表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基制造技术

表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基，涉及一种表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基。是要解决诱导前重组乳酸菌的浓度较低，目前提高重组乳酸菌浓度的方法存在步骤复杂繁琐、不易操作，且培养环境pH难以控制的问题。本发明专利技术的培养基含有蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物、葡萄糖、β-磷酸甘油二钠、维生素C、MgSO4和饱和碳酸钙溶液上清。在诱导表达前，使用本发明专利技术的培养基对基因重组乳酸菌进行培养，使基因重组乳酸菌培养液的OD600值达到3.2。可有效的提高诱导前基因重组乳酸菌的浓度，因此可进一步增加表达物牛凝乳酶的产量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基。
技术介绍
使用诱导物nisin对重组乳酸菌进行诱导，可以提高表达产物的含量。2010年4 月《微生物学报》中发表的题目为《牛凝乳酶原基因在乳酸乳球菌中的表达》的文章中，通过提取犊牛皱胃总RNA，利用RT-PCR方法获得牛凝乳酶原基因，将该基因与表达载体pNZ8148 连接并电转化乳酸乳球菌NZ9000，得到基因重组乳酸菌，可表达牛凝乳酶。但使用诱导物 nisin进行诱导表达后，产物的表达量较低，主要原因就是诱导前重组乳酸菌的浓度较低。由于发酵途径的存在，乳酸菌的细胞浓度很难有所提高。例如在一个简单的酸化缓冲培养基中(M17培养基)，最大的细胞浓度为OD6tltl = 3 (lg/L干物质)。当pH接近5.0 时，乳酸菌的生长将停止，其原因是由于乳酸的积累而使生长停止，因此导致乳酸菌的浓度低，进而导致nisin诱导后产物的表达量无法提高。目前可通过向培养基中不断添加NaOH等中和试剂，以保持培养环境pH的稳定，将可进一步提高乳酸菌的浓度。但不断的添加NaOH等中和试剂导致方法步骤复杂繁琐，不易操作，而且培养环境PH难以控制。
技术实现思路
本专利技术是要解决诱导前重组乳酸菌的浓度较低，目前提高重组乳酸菌浓度的方法存在步骤复杂繁琐、不易操作，且培养环境PH难以控制的问题，提供表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基。本专利技术表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基为每IOOOmL液体培养基含有 IOg蛋白胨、5g牛肉膏、2. 酵母提取物、5g葡萄糖、19g β -磷酸甘油二钠、0. 维生素C、 ImL lmol/L的MgSO4和400 μ L的饱和碳酸钙溶液上清。在诱导表达前，使用本专利技术的培养基对基因重组乳酸菌进行培养，使基因重组乳酸菌培养液的OD6tltl值达到3. 2，而使用不添加饱和碳酸钙溶液的培养基前基因重组乳酸菌培养液的0D_值仅为1. 7，可有效的提高诱导前基因重组乳酸菌的浓度，因此可进一步增加表达物牛凝乳酶的产量，为表达产量的提高奠定基础。本专利技术的培养基中饱和碳酸钙溶液为一次性加入，操作简单、方便。附图说明图1为具体实施方式一中基因重组乳酸菌在4种不同的培养基中的生长曲线图； 其中- -为未添加盐溶液的培养基，-▲-为本专利技术的培养基，-·-添加了 400 yL pH 为12. 6的饱和氢氧化钙溶液上清的培养基，-■-添加了 200 μ L 0. lmol/L、pH为14的氢氧化钠溶液的培养基。具体实施例方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一本实施方式表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基为每 IOOOmL液体培养基含有IOg蛋白胨、5g牛肉膏、2. 5g酵母提取物、5g葡萄糖、19g β -磷酸甘油二钠、0. 5g维生素C、ImL lmol/L的MgSO4和400 μ L的饱和碳酸钙溶液上清。在使用固定诱导物nisin对基因重组乳酸菌进行诱导表达前，分别用以下4种培养基对基因重组乳酸菌进行培养(1)未添加盐溶液的培养基每IOOOmL培养基由IOg 蛋白胨、5g牛肉膏、2. 