抗HSV 抗体制造技术

本发明专利技术涉及如权利要求中定义的抗HSV抗体，包含有效量的所述抗体的药物组合物，包含编码所述抗体的核苷酸序列的表达载体，包含所述核苷酸序列的宿主细胞，能够产生所述抗体的杂交瘤细胞和所述抗体作为药物的用途，特别涉及用于制备用于预防性或治疗性处理受试者中的HSV相关疾病的药物的用途；如权利要求中所定义。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗HSV抗体
技术介绍
本专利技术涉及如权利要求中定义的抗HSV抗体，包含有效量的所述抗体的药物组合物，包含编码所述抗体的核苷酸序列的表达载体，包含所述核苷酸序列的宿主细胞，能够产生所述抗体的杂交瘤细胞和所述抗体作为药物的用途，特别涉及用于制备用于预防性或治疗性处理受试者中的HSV相关疾病的药物的用途；如权利要求中所定义。人致病性单纯疱疹病毒(HSV)是嗜皮肤的和嗜神经的DNA病毒，其临床表现主要起源于皮肤和附近的粘膜，继发性导致神经并发症，例如神经炎、脑膜炎、脑炎、脊髄炎、多神经根炎等等。在先天性、获得性和医原性的免疫缺陷的情况下，报告了一定程度上的严重进展，具有高致死性。由于具有I型HSV(HSV-1，95%;唇疱疹，角膜疱疹，疱疹性湿疹)和2型HSV(HSV-2，10-30%;生殖器疱疹，新生儿疱疹)的群体的高感染率，并且由于该病毒经常被重新激活，在感觉和自主神经节中持续终生潜伏，所以HSV具有特别的临床意义。与病毒的类型无关，原发或复发性HSV感染的征候治疗目标是抑制病毒复制、缩短患病时间，和 预防影响复发频率的系统性并发症。在早识别和正确用药剂量的情况下，病毒抑制试剂被成功用于抗病毒治疗。最常见的病毒抑制试剂(例如阿昔洛韦，喷昔洛韦，膦甲酸，碘苷)是核苷或焦磷酸盐类似物，其共同的活性原理是基于在病毒感染的细胞中抑制DNA的合成。治疗HSV感染的最重要的治疗剂之一是嘌呤核苷类似物阿昔洛韦。其被病毒胸苷激酶磷酸化，然后干扰病毒DNA聚合酶。与此相反，人的DNA聚合酶对于阿昔洛韦的易感性仅有1/50至1/30，因此仅观察到边际效应。然而，虽然在选择性作用的病毒抑制试剂上有进展，但是病毒性疾病的化学治疗仍然是严重的问题。特别地，在长时间的预防性和治疗性处理免疫抑制患者时观察到的针对常见的化疗剂的抗性株系的出现是个问题。因此，在10%以上的病例中，由于缺乏有效的病毒抑制试剂，观察到了迅速进展的泛发的感染，具有致死性进展。目前，焦磷酸盐类似物膦甲酸特别用于在免疫抑制患者中抵抗阿昔洛韦抗性疱疹病毒。该试剂引起病毒DNA聚合酶的直接抑制，并且对于胸苷激酶没有影响。然而，膦甲酸的使用导致严重的不希望的副作用，例如肾衰竭、心脏问题、对于骨髄具有毒性，并且还可能导致皮肤溃疡。由于其致畸形效应，在环孕期间也不能施用膦甲酸。此外，观察到交叉抗性株系的形成，这使得替代性治疗剂的开发成为高度必需的。目前没有被动免疫预防。一些针对HSVl和HSV2的主动免疫的实验性疫苗未显示出可证实的成功。抗体对于治疗癌症、自身免疫病症和病毒感染具有极大的前景。JP6135854描述了针对单纯疱疹病毒感染的治疗剂，其中通过静脉内点滴以注射的形式同时或相继施用针对HSV的人单克隆抗体和抗病毒核酸类似物例如阿昔洛韦(ACV)。DK 187286公开了显示出针对来自HSV-I和HSV-2的糖蛋白D(gD) (HSV gD_l和gD_2)的多特异性免疫反应性的抗体。WO 1997/26329描述了对于诊断和治疗HSV-I和HSV-2有用的人单克隆抗体。后者的抗体与HSV 863单克隆抗体竞争与HSV-I和HSV-2的糖蛋白D抗原的结合。US 4，950，595公开了小鼠-人杂交瘤，其产生抗病毒-人抗体，其制备方法，以及抗病毒-人单克隆抗体。此外，描述了特异于HSV1/2的另ー鼠单克隆抗体(Fd79) (Kogae et al.，1986)的人源化(Co, M. S. et al.，1991; Zeitlin L. et al.，1998)。该抗体识别 HSVl 和 HSV2 的糖蛋白B(gB)的共有表位。