一种快速检测H1亚型和H5亚型禽流感病毒的胶体金测试试纸条制造技术

本实用新型专利技术涉及一种快速检测H1亚型和H5亚型禽流感病毒的胶体金测试试纸条，其包括底板、样品垫、涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜I、涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜II、包被膜和吸水纸，其中包被膜的底面粘贴在底板上面，在该包被膜两端的上面分别粘贴玻璃纤维膜I和吸水纸，在该玻璃纤维膜I远离包被膜的一端的上面粘贴玻璃纤维膜II，在玻璃纤维膜II远离包被膜的一端的上面粘贴样品垫；在所述包被膜的上面设有检测线I、检测线II和质控线，检测线I和检测线II均包被抗禽流感病毒的抗体，质控线包被抗鼠抗体。该试纸条能同时检测出该样品是否含有H1和/或H5亚型禽流感病毒，具有特异性好、灵敏度高、检测速度快等优点。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属于禽类疫病检测
，具体涉及一种能同时对Hl亚型和H5亚型禽流感病毒进行检测的胶体金二联检测试纸条，可用于免疫接种效果的监控、个体免疫状态的确定。
技术介绍
禽流感(avian influenza, Al)是由禽流感病毒(AIV)引起的一种重要的禽类传染病。鸡、火鸡、鸭和鹌鹑等家禽及野鸟均可感染，发病情况轻重不一，有的急性死亡，有的无症状带毒。禽流感大致可以分为低致病性禽流感和高致病性禽流感，后者往往是一种毁灭性的疾病,有时引起人感染、发病甚至死亡。这间接导致了肉类市场供求关系混乱、禽产 品出口受阻、政府财政负担加重和公众恐慌，因此对禽类是否被禽流感病毒感染进行检测具有非常重大的意义。目前，对禽流感病毒的诊断方法主要有病原学检测、血清学试验诊断等方法。但病原学检测方法因其病毒分离时间长，要求条件高，分离率低等因素的影响，很难对样品进行大批量检测；而采集样品进行血清学试验，对仪器设备和操作人员有较高的要求，不易于在基层的推广。因此，上述两种方法在使用中受到很大的限制。
技术实现思路
本技术目的在于提供一种操作方便、快速、有效地检测Hl亚型和H5亚型禽流感病毒的胶体金测试试纸条。为了实现上述目的，本技术采用如下技术方案一种快速检测Hl亚型和H5亚型禽流感病毒的胶体金测试试纸条，试纸条包括底板、样品垫、涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜I、涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜II、包被膜和吸水纸，其中，包被膜的底面粘贴在底板上面，在该包被膜两端的上面分别粘贴玻璃纤维膜I和吸水纸，在该玻璃纤维膜I远离包被膜的一端的上面粘贴玻璃纤维膜II，在玻璃纤维膜II远离包被膜的一端的上面粘贴样品垫；在所述包被膜的上面设有检测线I、检测线II和质控线，所述检测线I和检测线II均包被抗禽流感病毒的抗体，质控线包被抗鼠抗体。具体的，所述玻璃纤维膜I为涂覆胶体金颗粒标记抗Hl亚型禽流感病毒的单克隆抗体的玻璃纤维膜I，所述玻璃纤维膜II为涂覆胶体金颗粒标记抗H5亚型禽流感病毒的单克隆抗体的玻璃纤维膜II。所述检测线I包被抗Hl亚型禽流感病毒的单克隆抗体，检测线II包被抗H5亚型禽流感病毒的单克隆抗体；抗Hl亚型禽流感病毒的单克隆抗体、抗H5亚型禽流感病毒的单克隆抗体及抗鼠抗体分别固定于包被膜上并呈三条线平行排列，形成所述的检测线I、检测线II和质控线。上述的抗Hl亚型和抗H5亚型禽流感病毒抗体均为高纯度的单克隆抗体，按照本领域的常规技术即可制得，故此处不再赘述。底板可以用PVC材料制成，包被膜可以是硝酸纤维素膜。本技术采用双抗体夹心法检测抗原，通过对金标记抗体pH、浓度以及包被膜上包被抗体浓度的调整，使其能够产生特异条带，从而满足农户、基层及个人对于Hl亚型和H5亚型禽流感病毒检测的需求。本技术在对一份样品进行检测时，能同时检测出该样品是否含有Hl亚型或H5亚型禽流感病毒，其具有特异性好、灵敏度高、检测速度快等优点，且不需要使用仪器设备，操作简单，能广泛地用于农户、基层以及个人对于Hl亚型和H5亚型禽流感病毒的检测。附图说明图I为本技术的侧面结构示意图，图中，I为PVC底板；2为样品垫；3为金标记抗体玻璃纤维膜II ;4为金标记抗体玻璃纤维膜I ;5为硝酸纤维素包被膜；6为吸水纸，·下同；图2为图I的俯视图不意图；图中，7为检测线I ;8为检测线II ；9为质控线.；图3为本技术检测结果为Hl亚型和H5亚型禽流感病毒均阳性的示意图(即包被膜5表面的检测线I 7、检测线II 8和质控线9均显色)；图4为本技术检测结果为Hl亚型禽流感病毒阳性的示意图(即包被膜5表面的检测线I 7和质控线9显色而检测线II 8不显色)；图5为本技术检测结果为H5亚型禽流感病毒阳性的示意图(即包被膜5表面的检测线II 8和质控线9显色而检测线I 7不显色)；图6为本技术检测结果为阴性的示意图(即包被膜5表面的质控线9显色而检测线I 7和检测线II 8均不显色)；图7为试纸条无效的示意图(即包被膜5表面的检测线I 7、检测线II 8和质控线9均不显色)。