核糖核酸酶活性抑制用化合物及含有其的核酸保存用容器制造技术

本发明专利技术涉及用于将促进提取的核糖核酸的分解的核糖核酸酶的活性有效地进行抑制的核糖核酸酶活性抑制用化合物以及含有该化合物的试样保存用容器。本发明专利技术的核糖核酸酶活性抑制用化合物以及试样保存用容器可有效地用于核糖核酸提取过程之中，或提取的核糖核酸的保存中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于有效地抑制核糖核酸酶的活性的核糖核酸酶活性抑制用化合物以及含有该化合物的试样保存用容器，所述核糖核酸酶促进提取的核糖核酸的分解，更具体而言，涉及能够用于从生物体提取核糖核酸的过程以及提取的核糖核酸试样保存中的核糖核酸酶活性抑制用化合物以及含有该化合物的核糖核酸试样保存用容器。
技术介绍
核糖核酸属于核酸的一种，结构上与脱氧核糖核酸相比代替脱氧核糖而具有核糖，且碱基以尿嘧啶代替了胸腺嘧啶。根据结构和功能可分为构成核糖体的核糖体核糖核酸(rRNA)、具有从脱氧核糖核酸(DNA)传递的用于合成蛋白质的遗传信息的信使核糖核酸(mRNA)以及转运与信使核糖核酸的密码子对应的氨基酸的转运核糖核酸(tRNA)。这些核糖核酸根据使用用途和时机而被分解并重新合成，在该过程中有核糖核酸酶进行参与。 核糖核酸酶不同于脱氧核糖核酸酶，其活性不易被抑制，且存在从收集试样的过程到从试样中提取核糖核酸的过程等任何过程中皆易于被污染的问题，这些核糖核酸酶是从生物试样中分离纯核糖核酸的过程中收率降低以及纯度降低的主要原因，因此必须抑制其活性。一般，由于核糖核酸是单链，因此与脱氧核糖核酸相比具有易于被分解的特性。如进行丙型肝炎病毒的诊断之类的情况下，需要在收集到的血液样品中丙型肝炎病毒的核糖核酸被核糖核酸酶分解之前提取丙型肝炎病毒的核糖核酸，并进行确认其存在与否的实验。这时，如果丙型肝炎病毒的核糖核酸已经被血液中的核糖核酸酶所分解，则有可能导致将丙型肝炎病毒感染者判定为非感染者的严重的后果。结果，虽然抑制从生物试样提取核糖核酸的过程中显示的核糖核酸酶的活性也很重要，但是从保存生物试样开始有效地阻断核糖核酸暴露在核糖核酸酶中比什么都重要。另一方面，从血液或动物、植物的组织或培养细胞等中提取纯核糖核酸大体上有两种方法，即，使用苯酚的方法和使用离液盐的方法。众所周知，苯酚为强力的有机溶剂，具有溶解蛋白质以及细胞构成成分的性质，因此在细胞被溶解(普司)的瞬间在显示核糖核酸酶的活性之前分解掉核糖核酸酶，从而具有能够从根源上阻断核糖核酸的分解的优点。但是，苯酚具有对人体有害的缺陷，且没有完全除去有机溶剂时会对后续的操作造成严重的影响。胍盐等离液盐具有以强力的蛋白质变性作用来使核糖核酸酶变性而抑制其活性的性质。另外，离液盐还能起到向二氧化硅的表面附着核糖核酸的作用，因此具有即使不使用有机溶剂也能够很容易地分离/纯化核糖核酸的优点。但是，这些方法皆为抑制从生物试样中分离核糖核酸的过程中显示的核糖核酸酶的活性的方法，因此若在保存生物试样的期间内已经暴露在核糖核酸酶中，无论在分离核糖核酸的过程中如何抑制核糖核酸酶的活性也完全无法起到效果。众所周知，从人胎盘中提取的核糖核酸酶抑制酶与核糖核酸形成I : I复合体而可用于非竞争性抑制作用中，这已经被广为使用(Peter Blackburn et. al. , JBC,252 :5904-5910(1977))。从人胎盘提取的该核糖核酸酶抑制酶在酶特性上具有以作为巯基试剂的对(羟基汞)苯甲酸酯或N-乙基马来酰亚胺进行处理时，核糖核酸酶和核糖核酸酶抑制酶混合物被分解而失活的缺陷，而为了克服此缺陷必须一同使用过量的DTT (dithiothreitol)。