本发明专利技术公开了一株蕈状芽孢杆菌及其应用。该菌株为蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)WWM09，保藏编号为CGMCC No.11047。本发明专利技术还公开了一种含有上述的蕈状芽孢杆菌菌株WWM09的生物防治制剂及其制备方法。实验表明，本发明专利技术的蕈状芽孢杆菌菌株WWM09具有直径长、耐低氧、作用谱广、适应性强，在低营养下即可快速生长繁殖等特点，因此具有良好的应用前景。由该蕈状芽孢杆菌菌株WWM09制备的生物防治制剂可以作为生物农药或生物肥料，防治黄瓜白粉病、葡萄霜霉病、月季白粉病等叶部病害，还可以防治棉花立枯病、西瓜枯萎病等多种土传植物病害。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物防治植物病害领域。具体而言，本专利技术设及一株能够高效防治植 物病害的芽抱杆菌及其用途，W及采用该芽抱杆菌制备的生物防治制剂。
技术介绍
植物病害是植物在生物或非生物因子的影响下，发生一系列形态、生理和生化上 的病理变化，阻碍了正常生长、发育的进程，从而影响人类经济效益的现象。目前对于植物 病害的防治，常规采用的方法包括传统的化学防治、培育抗病品种W及生物防治。抗病品种 培育周期长，抗性单一，而化学防治，极易造成农药残留，环境污染；同时，化学农药的长期 使用，使得病原菌对其产生抗药性，导致防效下降甚至失败。因此，利用有益微生物防治植 物病害具有广阔的前景。 芽抱杆菌度acillus)，在分类上是细菌的一个科，能形成芽抱（内生抱子）的杆 菌或球菌。包括芽抱杆菌属、芽抱乳杆菌属、梭菌属、脱硫肠状菌属和芽抱八叠球菌属等。 形成芽抱后，它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于±壤、水、空气W及动物肠道等 处。由于它们代谢快、繁殖快，四小时增殖10万倍；生命力强，耐受性好；体积大，占据空间 优势，抑制有害菌的生长繁殖等优势而备受瞩目。芽抱杆菌是植物病害生防微生物的重要 组成部分，可用于防治多种植物病害。芽抱杆菌作为生防菌防治植物病害的机制主要有：抗 生作用、营养竞争、空间竞争、重寄生作用W及诱导植物产生抗性等机制，芽抱杆菌的生防 机制主要是W产生括抗物质抑制有害病菌的生长或杀死病原菌。运些物质绝大多数为肤类 抗生素，具有高效、低残留、与环境友好等优点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于高效防治多种植物病害的新的微生物一一葦状芽 抱杆菌WWM09。本专利技术的芽抱杆菌菌株具有直径长、耐低氧、作用谱广、适应性强，在低营养 下即可快速生长繁殖等特点，因此具有良好的应用前景。 本专利技术所提供的菌株为葦状芽抱杆菌度acillusmycoides)WWM09,是从勸海浅海 海水中分离获得的，已于2015年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中屯、（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究 所），保藏编号为CGMCCNo. 11047。其具有W下生物学特性：在牛肉膏蛋白腺琼脂培养基或 LB培养基上菌落形态为圆形或不规则形，乳白偏黄色，表面粗糖起權皱，在牛肉膏蛋白腺琼 脂培养基上，28°C下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状，能运动。经革兰氏染色呈阳性（W 大肠杆菌为对照）。经芽抱染色后观察芽抱呈楠圆形或柱状。 本专利技术葦状芽抱杆菌度acillusmycoides)菌株WWM09的培养方法或繁殖方法包 括： (1)普通培养保存采用LB培养基，配方为：膜蛋白腺lOg，酵母提取物5g，氯化钢 1〇邑，琼脂15-20g，蒸馈水1000血，抑调至7. 0-7. 2 ; (2)实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为：膜蛋白腺lOg，酵母提取物5g， 氯化钢lOg，蒸馈水1000血，抑调至7. 0-7. 2;[000引 做固体培养基配方：固料和无机盐溶液，固料和无机盐溶液的质量比为1:2.0; 所述固料由按质量比为65 :20 :15的玉米面、豆巧和教皮组成；按质量百分比计，所述无机 盐溶液的组分及含量为：2. 7%憐酸二氨钟，0. 04%硫酸儀，3. 5%硫酸锭，剩余为水； (4)大量发酵培养基配方：同（3)中固体培养基配方。 本专利技术还提供一种含有所述的葦状芽抱杆菌菌株WWM09的生物防治制剂。 