本发明专利技术公开了一株海洋细菌Pseudoalteromonas?issachenkonii?HZ，该菌株已于2011年12月09日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC?NO：M?2011456。本发明专利技术还公开了一种多糖，是由培养海洋细菌Pseudoalteromonas?issachenkonii?HZ所得到的。经实验证明，该多糖对重金属离子（尤其是Pb2+）具有较高的清除率，对自由基也有较好的清楚效率，抗氧化性能优良。该多糖对浑浊污水也有较好的絮凝能力。可见，在污水处理方面，本发明专利技术的菌株、多糖有着得天独厚的优势，比如制成添加剂等，相信在不久的将来，本发明专利技术的菌株、多糖在污水处理领域将占据一席之地。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株海洋细菌Pseudoalteromonas issachenkonii HZ及其产生的多糖，以及其应用。
技术介绍
随着工农业生产的发展和人们生活水平的提高，污水的排放量迅速増加，处理污水成为当前社会的难题之一。利用细菌处理污水是目前的热门研究，但尚无一种较为理想的菌种。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术提供了一株可以用于污水处理的海洋细菌Pseudoalteromonas issachenkonii HZ及其产生的多糖，以及其应用。本专利技术是通过以下技术方案实现的一株海洋细菌 Pseudoalteromonas issachenkonii HZ,该菌株已于 2011 年 12 月09日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO M 2011456。该菌株的特征为Pseudoalteromonas issachenkonii HZ为革兰氏阴性菌,短杆状，在Zobell 2216E固体培养基菌落大(直径3mm)，乳黄色，圆形，隆起，边缘较圆整，不透明，无迁移性。本专利技术的菌株是通过以下方式筛选得到的样品采集自山东荣成海域，取样时间为鲍鱼苗期幼体从附着基剥离时(5月中旬)。样品为刮取的板上IOcm2面积上的附着物，存放在2ml灭菌冻存管中，密闭保存在冰盒中，24小时内送回实验室。进行异养菌的分离和DNA的提取。将采集的样品用无菌海水稀释为10_3、10_4、10_5、10_6四个浓度，用灭菌的涂布器均匀涂布于2216E固体培养基平板上，25°C恒温培养48h，挑取形态差别显著的的菌落。用划线法进行纯化。通过苯酚-硫酸法对所得菌株是否产多糖进行检测，初筛多糖产量超过0. 5g/L，得到该产多糖菌株，通过DNA序列分析确定了其种属关系，属于Pseudoalteromonaso一种多糖,是由培养海洋细菌Pseudoalteromonas issachenkonii HZ所得到的，具体如下(I)培养海洋细菌 Pseudoalteromonas issachenkonii HZ 菌株经斜面培养、种子培养后得到种子培养液，接种到发酵培养基中，接种量2% 5%(体积百分数)，温度20 35°C，150 250r/min摇床培养30 40h，得发酵液；(2)提取发酵液5000rpm/min离心20min,过滤去除菌体，向上清液中加入3倍体积的95%こ醇(体积百分数)，静置8 12h，离心得到沉淀，即为蛋白质和多糖的混合物；(3)除杂蛋白将上述得到的蛋白质和多糖的混合物溶于水中，加入总体积1/4体积的Sevag溶剂(氯仿正丁醇=4 :1，体积比)，充分震荡lOmin，离心去除有机相；重复进行8次，得到粗多糖溶液；(4)分离纯化采用DEAE-52对粗多糖进行分级，用0-2M NaCl Tris-HCl (0. 01M)进行梯度洗脱，收集主峰；将收集到的主峰浓缩脱盐、冷冻干燥后，溶于0. IM NaCl溶液，用Sephadex GlOO层析，用0. IM NaCl洗脱，收集第一个洗脱峰，冷冻干燥后即得到多糖，命名为 EPS-I。所述斜面培养、种子培养对所属领域技术人员而言是常规的技术操作，在此不再赘述。所述培养所用的斜面培养基为Zobell 2216E培养基蛋白胨5. 0g，酵母膏I. Og,磷酸铁0. Olg，琼脂20. Og,陈海水1000ml，调ph至7. 6 7. 8。所述培养所用种子培养基为Zobell 2216E培养基蛋白胨5. 0g，酵母膏I. 0g，磷酸铁0. Olg,陈海水1000ml，调ph至7. 6 7. 8。 所述发酵培养基为牛肉膏0. 25%，蔗糖3%，海盐(硝酸铵0. 00016 %，硼酸0. 0022%，氯化钙0. 18%,磷酸氢ニ钠0. 0008 %，柠檬酸铁0.01%,氯化镁0.88%,溴化钾0. 008%，氯化钾0.055%,碳酸氢钠0.016%,氯化钠1.945%,硅酸钠0. 0004%，硫酸钠0. 0324%，氯化锶0. 0034%，氟化钠0. 00024% )，余量为水，pH7. 6 7. 8。所述百分数均为质量百分数。所述培养条件为温度30°C，200r/min摇床培养36h，此条件下，多糖产量可达到2.76g/L。经实验证明，该多糖对重金属离子(尤其是Pb2+)具有较高的清除率，对自由基也有较好的清楚效率，抗氧化性能优良。