本发明专利技术涉及一种棘孢曲霉ZJ(AspergillusaculeatusZJ)菌株及其应用。所说的棘孢曲霉ZJ,保藏编号为CCTCC?No.M2011264。该菌株主要用于转化槐角的有用成分生产5,7,8,4’-四羟基异黄酮。具体方法是用专一性强的棘孢曲霉ZJ或其产生的酶作用于槐角或其提取液,使其中的槐角苷等糖苷类化合物、染料木素等经过转化,生成5,7,8,4’-四羟基异黄酮,通过常规方法分离提取(纯度可达98%)。本发明专利技术提供了一种专一性强,转化效率高的棘孢曲霉转化槐角苷生成5,7,8,4’-四羟基异黄酮的方法,条件温和,过程绿色,工艺与设备要求简单,有很好的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种制备5，7，8，4’ -四羟基异黄酮的新方法，特别是用微生物或酶转化染料木素及其糖苷生成5，7，8，4’ -四羟基异黄酮的方法。属于中药新药研究开发领域。
技术介绍
5，7，8，4’-四羟基异黄酮分子式=C15HltlO6分子量386 分子结构5，7，8，4’-四羟基异黄酮，固体呈微黄色，溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂，难溶于水。5，7，8，4’ -四羟基异黄酮属异黄酮类物质，是染料木素加上一个羟基后的衍生物。染料木素是一种雌激素样化合物药物，被称为植物性雌激素类药物，医药中主要用于治疗妇女病和老年性骨质疏松症(中国专利CN101497594A)。此外在抗月中瘤(Sanjeev Banerjee et al, 2005, Molecular evidence for increased antitumoractivity of gemcitabine by genistein invitro and invivo using an or the topic model of Pancreatic cancer[J]. Cancer Res. 2005, 65: 9064-9072)、抗炎、阵痛、降尿酸(黄敬群等.染料木素抗炎、镇痛、降尿酸作用实验研究[J].西北药学杂志，2001，26(3): 193-195)、降血脂(金永生，刘超美.金雀异黄素的药理作用[J]. 国外医药与植物药分册等，2002，17(5): 191-193)、体外抗肝纤维化(李建芳，陈必成等.染料木素对硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠PDGF-BB表达的影响[J].肝胆胰外科杂志，2009，21(3): 118-125)等方面都具有明显的生物活性。染料木素作为药物使用时，进入人体内的染料木素一部分被肠内细菌转化，一部分自小肠黏膜吸收经代谢，5，7，8，4’-四羟基异黄酮就是代谢产物之一。(杨秀伟.中药成分的吸收、分布、代谢、排泄、毒性与药效(上).北京中国医药科技出版社，2006)。由染料木素衍生而来的5，7，8，4’ -四羟基异黄酮是酪氨酸酶的有效抑制剂， 具有很强的酪氨酸酶抑制活性(TE-SHENG CHANG. Two potent suicide substrates ofmushroom tyrosinase:5, 7, 4' -trihydroxyisoflavone and 5,7,8,4' -tetrahydroxyisoflavone[J], FoodChem, 2007, (55): 2010-2015),研究表明黄酮母核上的羟基的数量对黄酮类化合物的活性影响很大(Sabine Ε. Kulling, Doris Μ. Honig, Thomas J. Simat, Manfred. Metzler. Oxidative in viruo metabolism of the soy phytoestrogens daidzein and genistein[J]. J. Agric. Food Che, 2000, 48(10) : 4963-4972)。研究发现异黄酮的A环上5，7位及B环上的4’的羟基是抑制前列腺癌和乳腺癌的主要基团。由于酚羟基作为供氧体能与自由基反应使之形成相应的离子或分子，大豆异黄酮含有的酚羟基可减少氧自由基，降低其对生物大分子的损伤，可能减少了肿瘤的发生(毛峻琴， 宓鹤鸣.大豆异黄酮的研究进展[J].第二军医大学药学院，2000，(31): 61-64)。因此比染料木素多一个羟基的5，7，8，4’ -四羟基异黄酮在水溶性方面更有研究价值。酪氨酸酶(tyrosinase)广泛存在于自然界中，是黑色素生物合成的关键酶和限速酶。酪氨酸酶的活性与色素沉着性疾病、食品褐变等均有密切关系。酪氨酸酶抑制剂的研发对人类皮肤色素疾病的治疗、食品保鲜及农业抗虫领域具有重要意义。(李娜，鲁晓翔.酪氨酸酶抑制剂的研究进展[J].食品工业科技，2009，(7): 406-409)。