本发明专利技术公开了一种高产γ-氨基丁酸植物乳杆菌的培养方法及应用，属于微生物发酵技术领域。本发明专利技术所提供的方法是将植物乳杆菌(Lb.plantarum)ATCC14917经过活化以后，按照3％的接种量，在发酵体系中进行培养：培养基为MRS培养基，发酵初始pH4.0-6.8；L-谷氨酸钠浓度为0-1mol/L，磷酸吡哆醛的添加量为0-0.001mol/L，发酵温度为25-42℃，发酵时间为8-72h。本发明专利技术提供的方法具有培养时间短、接种量少、γ-氨基丁酸产量高的特点。本发明专利技术所提供的方法接种量只有3％，培养时间只需要36h，但是γ-氨基丁酸产量的产量可达360.67mM/L发酵液，是对照组的7.77倍。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及一种高产T-氨基下酸植物乳杆菌的培养方法及应用，属于微生物发 酵
技术介绍
丫-氨基下酸（GABA)是广泛存在于真核生物和原核生物体内的一种非蛋白质氨 基酸，首次发现十九于世纪晚期，并成功对其进行了人工合成。GABA除在脑和脊髓中发 现外，在多种哺乳动物的近30种外周组织中均有所发现，但其浓度较低，仅为脑组织中的 1%。GABA的化学分子式为C4H9N02,分子量为103. 12。GABA在常溫下成白色片状或针状 结晶状态，分解点为202°C，无旋光性，气味微臭，具有潮解性，极易溶于水，为溶于热乙醇， 不溶于冷的乙醇、乙酸和苯酪。 目前，GABA主要是通过化学合成的方法来进行大量生产，运种生产方式对环境污 染比较严重，并且耗能高，存在一定的安全风险。然而，利用生物技术来生产GABA则可W避 免W上问题。但是，利用生物技术来生产GABA面临的首要问题是提供一种具有高产GABA 能力的菌种。在现有技术中，虽然已有研究人员对高产GABA能力的菌种进行了筛选，但所 得到的菌种的产量仍然偏低，例如，专利CN04480187A筛选获得了一株乳酸菌，但是该菌 株GABA在发酵液中的含量仅能达到5. 025g/L。专利CN10325740A获得的乳杆菌虽然产量 可W达到46. 16g/l，但接种量比较高，发酵的时间也比较长。造成W上问题的原因，一方面 是菌株自身代谢能力有限，另一方面也在于培养方法不够合理。
技术实现思路
为解决W上问题，提供能够高效的高产GABA的植物乳杆菌，本专利技术提供了一种产 T-氨基下酸植物乳杆菌的培养方法，所采取的技术方案如下： 阳0化]本专利技术的目的在于提供一种高产丫 -氨基下酸植物乳杆菌的培养方法。该方法是 将植物乳杆菌（化.plantarum)ATCC14917经过活化W后，按照3%的接种量，在如下的发酵 体系中进行培养： 培养基为MRS培养基，发酵初始pH4. 0-6.8 谷氨酸钢浓度为O-lmol/l，憐酸化 唉醒的添加量为0-0.OOlmol/l，发酵溫度为25-42°C，发酵时间为8-72h。 所述培养方法的步骤如下： 1)活化植物乳杆菌ATCC1497,获得活化植物乳杆菌；。在MRS培养基中添加0-lmol/L的k谷氨酸钢，0-0.0 Olmol/L的憐酸化唉醒， 并将抑调节至抑4.0-6.8,获得发酵培养基； 3)将步骤1)所得的活化植物乳杆菌按照3%的接种量，接种到步骤2)所得的发 酵培养基中，在25-42°C的发酵溫度下，发酵8-72h。 优选地，步骤1)所述活化，是将植物乳杆菌ATCC14917按照2%的接种量接种到 5mLMRS液体培养基中，在30°C下静置培养12h，培养结束后再将菌种接种到MRS固体培养 基中在30°C下静置培养36-4化后，挑取单菌落再置于5mL液体MRS培养基中在30°C下静 置培养12h，最后在W2%的接种量接种在50血的MRS培养基中，在30°C下静置培养12h。 阳〇1引优选地，步骤。所述k谷氨酸钢添加量为0. 375-0. 75mol/L;所述憐酸化唉醒含 量为 0.0001-0. 0007mol/L。 更优选地，步骤2)所述k谷氨酸钢添加量为0. 5mol/L;所述憐酸化唉醒含量为 0.0005mol/L〇 优选地，步骤2)所述发酵初始抑5. 0-6. 0,发酵溫度为35-40°C，发酵时间为 24-48h〇更优选地，步骤2)所述发酵初始抑5. 5,发酵溫度37°C，发酵时间为36h。 优选地，所述MRS培养基，培养基体积为化。 