此外，已经在转基因植物和真核细胞系SP2/0中产生了人源化Fd79，井随后进行了表征，显示出53nM的亲和性。鼠单克隆抗体H1815识别糖蛋白B(gB)的氨基酸263-283的区域中的相似但不同的表位(Navarro et al.，1992)。然而，H1815不能进行病毒中和或抑制“细胞至细胞的传播”。最后，US 6，180,370描述了人源化的免疫球蛋白及其制备方法。此外，WO2003/105782涉及鼠抗体特异性接枝至人框架。因此，化疗剂具有不希望的副作用，并且观察到数目渐增的抗性株系。因此，本专利技术的目标是提供能够中和HSV感染并抑制细胞至细胞的传播的(人源 化的)抗HSV抗体。此外，本专利技术的目标是提供用于治疗HSV相关疾病的预防剂和/或治疗剂，其克服了常规应用的化疗剂的上述缺点。令人惊奇的是，发现根据本专利技术的抗体实现了该目标。因此，本专利技术提供了用于治疗HSV感染的本领域已知的治疗剂的有前景的替代物，其是基于重组产生的抗体，其可以是人源化的。这些抗体能够阻断病毒在宿主内传播的两种机理。它们有效地中和无细胞的病毒颗粒，并抑制病毒的直接的细胞至细胞传播。由于该抗体特异性结合HSVl和HSV2被膜的表面糖蛋白B(gB)的高度保守的表位，而gB对于病毒复制周期是必不可少的，所以，药物抗性的出现是极不可能的。虽然本专利技术的鼠抗体的效应已经部分地被描述,见參考文献Eis-Hiibinger et aI.，Intervirology (1991) ; 32:351-360 和 Eis-Hiibinger et al. , Journal of GeneralVirology (1993) ; 74:379-385，但是从未公开过或使公众可获得抗体本身或本专利技术的抗体的互补决定区(CDR)的序列，以及其所结合的表位。总之，(人源化的)抗体提供了以下一项或多项优点■已经证明了本专利技术的鼠单克隆抗体的功效(见Eis-Hiibinger etal. , 1991;Eis-Hubinger et al.，1993)。此外,本专利技术人在实施例部分证明了本专利技术的人源化抗体也能够在体外中和HSVl和HSV2病毒感染，并通过抑制“细胞至细胞传播”机制而抑制病毒传播。在人类中的感染进展的情境中，人免疫系统不能产生用于有效预防HSV1/2典型性细胞至细胞传播的抗体特异性。■保守性化疗剂例如阿昔洛韦和膦甲酸的经常性和长期性的预防性以及治疗性应用导致抗性病毒株系的形成増加。该抗性问题可以通过単独施用的或与病毒抑制试剂例如阿昔洛韦和/或膦甲酸组合施用的本文描述的(人源化)抗HSV抗体得以克服，因为其依赖于不同的作用机理。■本文描述的抗体特异性结合HSV gB蛋白的表位。预期不会有针对本专利技术的抗体的HSV抗性的出现，因为gB蛋白的突变会导致病毒感染カ的丧失。■禁忌系统性施用常规的病毒抑制试剂的患者特别地获益于本文描述的(人源化)抗体
技术实现思路
因此，提供了包含如SEQ ID NO: I, SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:4，SEQID NO: 5和SEQ ID NO: 6所示的互补决定区的抗体。另外，提供了与包含SEQ ID N0:l_6所示的互补决定区的抗体识别相同表位的抗体。此外，还提供了包含有效量的本文描述的抗体和至少ー种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。此外，提供了包含编码如权利要求中定义的抗体的核苷酸序列的表达载体,包含所述核苷酸序列的细胞，和能够产生所述抗体的杂交瘤细胞。最后，本文还提供了用作药物的如权利要求中定义的抗体，如权利要求中定义的抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·罗根多夫，AM·埃伊斯胡伊宾格，J·克劳斯，K·E·施内维斯，M·阿德特，A·克劳茨科，E·艾科斯纳，M·道莫，
申请(专利权)人：公众权益基金会德国癌症研究中心，
类型：发明
国别省市：