目前氢醌、熊果苷、曲酸、壬二酸等酪氨酸酶抑制剂已用于临床(闫军，陈声利，李春阳.酪氨酸酶抑制剂及对黑素生物合成的影响[J].国外医学皮肤性病医学分册，2003，29(4): 250-253), 5，7，8，4’ -四羟基异黄酮作为一种酪氨酸酶抑制剂有重要的研究价值。染料木素广泛存在于植物的叶子和种子中，但含量很低，如葛根 0. 065%-0. 078%,大豆0. 04%-0. 24%;红车轴草约0. 3% ；豆豉0. 34%,从大豆中得到染料木素是目前工业化的方法，成品收率约为原料的0.04%。(中国专利CN101497594A)，因含量低的原因，分离成本较高。而槐角中含染料木素含量为0.5-1%比大豆等高几十倍。大豆中染料木苷含量在0. 025%。槐树在全国很多地方都能生长，槐角资源丰富，槐角含有大量糖苷化合物，其中染料木素的糖苷化合物-染料木苷的含量很高，有的产地可达9. 14%(房敏峰，曲欢欢，文颂华，李静，孙文基.槐角不同炮制品种槐角苷的含量测定[J]. 中药材，2007，30(1): M-25)。现有的研究大多从大豆发酵产品中提取分离得到了 5, 7,8,4'-四羟基异黄酮，TE-SHENG，CHANG利用黑曲霉从500g大豆胚芽固体曲中提取得至Ij 33. 5mg5，7，8，4，_ 0 基异黄Sf (Te-Sheng Chang. Mushroom tyrosinase inhibitory effct isofisoavone sisolated from soygerm koji fermented with Aspergillus oryzae BCRC32288 [J]. Food Chemistry, 2007，(105) : 1430-1438)，收率仅为 0. 0067 且纯度未提，大豆中染料木素的含量在0. 04-0. 1%,染料木苷的含量在0. 0 左右(毛峻琴，宓鹤鸣.大豆异黄酮的研究进展[J].中草药，2000，31(1): 60-64)，的因此槐角是生产染料木苷或染料木素或5，7，8，4’ -四羟基异黄酮的理想原料。本专利技术利用特异性强的棘孢曲霉将槐角中高含量的染料木苷等高效地转化为 5，7，8，4’ -四羟基异黄酮，从槐角得到5，7，8，4’ -四羟基异黄酮产品。该方法条件温和 (常温)，操作简便。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一株棘孢曲霉菌，以及利用该项菌转化槐角得到 5，7，8，4’-四羟基异黄酮的方法。所述的一株棘孢曲霉菌，是棘孢曲霉ZjrAs/^r^/BM aculeatus ZJ入该菌株的保藏编号是 CCTCC NO :Μ 2011264ο本专利技术所说的制备5，7，8，4’-四羟基异黄酮的方法，其特征在于包含以下步骤 将棘孢曲霉ZJ (Aspergillus aculea tusZJ )接种到含有染料木素或染料木苷的槐角粉末或提取液中，在一定条件下进行转化；得到的物料经分离纯化处理，得到 5，7，8，4’ -四羟基异黄酮; 或者是将棘孢曲霉Z J (Aspergillus aculea tusZJ )的菌曲加入到含有染料木素或染料木苷的槐角粉末或提取液中，进行本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种棘孢曲霉ＺＪ （Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ ＺＪ）菌株，其特征在于该菌株的保藏编号是ＣＣＴＣＣ ＮＯ：Ｍ ２０１１２６４。
【技术特征摘要】
1.一种棘孢曲霉ZJ {Aspergillus aculeatus ZJ)菌株，其特征在于该菌株的保藏编号是 CCTCC NO :Μ 2011264ο2.一种制备5，7，8，4’ -四羟基异黄酮的方法，其特征在于包含以下步骤将棘孢曲霉ZJ (Aspergillus aculea tuslS)接种到含有染料木素或染料木苷的槐角粉末或提取液中，在一定条件下进行转化；得到的物料经分离纯化处理，得到 5，7，8，4’ -四羟基异黄酮;或者是将棘孢曲霉ZJ (Aspergillus aculeatus ZJ) 的菌曲加入到含有染料木素或染料木苷的槐角粉末或提取液中，进行生物转化，得到的物料经分离纯化处理，得到 5，7，8，4’-四羟基异黄酮;或者是将棘孢曲霉ZJ (Aspergillus aculeatuslS)中得到的酶液或酶粉加入到含有染料木素或染料木苷的槐角粉末或提取液中，进行生物转化，...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈育如，张玉千，玄燕，唐超，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：84
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