本专利技术所述的生物防治制剂的制备方法包括W下步骤： (1)制备葦状芽抱杆菌菌株WWM09的种子液； (2)将步骤（1)制备的种子液接种到固体培养基中，28-30°C下恒溫培养3~5d; (3)将步骤（2)培养的培养物加入无菌水，过滤，将滤液接种至大量发酵培养基， 在室溫28-30°C、相对湿度85%W上的发酵室中进行发酵培养。 其中，步骤（2)中的固体培养基由固料和无机盐溶液组成，所述固料和无机盐溶 液的质量比为1 :2. 0 ;所述固料由质量比为65 :20 :15的玉米面、豆巧和教皮组成；按质量 百分比计，所述无机盐溶液的组分及含量为：2. 7%憐酸二氨钟，0. 04%硫酸儀，3. 5%硫酸 锭，剩余为水。 并且，步骤（3)中的大量发酵培养基同固体培养基。 在本专利技术的一个具体实施方案中，所述制备方法包括W下步骤： (1)将所述葦状芽抱杆菌菌株WWM09的抱子移植到LB液体培养基中，28-30°C摇床 振荡培养3~5d得到种子液； 似将步骤（1)制备的种子液按质量比10%的比例接种到固体培养基中，28-30°C 下振荡培养3~5d;[002。 做将步骤似培养的培养物加入无菌水按质量比1 :15的比例混合，过滤，将滤 液按体积比1 :6的比例接种至发酵培养基，室溫28-30°C、相对湿度85%W上的发酵室中发 酵培养5~6d。 本专利技术也提供了上述葦状芽抱杆菌菌株WWM09或者上述生物防治制剂在防治植 物叶部病害中的用途。所述植物叶部病害可W选自黄瓜白粉病、葡萄霜霉病、月季白粉病等 一种或几种。 并且，本专利技术还提供了一种用于防治植物叶部病害的生物防治方法，所述生物防 治方法包括向具有叶部病害的植物施用上述葦状芽抱杆菌菌株WWM09或者上述生物防治 制剂。 实验表明，本专利技术的葦状芽抱杆菌菌株WWM09具有直径长、耐低氧、作用谱广、适 应性强，在低营养下即可快速生长繁殖等特点，因此具有良好的应用前景。由该葦状芽抱 杆菌菌株WWM09制备的生物防治制剂可W作为生物农药或生物肥料，防治黄瓜白粉病、葡 萄霜霉病、月季白粉病等叶部病害，还可W防治棉花立枯病、西瓜枯萎病等多种±传植物病 害。【具体实施方式】 下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但运些实施例仅是示例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术 人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可W对本专利技术技术方案的细节和形式 进行修改或替换，但运些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。 实施例1 1、葦状芽抱杆菌菌株WWM09的分离与纯化 本专利技术的葦状芽抱杆菌菌株WWM09是从海水中采用稀释平板法和平板划线法分 离获得的，分离方法为： (1)芽抱杆菌的分离：水样的采集，在山东省潍坊北部勸海海域不同地点，采用随机 取样法，分别采集离海岸2. 5米范围内的海水适量，混匀。标明采集地点、时间和采集人。称 取Ig水于lOOmL无菌水中，置于30°C摇床中15化pm震荡lOmin，然后置于60°C水浴锅中 解育30min，取100yL10 1、10 2、103稀释液涂布于LB培养基平板上，每个梯度涂布S个平 行，在3(TC培养2d后挑取LB培养基上的不同形态的微生物菌落于LB培养基平板上进行划 线，定时观察菌落生长情况。然后采用平板划线法，纯化芽抱杆菌菌株，分别编号保存。 似黄瓜白粉病高效括抗芽抱杆菌的筛选 ①初筛：黄瓜白粉病Sphaerotheca fuliginea(Schlecht)Poll.病原为单丝白粉 菌属子囊菌亚口真菌。该菌系专性寄生菌，只在活体寄主上存活。因此，筛选时必须在黄瓜 上接种病原菌培养而不是离体平板培养测定。 黄瓜白粉病喜溫湿、耐干燥。溫度10~本文档来自技高网...
【技术保护点】
蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)菌株WWM09，所述菌株的保藏编号为CGMCCNo.11047。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：牛赡光，赵炳先，李鹏，李泉涌，张淑静，
申请(专利权)人：潍坊万胜生物农药有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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