制备小粒径脂质体的方法技术

制备具有特定粒径的脂质体，通过基本持续地混合基本上持续的水流和基本上持续的有机溶剂流，所述有机溶剂包含能形成脂质体的脂质，并冷却所述混合物以形成脂质体，控制水流流速对有机溶剂流的流速之比以及所述混合物的冷却速度以使获得至少约９０％的脂质体的粒径小于约２００ｎｍ。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术主要涉及脂质体疫苗生产领域。专利技术概述本专利技术旨在提供粒径小于约200nm的脂质体。令人惊奇地发现，在制备脂质体的方法中，若其包含将有机液体(其中溶有脂质) 与水混合的步骤，那么有机溶剂的浓度和所产生的混合物的迅速冷却对形成并保持一致的脂质体粒径至关重要。本申请的方法与装置有助于商业化大规模生产包封了药物的勻质脂质体疫苗制剂，即在新颖的条件下，将脂质溶液，其含有溶入与水互溶的有机溶剂中的脂质，混入流动的水中，以促进疫苗质量级别的脂质体不断生成。所述方法使用一种连续混合系统，其中流速比，即脂质溶液流速与水流速之比，保持恒定，由此保持系统中恒定的有机溶剂百分比。所述方法更进一步用一种快速且规模依赖性的冷却步骤，其在脂质体形成后使用并防止脂质体平均粒径的增长。所述方法还进一步提供一种管道排布方法，其促进形成具有理想粒径的脂质体。为制备粒径小于约200nm的脂质体，依照本申请的方法，有机溶剂/水混合物中的有机溶剂浓度保持在5%到30%之间，更优选地，在10%到25%之间，最优选地，在10%到 25%之间；流速比(水/有机溶剂)保持在19 1到3又1/3 1之间，更优选地在9 1 到5 1之间，或在9 1到4 1之间；且脂质体混合物的冷却(从约55°C至约30°C ) 时间少于5小时，更优选地少于2小时，最优选地少于30分钟，更优选基本上即时冷却。本专利技术解决了领域内的难题，即批次间的差异性、在冷却中出现的脂质体粒径不期望的增长以及需要诸如超声或增压系统等精密方法。依照本专利技术制得的脂质体适用于制造人用或兽用疫苗。附图概述附图说明图1为装置布局示意图，其中的嵌入物描述的是“T”型连接排布，和任选地，是否管道可包括内部突起或挡板以增强湍流度，其有助于混合。图2为流程图，描述了总体临床制备过程中的各类参数。图3为一幅照片，显示在使用不同管道直径的情况下染料(模拟脂质/溶剂)和水的聚集情况(A)两管均为9mm直径；⑶5mm(水)管和3mm(脂质/溶剂)管。图4为透射电镜照片(放大倍数18K)，显示依照本方法采用20%叔丁醇制备的载有MUC-I肽的脂质体形成。优选实施方式的详述本方法可适用于大规模商业化的生产纳米级别的脂质体制剂，特别是那些包括基本上勻质的不超过200nm直径的脂质体粒径。优选地，脂质体中多于90% (采用动态光散射测得的权重(weighted)体积)小于200nm，最优选的，多于99%的小于200nm。此类粒径的颗粒可直接依照工业认可的临床生产标准过滤除菌。所述粒径均勻的脂质体可依照本专利技术制备，包括控制有机溶剂的浓度，并在脂质体形成以及接下去的过程中保持其基本恒定。通过控制溶剂浓度有可能控制脂质体颗粒的粒径，所述颗粒是在脂质溶液与水(或其它适于脂质体形成的水性溶剂)汇合和相混时形成的。在本方法中，脂质溶液与水在管道连接处正下方的“中流”处发生汇合，通过所述管道安排溶液和水被初始泵入。脂质溶液持续地流过一个管道并流入持续流动的水流中。 两条液流可能以任何角度交汇，故水和脂质溶液分别流经的管道可能以约90度或小于90 度的角度汇合。脂质溶液与水的浑浊混合物，即“溶剂云”，在管道连接处下方形成，且这里也是开始形成脂质体的分界线。进一步地，脂质/溶剂与水性液体混合成湍流的程度也会有助于脂质体形成。因此，本专利技术可能包括的装置和连接的一种特征，但并非形成脂质体必需的，是在任何管道的管腔内部存在折流挡板、内向突起或刻纹，它们有助于增加湍流从而促进脂质体的产生。因此，依据本专利技术，在液体汇聚处制造高剪切的环境有益于制备脂质体。能在从脂质体形成到将混合物装入储存容器的时间内对混合物进行冷却的在线冷却设备可实现脂质体混合物的快速冷却。这可以通过诸如冷却套管、冷却盘管或将脂质体混合物流经的管道或其他接头处浸没的冰浴来实现。