解淀粉芽孢杆菌Ba168及其发酵培养方法和应用技术

本发明专利技术公开了解淀粉芽孢杆菌Ba168及其制备方法和应用，其目的是提供一种植物病原菌的生物防治方法。该菌株已于2012年8月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC?No.6462。该菌株从秦岭原始森林土壤中分离获得，经过菌种活化、摇瓶发酵、种子液发酵和大发酵罐发酵得到发酵液，发酵液经过过滤浓缩、超滤膜分离、喷雾干燥和包装后制成杀菌剂。本发明专利技术具有对由尖孢镰刀菌引起的白术根腐病、西洋参根腐病和三七根腐病等根腐病害有很好的防治作用的优点。

【技术实现步骤摘要】
解淀粉芽孢杆菌Ba168及其发酵培养方法和应用
本专利技术属于利用有益微生物对植物病害进行生物防治的领域，具体涉及解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamylolquefaciens)Ba168菌株，以及该菌株的发酵生产及其发酵产物对防治植物病原菌的作用。
技术介绍
植物病害的流行不但引起作物减产，给人类造成重大经济损失，甚至带来灾难性后果。植物病害的危害还会导致农产品品质低劣，不堪使用或加工，甚至导致人畜中毒。为防治植物病害，化学农药因为具有成本低、见效快、省时省力等优点曾一度成为人们的首选，但是，化学农药一般不可降解，随着化学农药的大量使用，引发了环境污染、生态破坏、食品污染等事件。这使研究开发利用生物农药成为植物保护工作者的重要研究课题。生物农药是指利用生物活体或其代谢产物针对农业有害生物进行杀灭或抑制的制剂，具有安全、高效、无污染等特点，与保护生态环境和社会协调发展的要求相吻合，是未来农药发展的必然趋势。微生物农药是生物农药中应用最为广泛的一类，也是生物防治的重要材料。微生物源农药的主要成分是微生物活体及其次生代谢产物，由于微生物种类多样，其活性也很广泛，包括杀虫、杀菌、除草以及植物生长调节作用等。自然界中用于生防细菌的，主要有芽孢杆菌属、假单胞菌属。特别是近几年，利用微生物防治植物真菌性病害由于对环境安全，可以减缓病原菌产生抗药性，已经成为当前防治植物病害的主流方法。解淀粉芽孢杆菌是一种嗜温、好氧、产芽孢的杆状细菌，其生理特征多样，该菌在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，不污染环境，能产生多种抗菌素和酶，具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力。解淀粉芽孢杆菌不仅可以在土壤、植物根际体表等外界环境中广泛存在，而且是植物体内常见内生细菌，尤其是在植物的根、茎内部。解淀粉芽孢杆菌通过成功定殖至植物根际、体表或体内，改变其周围菌群环境和种类，与病原菌竞争植物周围的位点，并且分泌多种抗菌物质以抑制病原菌生长，同时诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，从而达到改良土壤和生防的目的。尖孢镰刀菌是一类既可侵染植物又可在土壤中生存的兼性寄生真菌，用化学农药难于防治，属于顽固性病害。该类病菌和其他植物病原菌一样，存在着种下分化，可侵染许多寄主植物，具有多种专化型。其中，侵染中草药的块根、块茎的一部分专化型为尖孢镰刀菌FusariumoxysporumShl，该菌可引起常见中草药的根腐病等病害，而块根、块茎和鳞茎等恰好是许多名贵中药材的药用部位，经济价值高，而尖孢镰刀菌的侵染使中药材的药用价值下降，另外，病原菌可以在病残体和土壤中过冬，一旦发病，笠年仍会引起作物病害，持续影响作物产量，给我国中药材产业造成巨大的损失。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开了一种解淀粉芽孢杆菌Ba168CGMCCNo.6462。本专利技术的第二个目的在于公开了解淀粉芽孢杆菌Ba168的发酵方法，以及由该方法制备所得的发酵液。本专利技术的第三个目的在于公开了解淀粉芽孢杆菌Ba168杀菌剂及其制备方法。本专利技术的第四个目的在于公开了上述解淀粉芽孢杆菌Ba168、由解淀粉芽孢杆菌Ba168制备所得的发酵液以及解淀粉芽孢杆菌Ba168杀菌剂在制备防治由尖孢镰刀菌属引起的作物根腐病药物中的应用。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种解淀粉芽孢杆菌Ba168，CGMCCNo.6462，该解淀粉芽孢杆菌Ba168的16SrDNA如序列表1所示。解淀粉芽孢杆菌Ba168的发酵方法，其中，所述发酵方法是以权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌Ba168为原料，包括下述步骤：(1)、菌种活化：将解淀粉芽孢杆菌Ba168菌种接种到LB试管斜面上面，于30℃活化培养48h，所述LB培养基配方为酵母浸膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15～20g，水1000ml，pH7.4～7.6，连续转接3代，确保菌株纯度后，再接种到种子液中使用。(2)、种子液的制备：从斜面上挑取菌接种到装有LB培养基的三角瓶中，于恒温振荡培养箱中振荡培养，即得到种子液，所述的LB培养基配方为：蛋白胨10g，NaCl10g，水1L，酵母浸膏5g，pH7.0；(3)、发酵培养：将种子液先后进行种子罐发酵培养和大规模工业发酵培养，得到发酵液；其中种子罐发酵培养和大规模工业发酵培养步骤如下：种子罐发酵培养：FJ液体培养基，装料系数0.7，培养条件：26～28℃，48h，接种量：9%，通气量：2.5L/min，搅拌转速：200r/min；大规模工业发酵培养：FJ液体培养基（20~36T），装料系数0.7，培养条件：26～28℃，60~70h，接种量：9%，通气量：2.0L/min，搅拌转速：150r/min；所述的FJ液体培养基配方为：黄豆饼粉2%，葡萄糖1%，淀粉1.5%，CaCO30.25%，K2HPO40.05%，MgSO4·7H2O0.25%，FeSO4·7H2O0.25%，其余为水，所列百分比为质量分数。由上述技术方案所述的解淀粉芽孢杆菌Ba168发酵方法制备所得的发酵液。解淀粉芽孢杆菌Ba168杀菌剂的制备方法，其中，所述制备方法是以由上述技术方案所述的解淀粉芽孢杆菌Ba168发酵液为原料，包括下述步骤：(1)、过滤浓缩发酵液：用草酸调节pH至4.5~5.0后，将发酵液通过截留分子量40000~100000k的无机陶瓷超滤膜过滤分离，操作温度为25~45℃，膜通量为50~60LMH，被截留在膜的进液侧的溶液为芽孢溶液，芽孢溶液浓缩倍数为6-7倍；(2)、喷雾干燥：向浓缩后的发酵液中添加发酵液质量1.0%的白炭黑、微细滑石粉、轻质碳酸钙或2500目超细重钙填料；再将芽孢溶液经喷雾制成粉末，即得到解淀粉芽孢杆菌Ba168杀菌剂，其中喷雾干燥的进口温度为170~190℃，出口温度为65~85℃，进料速度60mL/min，喷头压力0.10MPa。解淀粉芽孢杆菌Ba168发酵液，其中，所述解淀粉芽孢杆菌Ba168发酵液由上述技术方案所述的解淀粉芽孢杆菌Ba168发酵所得。解淀粉芽孢杆菌Ba168杀菌剂，其中，所述解淀粉芽孢杆菌Ba168是以由上述技术方案所述的解淀粉芽孢杆菌Ba168发酵液为原料，通过下述方法制备所得：(1)、过滤浓缩发酵液：用草酸调节pH至4.5~5.0后，将发酵液通过截留分子量40000~100000k的无机陶瓷超滤膜过滤分离，操作温度为25~45℃，膜通量为50~60LMH，被截留在膜的进液侧的溶液为芽孢溶液，芽孢溶液浓缩倍数为6-7倍；(2)、喷雾干燥：向浓缩后的发酵液中添加发酵液质量1.0%的白炭黑、微细滑石粉、轻质碳酸钙或2500目超细重钙填料；再将芽孢溶液经喷雾制成粉末，即得到解淀粉芽孢杆菌Ba168杀菌剂，其中喷雾干燥的进口温度为170~190℃，出口温度为65~85℃，进料速度60mL/min，喷头压力0.10MPa。上述技术方案所述一种解淀粉芽孢杆菌Ba168、上述技术方案所述的发酵液以及上述技术方案所述的解淀粉芽孢杆菌Ba168杀菌剂在制备防治由尖孢镰刀菌属引起的作物根腐病药物中的应用。根据上述技术方案所述的应用，其中，所述由尖孢镰刀菌属引起的作物根腐病为白术根腐病、西洋参根腐病和三七根腐病。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术的解淀粉芽孢杆菌Ba168CGMCCNo.6462本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种解淀粉芽孢杆菌Ba168，CGMCC？No.6462，该解淀粉芽孢杆菌Ba168的16SrDNA如序列表1所示。

