一种HSA-GCSF突变体及其制备方法技术

技术编号:8019000 阅读:265 留言:0更新日期:2012-11-29 01:39
本发明专利技术涉及一种无糖基化的重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子突变体,通过对重组人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子基因的潜在糖基化位点进行突变,剔除了重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子的潜在糖基化位点,然后转化到毕赤酵母或者酿酒酵母中,发酵纯化,最后得到无糖基化的重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子突变体,该突变体克服了原先重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白由于糖基化修饰带来的影响药代动力学和免疫反应问题,更适合于用于人体临床研究或治疗应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域,具体地说,涉及一种无糖基化的重组人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子突变体融合蛋白的构建及其制备方法。
技术介绍
大多数的蛋白药物只能采用皮下注射或静脉注射等方式给药,这类蛋白药物因蛋白酶的作用和肾小球的滤过,在人体内的半衰期比较短,体内清除率高,往往只有几分钟至几小时的半衰期,造成给药频繁,给患者造成诸多困难和不便。此外,其稳定性等也是影响其在体内发挥其功效的因素。因此,如何消除或降低此类蛋白类药物的抗原性、延长其体内半衰期及增加稳定性是生物制药领域的一个热门课题。天然的人粒细胞集落因子(hG-CSF)具有174个氨基酸,若是通过大肠杆菌表达 的重组人粒细胞集落因子(rhG-CSF)因为需要在N-端添加甲硫氨酸而具有175个氨基酸。已上市的重组人粒细胞集落因子注射液药物多为经大肠杆菌表达的175位氨基酸的rhG-CSF,其在肿瘤放疗、化疗引起的粒细胞减少症、再生障碍性贫血、放射病等血液病的治疗及骨髓移植方面具有重要作用,现已应用于临床,是每年销售额最大的几个生物制品药物之一。但是hG-CSF血浆中衰期短,为了达到体内效果一个周期内需要多次给药,这既增加了病人本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子突变体(rmHSA?GCSF),所述突变体中的人血清白蛋白的C末端可以直接或通过一柔性的连接肽序列与人粒细胞集落刺激因子的N端相连,或者人粒细胞集落刺激因子的C末端直接或通过一柔性的连接肽序列与人血清白蛋白的N端相连,所述人粒细胞集落刺激因子上第133位的Thr突变成Gly、Ala或Met。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:单剑峰王昌梅金荣严春霞张昕戎亚雯李亚飞游修鼎
申请(专利权)人:杭州九源基因工程有限公司
类型:发明
国别省市:

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