一种针对hUHRF1基因RNA干扰的重组慢病毒载体及其制备制造技术

本发明专利技术涉及一种针对hUHRF1基因RNA干扰的重组慢病毒载体及其制备。实验构建了针对hUHRF1基因的ShRNA的慢病毒载体，将合成的针对ShRNA的DNA片段通过慢病毒载体介导，还与pHelper?1.0、pHelper?2.0两种载体共转染293T细胞培养，获得重组慢病毒载体后，转染目的细胞，实现针对hUHRF1基因的RNA干扰。采用的自身失活的第三代慢病毒载体(SIN)，具有安全可靠、可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长时程表达、免疫反应小等优点，是一种理想载体。本发明专利技术的慢病毒载体，对人乳腺癌细胞MCF-7干扰效果达70-85％，因此本发明专利技术重组慢病毒载体为有关hUHRF1基因的进一步研究奠定良好实验基础，并能广泛用于体内基因治疗及基因功能研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属分子生物学，生物医药及基因工程
，主要涉及针对hUHRFl (human ubiquitin-like protein containing PHD and RING domain I)基因的RNA干扰重组慢病毒载体(LV-sh-hUHRFl)及其制备。
技术介绍
肿瘤的发生、发展是一个多因素造成，多步骤多阶段发展的过程，基因组的不稳定性或者是染色体数量上的改变(非整倍体)、染色体异位、基因扩增等等是癌变细胞的重要特征。最新的研究发现，人类基因组约25，000个基因中大约有350个基因为癌基因。其中仅有极少一部分的功能已经有所研究，而大部分功能未知的基因有待进ー步的研究。hUHRFl基因位于人类染色体19pl3. 3上，由2，327个bp组成，含有18个外显子，ー个2. 4kb大小的cDNA,编码793个氨基酸,其结构包括N端的类泛素(ubiquitin-like)模式，一个亮氨酸拉链模式(leucine zipper motif), PHD类型的锌指模式(Zinc fingermotif of PHD finger type), SRA-YDG 结构域和 C 端本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种针对hUHRFl基因RNA干扰的重组慢病毒载体，该载体是自身失活的第三代慢病毒载体SIN，其特征在于，所述的载体SIN含有pGCSIL-GFP/U6-Sh hUHRFl重组载体，所述的pGCSIL-GFP/U6-ShhUHRFl重组载体是在pGCSIL_GFP载体的多克隆位点中连接了双链DNA片段；所述的双链DNA片段的序列为以下序列中的ー种(1)hUHRFl-homo-704hUHRFトhomo-704-S 5，-GATCCAGGAGGACGTCATTTACCATTCAAGAGATGGTAAATGACGTCCTCCTTTTTTTG-3，hUHRFトhomo-704-AS 5，-AATTCAAAAAAAGGAGGACGTCATTTACCATCTCTTGAATGGTAAATGACGTCCTCCTG-3，(2)hUHRFI-homo-I766hUHRFトhomo-1766-S 5，-GATCCGCGCAATGTCAAGGGTGGCTTCAAGAGAGCCACCCTTGACATTGCGCTTTTTTG-3，hUHRFl-homo-1766-AS 5，-AATTCAAAAAAGCGCAATGTCAAGGGTGGCTCTCTTGAAGCCACCCTTGACATTGCGCG-3，(3)hUHRFI-homo-I984hUHRFトhomo-1984-S 5，-GATCCCAGTATCCAGAAGGCTACCTTCAAGAGAGGTAGCCTTCTGGATACTGTTTTTTG-3，hUHRFトhomo-1984-AS 5，-AATTCAAAAAACAGTATCCAGAAGGCTACCTCTCTTGAAGGTAGCCTTCTGGATACTGG-3，。2.权利要求I所述的针对hUHRFl基因RNA干扰的重组慢病毒载体的制备方法，其特征在于，根据hUHRFlmRNA序列，设计合成了双链DNA片段，所述的双链DNA片段为以下序列中的ー种(1)hUHRFl-homo-704hUHRFトhomo-704-S 、 5，-GA...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷浩金，
申请(专利权)人：常熟市常福有机复合肥有限公司，
类型：发明
国别省市：