【技术特征摘要】
1.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)Ba168，CGMCCNo.6462，该解淀粉芽孢杆菌Ba168的16SrDNA如序列表1所示。2.解淀粉芽孢杆菌Ba168的发酵方法，其特征在于：所述发酵方法是以权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌Ba168为原料，包括下述步骤：(1)、菌种活化：将解淀粉芽孢杆菌Ba168菌种接种到LB试管斜面上面，于30℃活化培养48h，所述LB培养基配方为酵母浸膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15～20g，水1000ml，pH7.4～7.6，连续转接3代，确保菌株纯度后，再接种到种子液中使用；(2)、种子液的制备：从斜面上挑取菌接种到装有LB培养基的三角瓶中，于恒温振荡培养箱中振荡培养，即得到种子液，所述的LB培养基配方为：蛋白胨10g，NaCl10g，水1L，酵母浸膏5g，pH7.0；(3)、发酵培养：将种子液先后进行种子罐发酵培养和大规模工业发酵培养，得到发酵液；其中种子罐发酵培养和大规模工业发酵培养步骤如下：种子罐发酵培养：FJ液体培养基，装料系数0.7，培养条件：26～28℃，48h，接种量：9％，通气量：2.5L/min，搅拌转速：200r/min；大规模工业发酵培养：FJ液体培养基，装料系数0.7，培养条件：26～28℃，60～70h，接种量：9％，通气量：2.0L/min，搅拌转速：150r/min；所述的FJ液体培养基配方为：黄豆饼粉2％，葡萄糖1％，淀粉1.5％，CaCO30.25％，K2HPO40.05％，MgSO4·7H2O0.25％，FeSO4·7H2O0.25％，其余为水，所列百分比为质量分数。3.由权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌Ba168发酵方法制备所得的发酵液。4.解淀粉芽孢杆菌Ba168杀菌剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法是以由权利要求3所述的解淀粉芽孢杆菌Ba168发酵液为原料，包括下述步骤：(...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨轩，翟枫，杨长锁，安德荣，
申请(专利权)人：杨凌绿都生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：