一种玫烟色棒束孢的发酵培养方法技术

技术编号:15230161 阅读:190 留言:0更新日期:2017-04-27 16:20
本发明专利技术公开了一种玫烟色棒束孢的发酵培养方法,它包括液体发酵和固体发酵两个阶段,液体培养基含碳源为10‑30g/L,含氮源为5‑25g/L,含微量元素为50‑250mg/L,含基础盐为0.5‑1.5g/L,pH值为4‑8;固体培养基为玉米粉、大米、花生饼粉、麦麸、豆粕。本发明专利技术生产玫烟色棒束孢的孢子产量、纯度和活孢率都非常高,全部发酵培养周期在20天左右,具有生产周期短、成本低、效率高等优点,适用于玫烟色棒束孢的大规模生产。

A rod bundle spore p.fumosoroseus fermentation culture method

The fermentation culture method of the invention discloses a Isaria fumosorosea, it includes liquid fermentation and solid fermentation in two stages, the liquid medium containing carbon source is 10 30g/L, nitrogen source was 5 25g/L, containing trace elements for 50 250mg/L, containing 0.5 salt based 1.5g/L, pH value 4 8; solid medium for corn flour, rice, wheat bran, soybean meal, peanut meal. The production of Isaria fumosorosea spore yield, purity and viability are very high, all the fermentation period of 20 days, with short production cycle, low cost, high efficiency, suitable for mass production of Isaria fumosorosea.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物发酵领域,具体涉及一种玫烟色棒束孢的发酵培养方法
技术介绍
玫烟色棒束孢(Isariafumosaroseus)是一类广泛侵染多种昆虫的病原真菌,对柑橘木虱有很强的侵染作用,是柑橘木虱生物防治的优良菌种。玫烟色棒束孢的经济、快速、大规模生产是其大量用于生物防治实践的前提,单独使用液体发酵产生的繁殖体不耐储藏,目前玫烟色棒束孢发酵的方法较复杂,成本较高,培养过程中很容易出现杂菌污染现象。因此,研发新的高效、低成本大规模化生产培养基及操作简单、不易污染的培养方法,是玫烟色棒束孢发酵生产的关键问题。
技术实现思路
本专利技术涉及一种对柑橘木虱高效的病原真菌玫烟色棒束孢(Isariafumosaroseus)的液体-固体发酵培养基及其培养方法。本专利技术提供的发酵培养方法包括以下步骤:1)液体发酵阶段:以100ml液体培养基计,接种玫烟色棒束孢的孢子悬浮液1-8ml,于20-29℃,转速100-200r/min条件下培养1-3天,得菌丝液;2)固体发酵阶段:将菌丝液接种于固体培养基中,菌丝液的体积占固体培养基重量的4-12%,置于15-35℃下培养6-18天后收获,所述液体培养基含碳源为10-30g/L,含氮源为5-25g/L,含微量元素为50-250mg/L,含基础盐为0.5-1.5g/L,pH值为4-8;所述固体培养基为玉米粉、大米、花生饼粉、麦麸、豆粕中的一种或一种以上任意组合,加水至含水量为40-80%,pH值为4-8。优选地,所述碳源为蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、玉米粉浸出液和麦麸浸出液中的一种或一种以上任意组合。优选地,所含氮源为蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、豆粕粉、(NH4)2SO4、NH4Cl中的一种或一种以上任意组合。优选地,所述微量元素为镁盐、铜盐、锌盐、铁盐中的一种或一种以上任意组合。本专利技术的有益效果是:本专利技术采用液体-固体双相发酵方法生产玫烟色棒束孢的分生孢子,孢子产量、纯度和活孢率都非常高,全部发酵培养周期在20天左右,具有生产周期短、成本低、效率高等优点,适用于玫烟色棒束孢的大规模生产。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术进一步详细说明。