还报导了保存动物组织试片等时，在50%以上的醇溶液中进行保存或在PEG(PolyEthylene Glycol)等溶液中进行保存，从而使组织切片无法接触到水分而阻止被核糖核酸酶分解的方法，但这仅局限于用染色法观察组织试片等试验中使用，不适合广泛使用(USP7, 250，270)。氯化氧f凡(Vanadyl chloride)由于与核糖核酸酶形成混合物而起到抑制分解酶活性的效果，但还存在对核糖核酸聚合酶等的作用也进行抑制的影响，因此具有在核糖核酸提取过程中必须完全进行清除的缺陷(Sambrook et al. , 1989)。 现在，被商品化的核糖核酸酶活性抑制用化合物有以上述的资料为基础的、以从人胎盘中分离的核糖核酸酶抑制酶为主要材料来使用的制品组；利用含有50%以上的醇而使试样暴露在非水的醇中来防止核糖核酸分解的方法的制品组；以及利用使用高浓度的盐而抑制核糖核酸酶活性的方法的制品组等，但是存在不仅可分别有效地抑制其活性的核糖核酸酶的种类受限制，而且为了维持核糖核酸酶活性的抑制力需要持续添加助剂以及稳定剂的缺陷。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种对分解核糖核酸的核糖核酸酶具有很强的活性抑制力的核糖核酸酶活性抑制用化合物，以及提供一种含有本专利技术的核糖核酸酶活性抑制用化合物的核糖核酸保存用容器，用于稳定地对试样保存中暴露在核糖核酸酶中而容易分解的核糖核酸进行保存。为了实现上述目的，本专利技术提供用于有效地抑制核糖核酸酶的活性的核糖核酸酶活性抑制用化合物，所述核糖核酸酶促进提取的核糖核酸的分解，所述化合物含有下述化学式I和化学式2的结构的化合物。权利要求1.一种由下述化学式I或化学式2表示的核糖核酸酶活性抑制用化合物， 化学式I2.根据权利要求I所述的核糖核酸酶活性抑制用化合物，其选自下述化学式3 化学式6中，3.根据权利要求2所述的核糖核酸酶活性抑制用化合物，其选自下述结构的化合物4.根据权利要求I所述的核糖核酸酶活性抑制用化合物，其中，所述核糖核酸酶为核糖核酸内切酶。5.根据权利要求4所述的核糖核酸酶活性抑制用化合物，其中，所述核糖核酸内切酶为选自 RNase A>RNAse H>RNAse I>RNase III>RNase L>RNase P>RNase PhyM>RNase Tl、RNase T2、RNase U2、RNase Vl以及RNase V中的核糖核酸内切酶或它们的混合物。6.根据权利要求5所述的核糖核酸酶活性抑制用化合物，其中，所述核糖核酸酶活性抑制用化合物溶解于选自水、DMF、DMS0、(Cl C5)的低级醇或它们的混合溶剂中的一种以上。7.根据权利要求I所述的核糖核酸试样保存用容器，其中，所述核糖核酸选自动物组织、植物组织、微生物、血液、血浆、血清、培养细胞以及将这些试样转化为重组基因的试样。8.—种核糖核酸试样保存用容器，其含有权利要求I 7中任一项所述的核糖核酸酶活性抑制用化合物。9.根据权利要求8所述的核糖核酸试样保存用容器，其中，所述核糖核酸酶活性抑制用化合物涂覆于容器内壁。全文摘要本专利技术涉及用于将促进提取的核糖核酸的分解的核糖核酸酶的活性有效地进行抑制的核糖核酸酶活性抑制用化合物以及含有该化合物的试样保存用容器。本专利技术的核糖核酸酶活性抑制用化合物以及试样保存用容器可有效地用于核糖核酸提取过程之中，或提取的核糖核酸的保存中。文档编号C07D403/08GK102803251SQ200980159836 公开日2012年11月28日 申请日期2009年6月12日 优先权日2009年6月12日专利技术者金钟勋, 朴晃绪, 朴翰浯 申请人:株式会社百奥尼本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：金钟勋，朴晃绪，朴翰浯，
申请(专利权)人：株式会社百奥尼，
类型：发明
国别省市：