具体实施方式以下结合附图对本技术做进一步详细说明，但本技术的保护范围不限于此。如图I和图2所示，一种快速检测Hl亚型和H5亚型禽流感病毒的胶体金测试试纸条，试纸条包括PVC底板I、样品垫2、涂覆胶体金颗粒标记(金标)抗Hl亚型禽流感病毒的单克隆抗体的玻璃纤维膜I 4、涂覆胶体金颗粒标记(金标)抗H5亚型禽流感病毒的单克隆抗体的玻璃纤维膜II 3、包被膜5和吸水纸6，其中，包被膜5的底面粘贴在PVC底板I上面，在该包被膜5两端的上面分别粘贴玻璃纤维膜I 4和吸水纸6，在该玻璃纤维膜I 4远离包被膜5的一端的上面粘贴玻璃纤维膜II 3，在玻璃纤维膜II 3远离包被膜5的一端的上面粘贴样品垫2;在所述包被膜5的上面设有检测线I 7、检测线II 8和质控线9，所述检测线I 7和检测线II 8均包被抗禽流感病毒的抗体，质控线9包被抗鼠抗体。包被膜5为硝酸纤维素膜。所述检测线I 7包被抗Hl亚型禽流感病毒的单克隆抗体，检测线II 8包被抗H5亚型禽流感病毒的单克隆抗体；抗Hl亚型禽流感病毒的单克隆抗体、抗H5亚型禽流感病毒的单克隆抗体及抗鼠抗体分别固定于包被膜5上并呈三条线平行排列，形成所述的检测线I 7、检测线II 8和质控线9。通过检测线I 7、检测线II 8和质控线9的显色来进行定性。本技术所述试纸条采用三条带显色的胶体金层析法制备，显带颜色为红色线条，具体制备工艺如下(I)胶体金溶液的制备将双蒸水置磁力搅拌器上搅拌加热至沸腾，按终浓度为万分之二的量迅速加入浓度为1%的氯金酸溶液，煮沸5分钟；再按所加入氯金酸溶液I. 8倍的体积量加入浓度为1%的柠檬酸三钠溶液，煮沸10分钟后，冷却至室温，用双蒸水定容至氯金酸终浓度为万分之二，常温避光保存备用。(2)金标抗体玻璃纤维膜I 4的制备用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7. 5，按3(^g抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗Hl亚型禽流感病毒的单克隆抗体，混匀， 静置5分钟；再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液，混匀，静置5分钟；IOOOOrpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤液洗涤一次，离心后弃上清，沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解，然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜I 4上，真空干燥3小时后，置装有干燥剂的密封袋中保存备用。上述10%BSA溶液、标记洗涤液和金标抗体保存液的具体组分配比如下10%BSA溶液每IOOOmL超纯水中含牛血清白蛋白100g。标记洗涤液每IOOOmL超纯水中含牛血清白蛋白4g，聚乙二醇8000 2g，聚乙烯吡咯烷酮2g，蔗糖2g，Tris 1.211g，并调节pH至8. I。金标抗体保存液每IOOOmL超纯水中含牛血清白蛋白25g，聚乙二醇8000 5g，Tris 10. 2g，氢氧化钠2. 5g，吐温-20 7. 5mL，并调节pH至8. 5。(3)金标抗体玻璃纤维膜II 3的制备用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7. 5，按3(^g抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗H5亚型禽流感病毒的单克隆抗体，混匀，静置5分钟；再按本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速检测H1亚型和H5亚型禽流感病毒的胶体金测试试纸条，其特征在于，试纸条包括底板、样品垫、涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜I、涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜II、包被膜和吸水纸，其中，包被膜的底面粘贴在底板上面，在该包被膜两端的上面分别粘贴玻璃纤维膜I和吸水纸，在该玻璃纤维膜I远离包被膜的一端的上面粘贴玻璃纤维膜II，在玻璃纤维膜II远离包被膜的一端的上面粘贴样品垫；在所述包被膜的上面设有检测线I、检测线II和质控线，所述检测线I和检测线II均包被抗禽流感病毒的抗体，质控线包被抗鼠抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张如民，曾小宇，任宝红，赵林萍，魏卓，李丹，
申请(专利权)人：郑州中道生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：