5g酵母提取物、5g葡萄糖、19g β -磷酸甘油二钠、0. 5g维生素C、 lmLlmol/L的MgSO4和余量的蒸馏水组成；(2)本实施方式的培养基每IOOOmL培养基由 IOg蛋白胨、5g牛肉膏、2. 酵母提取物、5g葡萄糖、19g β -磷酸甘油二钠、0. 维生素C、 ImL lmol/L的MgS04、400 μ L ρΗ为9. 8的饱和碳酸钙溶液上清和余量的蒸馏水组成；(3) 添加了 400 μ L ρΗ为12. 6的饱和氢氧化钙溶液上清的培养基每IOOOmL培养基由IOg蛋白胨、5g牛肉膏、2.5g酵母提取物、5g葡萄糖、19g β-磷酸甘油二钠、0.5g维生素C、lmL lmol/L的MgS04、400 μ L ρΗ为12. 6的饱和氢氧化钙溶液上清和余量的蒸馏水组成；⑷添加了 200 μ L 0. lmol/L、pH为14的氢氧化钠溶液的培养基每IOOOmL培养基由IOg蛋白胨、 5g牛肉膏、2. 5g酵母提取物、5g葡萄糖、19g β-磷酸甘油二钠、0.5g维生素C、ImL Imol/ L的MgS04、200y L 0. lmol/L ρΗ为14的氢氧化钠溶液和余量的蒸馏水组成。培养条件为 30 "C。利用OD6tltl值测量法分别绘制了基因重组乳酸菌在4种不同的培养基中的生长曲线，结果如图1所示。结果表明不添加盐溶液时，菌株生长达到平稳期时0D_可达1.7左右，添加三种碱性盐溶液后，菌株生长达到平稳期时，细胞浓度均有一定的提高，但本实施方式培养基的增菌效果最好，培养他OD600可达2. 5，平稳期的0D_可达3. 2。具体实施方式二 本实施方式与具体实施方式一不同的是所述饱和碳酸钙溶液上清的PH为9. 8。其它与具体实施方式一相同。权利要求1.表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基，其特征在于表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基为每IOOOmL液体培养基含有IOg蛋白胨、5g牛肉膏、2. 5g酵母提取物、5g葡萄糖、19g β-磷酸甘油二钠、0.5g维生素C、ImL lmol/L的MgSO4和400 μ L的饱和碳酸钙溶液上清。2.根据权利要求1所述的表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基，其特征在于所述饱和碳酸钙溶液上清的ρΗ为9. 8。全文摘要表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基，涉及一种表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基。是要解决诱导前重组乳酸菌的浓度较低，目前提高重组乳酸菌浓度的方法存在步骤复杂繁琐、不易操作，且培养环境pH难以控制的问题。本专利技术的培养基含有蛋白胨、牛肉膏、酵母提取物、葡萄糖、β-磷酸甘油二钠、维生素C、MgSO4和饱和碳酸钙溶液上清。在诱导表达前，使用本专利技术的培养基对基因重组乳酸菌进行培养，使基因重组乳酸菌培养液的OD600值达到3.2。可有效的提高诱导前基因重组乳酸菌的浓度，因此可进一步增加表达物牛凝乳酶的产量。文档编号C12N1/21GK102352339SQ20111030203公开日2012年2月15日 申请日期2011年9月28日 优先权日2011年9月28日专利技术者姜毓君, 孙大庆, 李萌, 杨秀茹, 满朝新, 秦兰霞, 韩秀娥 申请人:黑龙江省乳品工业技术开发中心本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基，其特征在于表达牛凝乳酶的基因重组乳酸菌的培养基为每１０００ｍＬ液体培养基含有１０ｇ蛋白胨、５ｇ牛肉膏、２．５ｇ酵母提取物、５ｇ葡萄糖、１９ｇ　β－磷酸甘油二钠、０．５ｇ维生素Ｃ、１ｍＬ　１ｍｏｌ／Ｌ的ＭｇＳＯ４和４００μＬ的饱和碳酸钙溶液上清。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：秦兰霞，姜毓君，孙大庆，满朝新，杨秀茹，李萌，韩秀娥，
申请(专利权)人：黑龙江省乳品工业技术开发中心，
类型：发明
国别省市：93