中的自身免疫介导物(Iezzi 等人，2009) (Perona-ffright 等人，2009)。CD40及CD40L剔除小鼠以及激动性及拮抗性抗小鼠抗体的可用性使得可研究若干种疾病模型中CD40-CD40L的相互作用。已证实，给予阻断性抗-CD40L在若干种自身免疫模型中有益，包括自发性疾病(例如SNFl小鼠中的狼疮性肾炎或NOD小鼠中的糖尿病)或疾病的实验诱导形式(例如胶原诱导性关节炎(CIA)或实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE))(Toubi及Shoenfeld，2004)。抗-CD40L mAb可抑制小鼠中的CIA，其阻断关节炎症的发生、针对胶原的血清抗体滴度、炎症细胞浸润至滑液下组织中以及软骨及骨的侵蚀(Durie等人，1993)。对于狼疮性肾炎及EAE 二者，已证实抗-CD40L亦可减轻进行性疾病，从而确认了 CD40-CD40L在疾病效应期中的作用(Kalled等人，1998) ; (Howard等人，1999)。亦在⑶40L缺陷型小鼠中研究⑶40-⑶40L相互作用在EAE发展中的作用，所述小鼠携带对髓磷脂碱性蛋白具有特异性的转基因T细胞受体。所述小鼠在经抗原初免后不会发展EAE，且⑶4+T细胞保持休眠且不产生INF- y (Grewal等人，1996)。此外，针对CD40的抑制性抗体在例如EAE等炎性疾病模型中显示有益效应。Lamann及合作者证实,拮抗性小鼠抗人⑶40mAb muroi2及此mAb的嵌合形式可在远亲杂交狨猴中有效防止慢性脱髓鞘性EAE的临床表达(Laman等人，2002) ； (Boon等人，2001)。随访研究显示，在狨猴EAE模型中，使用嵌合抗人CD40抗体的治疗性治疗降低MRI可检测炎·症并延迟已存在脑部损伤的扩大(Hart等人，2005)。在关节炎小鼠模型中测试具有激动活性的抗-CD40抗体，且获得一些矛盾性结果。如对免疫刺激剂所预期，显示激动性抗小鼠CD40mAb FGK45在CIA的DBA/1小鼠模型中可加重疾病(Tellander等人，2000)。然而，在另一慢性CIA模型FGK45中，以及另一激动性抗小鼠⑶40mAb (3/23)中，二者皆表现出积极治疗效应(Mauri等人，2000)。此治疗组假定，此治疗性治疗方案中的激动性抗体通过诱导朝向Th2反应的免疫偏离及降低IFN-Y含量且升高IL-4和IL-10的含量来产生有益效应(Mauri等人，2000)。亦已记录可通过阻断⑶40/⑶154相互作用来防止移植排斥。嵌合抗-⑶40拮抗剂ch 12在恒河猴肾异体移植研究中的应用表明，CD40的拮抗作用足以达成疾病缓解并将平均存活时间延长超过100天。在将ch 12与抗⑶86抗体组合且仅在开始异体移植研究时给予，之后使用环孢菌素(cyclosporine)进行延长治疗时，获得超过4年的平均存活时间，从而表明此组合可有效诱导耐受性(Haanstra等人,2005)。因此，有众多临床前研究证实，⑶40-⑶40L 二联体在有效的T细胞依赖性免疫应答的驱动中具有决定性作用。因此，业内公认阻断CD40信号传导为在例如RA、多发性硬化或牛皮癣等疾病中抑制致病性自身免疫应答的适宜且必需的治疗策略。然而，迄今为止，由于先前在研发中显示抗-CD40抗体具有显著副作用，故尚无CD40抗体获批用于所述病症的治疗性干预。因此，业内仍非常需要可用于干预⑶40-⑶40L的作用并阻断⑶40信号传导的治疗药物。可通过新颖人源化抗-CD40抗体来满足此需要，所述抗体特异性结合CD40，且其所显示的抗原结合特异性、亲和性及药物代谢动力学及药效学特性使得其可用于治疗性干预基于CD40的病症。专利技术概述本专利技术提供人源化单克隆抗体，其中该抗体特异性结合人CD40，其在B细胞增殖中具有IC50小于InM的拮抗活性且在高达100 μ g/ml的浓度不具有激动作用，且其中该抗体的特征还在于，该抗体在非人灵长类中的活体内半衰期为至少10天。人源化单克隆抗体的特征还在于，在小于30mg/kg的剂量下，抗体在短尾猴(cynomolgus monkeys)中的半衰期大于8天。在示例性实施方案中，本专利技术的抗体包含选自SEQ ID N0:1至SEQ IDN0:4中任一者的重链序列及选自SEQ ID N0:5至SEQ ID NO:8中任一者的轻链序列本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：R巴雷特，S布罗德，KA卡纳达，T利曾伯格，S辛格，
申请(专利权)人：贝林格尔英格海姆国际有限公司，
类型：
国别省市：
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