所述培养方法的具体步骤如下： 阳0化]1)将植物乳杆菌ATCC14917按照2%的接种量接种到5血MRS液体培养基中， 在3(TC下静置培养12h，培养结束后再将菌种接种到MRS固体培养基中在3(TC下静置培养 36-4化后，挑取单菌落再置于5mL液体MRS培养基中在30°C下静置培养12h，最后在W2% 的接种量接种在50mL的MRS培养基中，在30°C下静置培养12h，培养结束后获得活化植物 乳杆菌； 。在1尺8培养基中添加至终浓度为0. 5mol/L的k谷氨酸钢和0. 0005mol/L的憐 酸化唉醒，并将抑调节至5. 5,获得发酵培养基； 3)将步骤1)所得的活化植物乳杆菌按照3%的接种量将步骤1)所得的活化植物 乳杆菌按照3%的接种量，在37°C下发酵36h。 所述任一培养方法用于生产丫-氨基下酸。 本专利技术获得的有益效果如下：相对于现有技术，本专利技术提供的方法具有培养时间短、接种量少、丫-氨基下酸产 量高的特点。本专利技术所提供的方法接种量至有3%，培养时间只需要36h，但是丫-氨基下 酸产量的产量可达360. 67mM/L发酵液，是对照组的7. 77倍。【附图说明】 W24] 图1为不同发酵初始抑值发酵后GABA含量。图2为不同L-MSG添加量发酵后GABA含量。 图3为不同辅酶添加量发酵后GABA含量。 图4为不同发酵溫度下GABA含量。 图5为不同巧离子添加量发酵后GABA含量。 图6为不同发酵时间对GABA含量的影响。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不受实施例的限制。 本专利技术所用材料、试剂、仪器和方法，未经特殊说明，均为本领域常规材料、试剂、 仪器和方法，本领域技术人员均可通过商业渠道获得。 W巧化.plantarumATCC14917购自中国普通微生物保藏中屯、，保藏编号：CGMCC 1. 2437。 阳03引MRS培养基的组成是： K2HPO4? 3电0 (20g+50mL)、MgClz? 6电0 (5.Og+50血）、ZnS〇4? 7电0 (2. 5g巧OmL)、 CaClzQ. 5g+50血）、FeCl2(〇. 5g+50血）蒸馈水定容至1000血，调抑至5.8,121 °C灭菌 15min，4°C保存。 实施例1菌种的鉴定、保藏与活化 1.菌种的鉴定和保藏 为确定购买菌株的纯度及种属，将购买的冻干菌粉中加入适量液体MRS培养，均 匀混合后，适当稀释的菌液涂布于固体MRS培养基上，3(TC培养至有单菌落形成。随机挑取 5个单菌落，分别接种于4血液体MRS培养基中，30°C纯培养12h，至对数生长期，4°C保存备 用。 将5个单菌落菌液进行革兰氏染色，1000倍放大，在显微镜下镜检。同时将纯培养 菌液重新按照2%比例接种到对应的MRS培养基，恒溫培养达到对数生长期，连续传代培养 2次，将菌液与80%灭菌甘油W3:1的比例混合均匀，放于-20°C冻存过夜，然后置于-80°C 冰箱冷冻保存。 W40] 2.菌株活化 1)从-80°C菌种库中取经过鉴定的冻存菌株，按2%接种到5ml新鲜MRS培养基 中，30°C静置培养12h; 2)用接菌环薩取培养菌液一环与MRS固体平板上进行=区，30°C静置培养36-4化 后挑取单菌落； 阳0创如单菌落接种至5ml新鲜MRS培养基中，30°C静置培养12h; W44] 4)菌液按2%接种到50ml新鲜MRS培养基中30°C静置扩大培养培养12h。 W45] 实施例2培养条件的优化 1.发酵初始抑的优化 具体操作如下： 1)配制抑值分别为4. 0、4. 2、4. 5、5. 0、5.本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高产γ‑氨基丁酸植物乳杆菌的培养方法，其特征在于，是将植物乳杆菌(Lb.plantarum)ATCC14917经过活化以后，按照3％的接种量，在如下的发酵体系中进行培养：培养基为MRS培养基，发酵初始pH4.0‑6.8；L‑谷氨酸钠浓度为0‑1mol/L，磷酸吡哆醛的添加量为0‑0.001mol/L，发酵温度为25‑42℃，发酵时间为8‑72h。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘鹏，迟涛，方景泉，
申请(专利权)人：黑龙江省乳品工业技术开发中心，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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