【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种荧光光素酶体外发光条件的确定，特别是涉及一种存在于海洋发光细菌胞内荧光光素酶在细胞外的发光表达。
技术介绍
据本专利技术人通过查阅资料、文献检索所知，发光细菌是指在正常的生理条件下，在细菌生长过程中伴随有可见荧光发射的一类细菌，这种可见荧光波长在450-4卯nm之间，在黑暗处肉眼可见。发光细菌的发光机理属酶促氧化反应。是由分子氧作用，胞内荧光光素酶催化，将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2)及八碳以上的长链脂肪醛(RCHO)氧化为FMN及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在波长为450 490nm的蓝绿光。目前国内尚未有荧光光素酶体外发光体系的建立。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立一种荧光光素酶体外发光的体系，实现荧光光素酶在活体细胞外的表达，并实现其催化发光的酶活性。本专利技术通过提取发光细菌胞内荧光光素酶粗酶制剂，通过优化各种底物对酶促反应的影响，建立最佳的荧光光素酶体外发光体系。其特征是(1) 最佳底物配比十二惊醛100|uL (27mM)、 FMN-Na53|uL (10mM)和Na2S204 lOOpL (34mM)，体系pH 7.0。(2) 发光检测在微弱发光仪中进行，检测条件是设置波长474nm， lmL酶液中，快速加入各底物，立刻进行定时跟踪测定，连续测定间隔时间为ls。本专利技术实现了荧光光素酶在活体细胞外的表达，构建了荧光光素酶体外发光体系。该体系底物配比简便可行，并可实现定量检测。附图说明附图1荧光光素酶体外发光体系的建立。附图2不同浓度十二烷酸对发光强度的影响。附图3不同浓度FMN-Na对发光强度的影响。附图4不...
【技术保护点】
一种荧光光素酶体外发光体系的建立，其特征是： （１）荧光光素酶采用发光细菌胞内提取的粗酶液 （２）采用的最佳底物为：十二烷醛、ＦＭＮ－Ｎａ和Ｎａ↓［２］Ｓ↓［２］Ｏ↓［４］ （３）体系ｐＨ７．０。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王静雪，林洪，朱兰兰，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]
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