米曲霉TJTSW001及其在中药淡豆豉发酵中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种米曲霉TJTSW001及其在中药淡豆豉发酵中的应用，该米曲霉于2014年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.8945。该米曲霉菌种为从淡豆豉中分离，经60Co和紫外诱变筛选得到。该菌种具有很强的产生糖苷酶活性的能力，可将大豆异黄酮水解为大豆苷元和糖类。本发明专利技术的菌株在中药淡豆豉发酵生产中能够发挥重要作用，可以获得高含大豆苷元的淡豆豉，从而可以增加其功效性，具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
米曲霉TJTSW001及其在中药淡豆豉发酵中的应用
本专利技术涉及米曲霉，尤其是涉及一种米曲霉TJTSW001及其在中药淡豆豉发酵中的应用。
技术介绍
淡豆豉是一味常用的传统中药，始载于《名医别录》，历代本草都有记载，它是常用中成药“银翘解毒片”处方的主要药味之一，也是历代《中国药典》的收录品种。本品为豆科植物大豆的成熟种子的发酵加工品，除黑色种皮品系的大豆为主要原料外，还用桑叶、青蒿等药材配以其中进行发酵。中医传统应用本品于临床的功效主治为:解表、除烦、宣发郁热。用于感冒、寒热头痛、烦躁胸闷、虚烦不眠等。 大豆异黄酮是大豆的主要生理活性成分，现代研究表明其具有如下功用: (I)防癌、肿瘤及抗癌肿瘤作用。 (2)预防骨质疏松。 (3)降胆固醇和心脏保护作用。 (4)神经保护及抗神经退行性疾病等等。 大豆异黄酮在大豆中，主要有两种存在形式，一种为游离型苷元，包括染料木素(又称大豆苷元，金雀异黄素)和黄豆苷，另一种为结合型的糖苷。糖苷主要以丙二酰染料木素，丙二酰大豆苷，染料木苷，大豆苷的形式存在。大豆中主要以结合型的糖苷为主，游离的苷元占比相当少，约占总量的2-3%。需要指出的是，苷元的活性要远高于糖苷。结合型的糖苷需要水解成苷元才能发挥作用。因此，如果能将糖苷水解成苷元的形式，将获得更高的生理活性。郭文勇通过实验发现(中药淡豆豉的质量评价方法及其“解表除烦”作用机制研究，硕士学位论文，2004年)淡豆豉中的异黄酮与其“解表除烦“的功效存在一定联系。因此，获得更高活性的大豆异黄酮苷元，对提高淡豆豉的药效有十分显著的现实意义。 中药淡豆豉发酵用的微生物，绝大多数均记载为自然发酵的方式，如《中华人民共和国药典》2010版，关于淡豆豉的记载“用煎过的桑叶、青蒿渣覆盖，闷使发酵至黄衣上遍时，取出，除去药渣。洗净，置容器内再闷15-20天，至充分发酵，香气溢出时，取出，略蒸，干燥，即得。”此外，同样的表述在《湖南省中药炮制规范》1983版，《上海市中药炮制规范》2008版中等均出现过。毋庸置疑，上述发酵的过程中存在众多微生物的共同作用。但从长“黄衣”，以及相关研究可以明确，米曲霉在其发酵的过程中占据着十分优势的地位。《浙江省中药炮制规范》2005版则十分明确的表述了接种米曲霉孢子进行发酵。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了解决上述问题，提供一种米曲霉TJTSW001，该米曲霉菌株可高产糖苷酶，可以高效的将结合型的大豆异黄酮水解成苷元和糖。 本专利技术的另一目的是应用米曲霉菌株TJTSW001发酵生产中药淡豆豉，获得高含苷元的中药淡豆豉。 本专利技术提供的米曲霉菌株是(Aspergillus oryzae)TJTSW001,该菌株已于2014年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为CGMCC N0.8945，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所。 该菌株是经过60Co和紫外复合诱变获得。该菌株具有很高的产糖苷酶活性，利用该菌株生产中药淡豆豉可以获得高含苷元的，大幅高于目前文献报道淡豆豉中苷元含量。 本专利技术所提供的米曲霉菌株，是通过6tlCo和紫外诱变复合诱变获得的。 首先，将生长好的米曲霉孢子用无菌水洗下，制成孢子悬液，然后将该孢子悬液置于辐照剂量为20ky的6tlCo照射下，进行诱变。诱变结束的孢子悬液，倒入平皿上，在紫外灯的照射下，进行二次诱变。诱变完成后，在黑暗的环境中静止片刻，以防止光复活。 然后，在筛选培养基上进行筛选培养，筛选培养基以大豆异黄酮为惟一碳源，以(NH4)2SO4S氮源，以在筛选培养基上形成单个菌落为合适稀释度。以菌落大小为挑选依据，选择出目标菌。 本专利技术所获得的米曲霉(Aspergillus oryzae)TJTSW001,可以在以大豆异黄酮为惟一碳源，以(NH4)2SO4为氮源的培养基上生长良好，培养三天，其菌落直径可达3厘米。进一步利用其发酵淡豆豉，测定其糖苷酶。 本专利技术具有如下有益效果: 本专利技术所获得米曲霉(Aspergillus oryzae)TJTSW001,将其运用在中药淡豆豉的生产上，可以获得高含大豆苷元的淡豆豉，从而可以增加其功效性，具有广泛的前景。 【具体实施方式】 为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。 本专利技术所提供的米曲霉菌株，是通过6tlCo和紫外诱变复合诱变获得的。制备过程如下: 首先，将生长好的米曲霉孢子用无菌水洗下，制成孢子悬液，然后将该孢子悬液置于辐照剂量为20ky的6tlCo照射下，进行诱变。诱变结束的孢子悬液，倒入平皿上，在紫外灯的照射下，进行二次诱变。诱变完成后，在黑暗的环境中静止片刻，以防止光复活。 然后，在筛选培养基上进行筛选培养，筛选培养基以大豆异黄酮为惟一碳源，以(NH4)2SO4S氮源，以在筛选培养基上形成单个菌落为合适稀释度。以菌落大小为挑选依据，选择出目标菌。 本专利技术所获得的米曲霉(Aspergillus oryzae)TJTSW001,可以在以大豆异黄酮为惟一碳源，以(NH4)2SO4为氮源的培养基上生长良好，培养三天，其菌落直径可达3厘米。进一步利用其发酵淡豆豉，测定其糖苷酶。 实施例1: 米曲霉(Aspergillus oryzae)TJTSffOOl与其出发菌株在筛选培养基上生长情况比较。 将米曲霉(Aspergillus oryzae)TJTSW001和其出发菌株同时接种在筛选培养基上(大豆异黄酮为惟一碳源，(NH4)2SO4为惟一氮源)，置于35°C的霉菌培养基上培养,观察其菌落大小(参见表1)。 表1 本文档来自技高网...

【技术保护点】
米曲霉TJTSW001,该米曲霉(Aspergillus oryzae)于2014年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.8945。

【技术特征摘要】
1.米曲霉TJTSW001,该米曲霉(Aspergillusoryzae)于2014年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈小林，赵敏，邵丽芳，王瑞，
申请(专利权)人：杭州桐君堂生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33