该多糖对浑浊污水也有较好的絮凝能力。可见，在污水处理方面，本专利技术的菌株、多糖有着得天独厚的优势，比如制成添加剂等，相信在不久的将来，本专利技术的菌株、多糖在污水处理领域将占据一席之地。附图说明一株海洋细菌 Pseudoalteromonas issachenkonii HZ,该菌株已于 2011 年 12 月09日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO M 2011456，保藏地址湖北省武汉市武汉大学，邮编430072。图I :菌体生长曲线和多糖发酵曲线。图2:紫外扫描数据示意图。图3 :梯度洗脱收集得到的主峰示意图。图4 :洗脱得到的洗脱峰示意图。图5-1 :多糖分子量线性回归方程，横坐标洗脱体积,纵坐标,摩尔质量，图由机器得出。图5-2 :多糖分子量及分子量分布示意图，横坐标洗脱体积；纵坐标检测器响应，此为扫描图片。图6 =EPS-I的红外谱图。图7 =EPS-IlH 核磁共振谱图(30°C)。图8 EPS-113C 核磁共振谱图(30°C )。图9 :胞外多糖EPSl对污水絮凝的作用示意图。图10 :胞外多糖和Vc对 OH的清除率示意图。图11 :胞外多糖EPSl和Vc对02_ 的清除率示意图。图12 =EPSl红外光谱图。图13 =EPSl吸收Pb2+红外光谱图。图14 :铅元素的线性标准曲线。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进ー步的说明。实施例I菌株的获得 样品采集自山东荣成海域，取样时间为苗期幼体(鲍鱼)从附着基剥离时(5月中旬)。样品为刮取的板上IOcm2面积上的附着物，存放在2ml灭菌冻存管中，密闭保存在冰盒中，24小时内送回实验室。进行异养菌的分离和DNA的提取。将采集的样品用无菌海水稀释为10_3、10_4、10_5、10_6四个浓度，用灭菌的涂布器均匀涂布于2216E固体培养基平板上，25°C恒温培养48h，挑取形态差别显著的的菌落。用划线法进行纯化。通过苯酚-硫酸法对所得菌株是否产多糖进行检测，筛选到一株多糖产量超过0. 5g/L的菌株，通过DNA序列分析确定了其种属关系，属于交替假单胞菌Pseudoalteromonas,对其进行了保藏，保藏编号为CCTCCNO M 2011456，保藏日期为2011年12月09日。实施例2提取多糖是培养海洋细菌Pseudoalteromonas issachenkonii HZ所得到的，具体如下(I)培养海洋细菌 Pseudoalteromonas issachenkonii HZ 菌株经斜面培养、种子培养后得到种子培养液，接种到发酵培养基中，接种量5% (体积百分数)，温度30°C，200r/min摇床培养36h，得发酵液；菌体生长曲线和多糖发酵曲线如图I所示，多糖产量达到 2. 76g/L。(2)提取发酵液5000rpm/min离心本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株海洋细菌Pseudoalteromonas？issachenkonii？HZ，其特征在于：该菌株已于2011年12月09日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC？NO：M？2011456。
【技术特征摘要】
1.一株海洋细菌Pseudoalteromonas issachenkonii HZ,其特征在于该菌株已于2011年12月09日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO M 2011456。2.一种多糖,其特征在于是由培养海洋细菌Pseudoalteromonas issachenkonii HZ所得到的。3.根据权利要求2所述的ー种多糖，其特征在于是通过以下方法得到的 (1)培养海洋细菌Pseudoalteromonasissachenkonii HZ菌株经斜面培养、种子培养后得到种子培养液，接种到发酵培养基中，接种量2% 5%，温度20 35°C，150 250r/min摇床培养30 40h，得发酵液； (2)提取发酵液5000rpm/min离心20min,过滤去除菌体，向上清液中加入3倍体积的95%こ醇，静置8 12h，离心得到沉淀，即为蛋白质和多糖的混合物； (3)除杂蛋白将上述得到的蛋白质和多糖的混合物溶于水中，加入总体积1/4体积的Sevag溶剂，充分震荡lOmin，离心去除有机相；重复进行8次，得到粗多糖溶液； (4)分离纯化采用DEAE-52对粗多糖进行分级，用0_2MNaCl Tris-HCl进行梯度洗脱，收集主峰；将收集到的主峰浓缩脱盐、冷冻干燥后，溶于0. IMNaCl溶液，用SephadexGlOO层析，用0. IM NaCl洗脱，收集第一个洗脱峰，冷冻干燥后即得到多糖。4.根据权利要求3所述的ー...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝鲁江，张晓飞，
申请(专利权)人：山东轻工业学院，
类型：发明
国别省市：
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