一株玫烟色拟青霉及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株玫烟色拟青霉及其应用。本发明专利技术所提供的玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)TRCC22001保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为：CGMCC No.7993，以及本菌株在防治刺吸式口器害虫方面的应用。

【技术实现步骤摘要】
一株玫烟色拟青霉及其应用
本专利技术涉及一种玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus),同时还涉及一种该玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)的制备方法,及其在防治刺吸式口器害虫中的应用。
技术介绍
随着可持续农业观的建立，探索无公害、无污染的生物防治措施已成为植物病害综合治理中的重要课题，日益受到世界各国的重视。 据不完全统计，世界上记载的虫生真菌约100属800多种。在我国已报道的达405种，其中虫草属80种，寄生线虫的真菌10种，寄生昆虫的真菌种类215种，报道的新种达24种。我国自50年代以来，开发应用的昆虫病原真菌约20种，使用面积最广的是白僵菌和绿僵菌。 昆虫病原真菌是指那些在寄主正常生理条件下能直接侵入体内、增殖和迅速引起死亡的类群。它们以吸收血淋巴中的养分、分解寄主组织或产生有毒代谢产物而杀死昆虫。在引起昆虫传染性疾病的致病微生物中，由真菌引起昆虫死亡的情形最多，约占60%。同时，昆虫病原真菌种类繁多，对虫口密度起着重要的调节作用，所以利用昆虫病原真菌种类资源进行“以菌治虫”应是生物防治工作的重要组成部分。昆虫病原真菌的致病机理:昆虫病原真菌从孢子萌发到菌体重新在虫体上产生孢子一般分为10个阶段:(I)孢子附着于寄主表皮；(2)孢子萌发；(3)穿透表皮；(4)菌丝在血腔内生长；(5)毒素产生；(6)寄主死亡；(7)菌丝侵入寄主的所有器官；(8)菌丝穿出表皮；(9)产生孢子；(10)侵染单位的扩散。只要完成了前四个阶段，就完成了对寄主的入侵和感染；当病原真菌在体内的菌丝大量增殖时，就可导致寄主死亡。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种防治刺吸式口器害虫的昆虫病原真菌一玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)。其 rDNA ITS1-5.8S-1TS2 序列: 5，-TCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTAACGAGTTTTTTCAACTCCCTAACCCTTTGTGAACATACCTATCGTTGCTTCGGCGGACTCGCCCCGGCGTCCGGACGGCCCTGCGCCGCCCGCGACGGACCCAGGCGGCCGCCGGAGACCCACAAATTCTGTTTCTATCAGTCTTTCTGAATCCGCCGCAAGGCAAAACAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGCATTCTGGCGGGCATGC CTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCGACACCTTCGGGGGAGTCGGCGTTGGGGACCGGCAGCATACCGCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGTAGTACTCCAACGCGCACCGGGAACCCGACGCGGCCACGCCGAAACACCCAACTTCTGAACGTTGACCTCGGATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAA-3，。 同时，本专利技术的目的还在于提供一种玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosoroseus)的菌种培养方法和固体培养方法。 更进一步地，本专利技术的目的在于提供了一种玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosoroseus)的应用。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案采用了一种玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus),其保藏号为 CGMCC N0.7993。 同时，本专利技术的技术方案采用了一种玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosoroseus)的菌种培养方法，(I)斜面种子培养。斜面菌种培养基为改良式PDA:20%马铃薯，2%蔗糖，0.2%蛋白胨，0.1% K2HPO4.3H20，0.3% NaNO3,0.05% MgSO4.7Η20，0.05%KC1，0.01% FeSO4, 2%琼脂，水1000ml。121摄氏度高压蒸汽灭菌30min。试管接种后放置26摄氏度恒温培养1d备用。(2)液体种子培养。培养基:改良式PDA (去琼脂)。将其装Λ 500ml三角瓶，每瓶装100ml，121摄氏度高压蒸汽灭菌30min。接入试管斜面菌种(每支接两瓶)，放置摇床(180转/ min) 26摄氏度培养60h备用。 同时，本专利技术的技术方案采用了一种玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosoroseus)的固体培养方法:固体培养基为70%麦麸+30%米糠。按固体培养基配比称取原料，加1.2倍水充分拌匀，过夜后121摄氏度高压蒸汽灭菌30min备用。 进一步地，本专利技术的技术方案采用了一种玫烟色拟青霉(Paecilomycesfumosoroseus)在防治刺吸式口器害虫方面的应用。 本专利技术所涉及的玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)在对小菜蛾防治过程中，玫烟色拟青霉孢子粉对小菜蛾幼虫的死亡率为76.2%，玫烟色拟青霉孢子悬浮液对小菜蛾幼虫的死亡率为59.8%，玫烟色拟青霉孢子培养液对小菜蛾幼虫的死亡率为58.5%。 本专利技术所涉及的玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)在对茶小绿叶蝶防治过程中，防效最闻可达71.3%。 本专利技术的菌株:玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)已经保藏与中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为:中国.北京.北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物所，保藏日期为2013年08月13日，其保藏编号为 CGMCC N0.7993。 【具体实施方式】 : 实施例1TRCC22001菌株的鉴定: 分子系统学鉴定，DNA提取方法:采用石英砂研磨CTAB提取法(Scott et al.，2000)。 遗传标记:rDNAITS1-5.8S-1TS2，扩增引物:ITS5, ITS4(White et al.，1990)。 PCR扩增反应条件:先94°C加热3分钟使模板DNA变性，然后进入下列温度循环:94 V变性30秒，50 V退火30秒，72 °C延伸45秒，共进行35个循环，最后在72 °C延伸5分钟(Wang,2012)。 PCR 产物检测和测序:PCR 产物与 10bp DNA ladder (MBI Fermentas)用 2.0% 的琼脂糖凝胶(agarose gel)在0.5 X TBE电泳缓冲液中于80V电压下电泳20分钟，然后置于 0.5 μ g / ml的溴乙淀(EB, ehidium bromide)溶液中染色15分钟,在波长365和254nm的紫外光下检测为明显单一条带的产物由擎科生物技术有限公司纯化后用ABI3700 (AppliedB1systems)进行双向直通测序。 数据处理和统计学分析:原始序列用生物软件B1edit7.0.9(Hall，1999)编辑后本文档来自技高网...

【技术保护点】
玫烟色拟青霉菌株，其于2013年8月13日保藏在中国微生物菌种保管管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号为7993。

【技术特征摘要】
1.玫烟色拟青霉菌株，其于2013年8月13日保藏在中国微生物菌种保管管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号为7993。2.玫烟色拟青霉的菌种培养方法，其特征在于:(I)斜面种子培养，斜面菌种培养基为改良式 PDA:20%马铃薯，2%蔗糖，0.2%蛋白胨，0.1% K2HPO4.3H20,0.3% NaNO3,0.05%MgSO4.7Η20，0.05% KC1，0.01% FeSO4, 2%琼脂，水 1000 毫升；121 摄氏度高压蒸汽灭菌 30分钟；试管接种后放置26摄氏度恒温培养10天备用；(2)液体种...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓燕，梁小文，王根豪，周立峰，李肖宇，马忠岩，肖筱成，钱凤，芦茜，
申请(专利权)人：江西天人生态股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36