快速冷却可保持脂质体粒径，而慢速冷却时，在有机溶剂的理想浓度下脂质体粒径会随时间增大。经由控制(1)水流对有机溶剂流的流速比和( 混合物中有机溶剂的浓度和(3) 脂质体形成后立即快速冷却混合物，以及可选地(4)使用湍流增强结构，不断生产出粒径一直维持在一定范围内的脂质体是可能的。因此本装置与设计避免了现有技术中其直接将预置好的大量体积的水与脂质/ 溶剂混合，即从一个大桶装入另一个大桶中(例如，美国专利申请No. 11/185，448)，的封闭低效的系统。取而代之，本专利技术的装置是持续流动的、开放的系统，其能够实现不停的循环往复的生产均勻脂质体制剂的过程，所述脂质体可包含能掺入脂质溶液中的任何有治疗活性的物质。本专利技术装置与现有技术装置还存在不同之处在于本装置中没有将加压脂质/溶剂溶液通过分散小孔或微米级小洞以加压脂质/溶剂喷雾形式进入水流(例如，美国专利 US6, 843，942，Wagner 等，2002，Journal of Liposome Research，12 (3)，第 259-270 页，美国专利US6，855，277)。本装置不要求“交叉流注入模块”，例如其中开有前文所述的微米级小孔但其另一方面防止大量的水和脂质液体在管道间混合。亦即，本专利技术不通过小孔将脂质/溶剂强行注射入水中，所述小孔位于分隔两种液体的载液管的连接壁上。相反地，本专利技术装置和方法无需借助任何上述隔断或加压喷雾就实现了一种液流(水)与另一种自由流动的液流(脂质溶液)间的交错窜流。本专利技术还无需任何之前介绍过的勻质化或超声处理 (例如，美国专利US6，855，277)即可制备具有限定且均勻粒径范围的脂质体。将所需的治疗用化合物例如药物、肽或脂肽，以及任何其他需要的成分，例如佐剂或赋形剂，加入本专利技术的脂质溶液中，能促进这些物质在脂质溶液与流动水汇聚时包封入形成的脂质体。除了控制溶剂浓度以及水对脂质溶液的流速比之外，在各种液流开始流经上述管道系统前还可能需要对脂质溶液和水中的一种或两种进行加热。因此，本专利技术液体的各自温度对于确保稳定且可重复地制备出粒径均一、可滤过的脂质体可能是重要的条件。优选的温度取决于所用脂质的转变温度。本专利技术方法允许对实际流速在一定范围内进行操作。惊喜的发现只要流速比(即脂质溶液流速对水流速的比例)保持恒定，液体被驱动进入对方时的速度在实践范围内是不重要的。因此，所述过程从液体总体积很小到液体总体积很大的情况均能适应。由此，本专利技术中有助于持续形成载药、可滤过脂质体的因素包括，但不仅限于(1) 溶剂和溶剂浓度；( 脂质；C3)脂质溶液与水之间的流速比；(4)混合前和混合时液体的温度；( 液体混合及脂质体形成后的冷却；(6)各种液体间持续且不受阻碍的流进对方； 以及(7)产生湍流的方式。以下段落将对上述条件做详细说明。(1)溶剂和溶剂浓度本专利技术中一种特定种类的溶剂是水互溶性的有机溶剂，例如，但不仅限于，低级烷醇，诸如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、异戊醇、异丙醇、2-甲氧基乙醇以及丙酮。本专利技术优选的溶剂为丁醇或叔丁醇。依照本专利技术，有机溶剂用于溶解脂质和药物或生物活性物质，随后流入水流或水性介质中以形成本文公开的载药或载药剂脂质体。制备粒径在特定范围内的脂质体需要考虑的一个条件是水互溶性有机溶剂的浓度。依照本专利技术，混合点的有机溶剂的浓度，同时也是移除溶剂(例如，通过冷冻干燥的终浓度，为5% -30本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．制备具有一定粒径的脂质体制剂的方法，所述方法包含步骤ａ）提供基本上持续的水流，ｂ）提供基本上持续的有机溶剂流，所述有机溶剂包含溶于其中的至少一种脂质，所述脂质能形成脂质体，ｃ）将所述水流和有机溶剂流基本持续地混合，以得到混合物，且ｄ）冷却所述混合物，且ｅ）使所述混合物内部形成脂质体，控制水流的流速对有机溶剂流的流速之比以及所述混合物的冷却速度以获得至少约９０％的脂质体的粒径小于约２００ｎｍ的脂质体制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·A·迪皮，
申请(专利权)人：肿瘤防护公司，
类型：发明
国别省市：US