制备酰化多肽步骤中色谱固定相的再生方法技术

本发明专利技术提供一种适用于工业化应用的色谱固定相再生方法，通过色谱固定相与含有至少一种弱碱、一种有机溶剂和少于70％(v/v)水的再生溶液接触来恢复色谱固定相的性能，实现了在色谱纯化循环内完成色谱固定相的再生，使色谱柱再生后就可以进行下一个纯化循环，使多个纯化循环可以连续进行，不破坏色谱固定相，操作简单、安全且经济有效。

【技术实现步骤摘要】
制备酰化多肽步骤中色谱固定相的再生方法
本专利技术涉及色谱纯化领域，更具体的说，涉及一种用于酰化多肽纯化的色谱固定相的再生方法。
技术介绍
多肽药物已被应用于多种疾病如糖尿病和肿瘤等的治疗，批准的多肽药物包括胰岛素及其突变体、利拉鲁肽、索玛鲁肽、艾塞那肽、戈舍瑞林、亮丙瑞林等，这些药物的全球市场销售额超过100亿美元，在改善患者的生活质量和提高患者健康方面发挥着重要作用。由于天然的多肽药物一般半衰期较短，因此一般需要通过化学修饰等技术手段改善其药理特定，例如典型的变体为酰胺、糖类、烷基、酰基、酯、聚乙二醇化等修饰，相关的技术报道可参考WO96/29342、WO98/08871、WO99/43708、WO00/34331、WO00/69911、CN97198413.1和CN200680006674.6等。多肽药物在制备过程中，由于其分子量较普通蛋白质要小一些，因此纯化的整个过程中经常用到多步纯化法。其中，反相高压色谱法(RP-HPLC)是工业上分离多肽的优选方法，而且该方法已被证明对于大规模纯化多种多肽是通用的。同时，只有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种再生色谱固定相的方法，其中所述色谱固定相与含有至少一种弱碱、一种有机溶剂和少于70％(v/v)的水的再生溶液接触。/n

【技术特征摘要】
20191231 CN 20191141215171.一种再生色谱固定相的方法，其中所述色谱固定相与含有至少一种弱碱、一种有机溶剂和少于70％(v/v)的水的再生溶液接触。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述弱碱包括氨水、碳酸盐、DIEA、二乙胺、三乙胺等铵类化合物，其中所述的碳酸盐包括碳酸钠，碳酸氢钠，碳酸钾，碳酸氢钾，碳酸铵，碳酸氢铵等弱碱。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述有机溶剂包括乙腈、乙醇、甲醇或异丙醇。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述再生溶液的pH范围为9-12、9.5-11.5、10-11、10.5-11.5或pH为11。


5.一种再生色谱固定相的方法，其中所述色谱固定相与再生溶液接触，其中所述的再生溶液含有0.1％-2％(v/v)的氨水，30％-70％(v/v)的乙腈和少于70％(v/v)的水，溶液的pH范围为9-12。


6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述色谱固定相是RP-HPLC基体。


7.一种生产治疗用多肽或其前体的方法，包括至少一个色谱处理步骤，其中通过一种再生色谱固定相的方法将色谱固定相再生，其中，在5℃～60℃范围内的温度下，将所述色谱固定相与含有至少一种弱碱、一种有机溶剂和少于70％(v/v)的水的再生溶液接触；其中，所述治疗用多肽选自酰化的GLP-1、酰化的GLP-1类似物或酰化的GLP-1/GIP双靶点激动剂。


8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，用于被酰化的GLP-1多肽或其类似物选自GLP-1(7-37)，GLP-1(8-37)，GLP-1(9-37)，GLP-1(10-37)，GLP-1(11-37)，GLP-1(12-37)，GLP-1(13-37)，GLP-1(14-37)，GLP-1(15-37)或GLP-1多肽类似物，包括：Arg34-GLP-1(7-37)，Arg26-GLP-1(7-37)，Lys36-GLP-1(7-37)，Arg26,34Lys38-GLP-1(7-38)，Arg26,34Lys39-GLP-1(7-39)，Arg26,34Lys40-GLP-1(7-40)，Arg26Lys36-GLP-1(7-37)，Arg34Lys36-GLP-1(7-37)，Arg26Lys39-GLP-1(7-39)，Arg34Lys40-GLP-1(7-40)，Arg26,34Lys36,39-GLP-1(7-39)，Arg26,34Lys36,40-GLP-1(7-40)，Gly8Arg26-GLP-1(7-37)，Gly8Arg34-GLP-1(7-37)，Gly8Lys36-GLP-1(7-37)，Gly8Arg26,34Lys36-GLP-1(7-37)，Gly8Arg26,34Lys39-GLP-1(7-39)，Gly8Arg26,34Lys40-GLP-1(7-40)，Gly8Arg26Lys36-GLP-1(7-37)，Gly8Arg34Lys36-GLP-1(7-37)，Gly8Arg26Lys39-GLP-1(7-39)，Gly8Arg34Lys40-GLP-1(7-40)，Gly8Arg26,34Lys36,39-GLP-1(7-39)，Gly8Arg26,34Lys36,40-GLP-1(7-40)，Arg26,34Lys38-GLP-1(7-38)，Arg26,34Lys39-GLP-1(7-39)，Arg26,34Lys40-GLP-1(7-40)，Arg26,34Lys41-GLP-1(7-41)，Arg26,34Lys42-GLP-1(7-42)，Arg26,34Lys43-GLP-1(7-43)，Arg26,34Lys44-GLP-1(7-44)，Arg26,34Lys45-GLP-1(7-45)，Arg26,34Lys38-GLP-1(1-38)，Arg26,34Lys39-GLP-1(1-39)，Arg26,34Ly...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐文长，马国昌，徐飞虎，李博，关今韬，
申请(专利权)人：杭州九源基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33