实施例11)液体发酵阶段:以100ml液体培养基计,接种玫烟色棒束孢的孢子悬浮液3.6ml(每ml含1.0×107个孢子),于26℃,转速125r/min条件下培养3天,得菌丝液;2)固体发酵阶段:将菌丝液接种于固体培养基中,菌丝液的体积(ml)占固体培养基重量(g)的10%,置于25℃培养15天后收获。所述液体培养基含碳源(葡萄糖)为25g/L,含氮源(酵母粉)为25g/L,含微量元素(硫酸铜、硫酸锌、硫酸镁,重量为1:1:1)为150mg/L,含基础盐(磷酸氢二钾、氯化钾,重量为1:1)为1g/L,pH值为6。高压湿热灭菌30min,冷却后备用。所述固体培养基为玉米粉300g,加水700g,混匀,pH值为5。高压湿热灭菌30min,冷却后备用。将收获的孢子粉进行烘干测量,每500g干基质产孢子粉8.39g,每g孢子粉含孢子1.61×1011个,达1000亿个以上,活孢率达到92.34%。实施例21)液体发酵阶段:以100ml液体培养基计,接种玫烟色棒束孢的孢子悬浮液1ml,于20℃,转速200r/min条件下培养1天,得菌丝液;2)固体发酵阶段:将菌丝液接种于固体培养基中,菌丝液的体积(ml)占固体培养基重量(g)的4%,置于15℃培养18天后收获。所述液体培养基含碳源(蔗糖、玉米粉浸出液,重量为3:1)为10g/L,含氮源(蛋白胨、NH4Cl,重量为4:1)为5g/L,含微量元素(硫酸铜)为50mg/L,含基础盐(氯化钠)为0.5g/L,pH值为8。所述固体培养基为花生饼粉600g,加水400g,混匀,pH值为8。将收获的孢子粉进行烘干测量,每500g干基质产孢子粉6.86g,每g孢子粉含孢子9.72×1010个,活孢率达到89.35%。实施例31)液体发酵阶段:以100ml液体培养基计,接种玫烟色棒束孢的孢子悬浮液8ml,于29℃,转速100r/min条件下培养2天,得菌丝液;2)固体发酵阶段:将菌丝液接种于固体培养基中,菌丝液的体积(ml)占固体培养基重量(g)的12%,置于35℃培养8天后收获。所述液体培养基含碳源(麦芽糖、麦麸浸出液,重量为5:1)为30g/L,含氮源(蛋白胨、酵母粉,重量为1:1)为25g/L,含微量元素(硫酸锌)为250mg/L,含基础盐(氯化钠、氯化钾,重量为2:1)为1.5g/L,pH值为4。所述固体培养基为麦麸、豆粕各100g,加水800g,混匀,pH值为8。将收获的孢子粉进行烘干测量,每500g干基质产孢子粉7.28g,每g孢子粉含孢子6.59×1010个,活孢率达到87.77%。实施例41)液体发酵阶段:以100ml液体培养基计,接种玫烟色棒束孢的孢子悬浮液5.4ml,于24℃,转速160r/min条件下培养2天,得菌丝液;2)固体发酵阶段:将菌丝液接种于固体培养基中,菌丝液的体积(ml)占固体培养基重量(g)的8%,置于30℃培养14天后收获。所述液体培养基含碳源(蔗糖)为15g/L,含氮源(牛肉膏)为20g/L,含微量元素(硫酸铜、硫酸锌、硫酸镁、硫酸铁,重量为1:1:1:1)为200mg/L,含基础盐(磷酸氢二钾、氯化钾,重量为1:1)为1.2g/L,pH值为7。所述固体培养基为花生饼粉400g,加水600g,混匀,pH值为7。将收获的孢子粉进行烘干测量,每500g干基质产孢子粉8.07g,每g孢子粉含孢子1.18×1011个,活孢率达到90.65%。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种玫烟色棒束孢的发酵培养方法,其特征在于包括以下两个步骤:1)液体发酵阶段:以100ml液体培养基计,接种玫烟色棒束孢的孢子悬浮液1‑8ml,于20‑29℃,转速100‑200r/min条件下培养1‑3天,得菌丝液;2)固体发酵阶段:将菌丝液接种于固体培养基中,菌丝液的体积占固体培养基重量的4‑12%,置于15‑35℃下培养6‑18天后收获,所述液体培养基含碳源为10‑30g/L,含氮源为5‑25g/L,含微量元素为50‑250mg/L,含基础盐为0.5‑1.5g/L,pH值为4‑8;所述固体培养基为玉米粉、大米、花生饼粉、麦麸、豆粕中的一种或一种以上任意组合,加水至含水量为40‑80%,pH值为4‑8。

【技术特征摘要】
1.一种玫烟色棒束孢的发酵培养方法,其特征在于包括以下两个步骤:1)液体发酵阶段:以100ml液体培养基计,接种玫烟色棒束孢的孢子悬浮液1-8ml,于20-29℃,转速100-200r/min条件下培养1-3天,得菌丝液;2)固体发酵阶段:将菌丝液接种于固体培养基中,菌丝液的体积占固体培养基重量的4-12%,置于15-35℃下培养6-18天后收获,所述液体培养基含碳源为10-30g/L,含氮源为5-25g/L,含微量元素为50-250mg/L,含基础盐为0.5-1.5g/L,pH值为4-8;所述固体培养基为玉米粉、...

【专利技术属性】
技术研发人员:张宏宇刘亚茹王珊珊
申请(专利权)人:华中农业大学
类型:发明
国别省市:湖北;42

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