一种弯曲芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种弯曲芽孢杆菌(Bacillusflexus)JN46，保藏编号CCTCCNO:M2011231。该菌株生产的碱性淀粉酶具有较高的耐碱性，适用的pH值范围较宽，可以在碱性条件下，高效降解淀粉。该菌株生产的碱性淀粉酶主要用于纺织退浆、洗涤剂添加剂、食品、医药等领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种弯曲芽孢杆菌及其应用，特别是一种产碱性淀粉酶的弯曲芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
α -淀粉酶(EC 3. 2. 1. 1)是一种降解淀粉的重要的工业用酶，主要应用在食品、 纺织、医药、洗涤剂等领域。碱性淀粉酶最适反应PH应高于8.0，碱性淀粉酶可用于纺织品退浆、洗涤剂添加剂以及以淀粉作粘结剂的粘度调节剂等。Horikoshi (Horikoshi K. Production of alkaline enzymes by alkalophilic microorganisms. Agricultural and Biological Chemistry, 1971, 35(11) : 1783-1791)在 1971 年首先报道了产自嗜碱菌 A-40-2 的碱性淀粉酶。2007年 &xena(Saxena Rj Voight BFj Lyssenko V，Burtt NPj de Bakker PIWj Chen H， Roix JJj Kathiresan S， Hirschhorn JNj Daly MJ. Genome-wide association analysis identifies loci for type 2 diabetes and triglyceride levels. Science, 2007，316(5829) : 1331-1336)等人筛选到一株可以产碱性淀粉酶的菌株。2010年Pancha(Pancha I，Jain Dj Shrivastav A, Mishra S，Shethia B，Mishra S，VP Mj Jha B. A thermoactive -amylase from a Bacillus sp. isolated from CSMCRI salt farm. International Journal of Biological Macromoleculesj2010， 47(2):观8-四1)等人筛选出一株产耐温淀粉酶菌株。四川大学卢涛等人(卢涛等.高温α-淀粉酶生产菌株的选育.四川大学学报(自然科学版)，2002，39(6): 1131-1133)从西藏当雄八宿温泉土壤中筛选出一株分泌高温淀粉酶的高产突变菌株，为地衣芽孢杆菌，该菌生长的地理环境独特，其高温特性良好，经改造得到了一种PH活性域较宽、热稳定性较高的淀粉酶。目前，国内的前处理酶制剂市场基本被丹麦诺维信公司和美国杰能科公司所垄断。诺维信公司介绍了一种碱性淀粉酶，有较宽的PH及温度范围。目前国内外工业化的碱性淀粉酶几乎没有，因此筛选产碱性淀粉酶的优良菌株非常有必要。
技术实现思路
本专利技术提供了一种弯曲芽孢杆菌(Bacillus flexus) JN46，已于2011年7月1 日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2011231 ；以其16SrDNA全序列为基础的系统发育树如说明书附图1所示。本专利技术提供了一种碱性淀粉酶，该酶为CCTCC NO =M 2011231生产，最适反应 pH8. 0-10. 5，尤其是 9. 7。所述产碱性淀粉酶的弯曲芽孢杆菌是从碱性土壤中筛选，其保藏条件如下从生长良好的平板上接取3环弯曲芽孢杆菌到摇瓶培养基中，30°C摇床(200 rpm)培养36 h，取 0. 65 mL移入含有0. 3 mL无菌甘油的甘油管中，放入_70°C超低温冰箱保存。所述固态平板培养基为1. 0%玉米淀粉，0. 5%酵母粉，1. 5%蛋白胨，0. 5% NaCl, 0. 05% KH2PO4, 2% 琼脂粉，灭菌后，用 Na2CO3 调 pH 9.5-10.5。所述液体发酵培养基为1.5%可溶性淀粉，1.0%酵母粉，1.0%蛋白胨，0.5% NaCl, 0. 05% KH2PO4,灭菌后，用 Na2CO3 调 pH 9. 5-10. 5。所述弯曲芽孢杆菌的培养条件为将已保藏甘油管的弯曲芽孢杆菌接入液体发酵培养基，30°C，200 rpm，摇床培养36 h。将产碱性淀粉酶的弯曲芽孢杆菌发酵后的发酵液，10000 rpm离心10 min，在pH 10. 0条件下，采用DNS法测定离心后发酵上清液的碱性淀粉酶酶的酶活。在碱性条件下， 酶活明显。在不同碱性PH值下，测定碱性淀粉酶的最适反应pH，碱性淀粉酶的最适反应pH 为9. 7，在碱性环境下，可以高效降解淀粉。本专利技术自碱性土壤中筛选出一株产碱性淀粉酶的弯曲芽孢杆菌(β— flexus) JN46,该菌株可生产耐强碱的碱性淀粉酶，该碱性淀粉酶可以在强碱的环境下高效降解淀粉。将菌株生产的碱性淀粉酶应用于纺织退浆、洗涤剂添加、医药、食品等领域，可以在碱性环境下高效降解淀粉，达到所需的目的。附图说明图1 弯曲芽孢杆菌(Bacillus flexus) JN46的系统发育树图2 弯曲芽孢杆菌产生的碱性淀粉酶的最适反应pH图3 弯曲芽孢杆菌产生的碱性淀粉酶的最适稳定pH 生物材料样品保藏声明本专利技术筛选得到的弯曲芽孢杆菌(Bacillus flexus) JN46，于2011年7月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO =M 2011231，保藏地址为中国武汉武汉大学。具体实施例方式实施例1 产碱性淀粉酶的弯曲芽孢杆菌筛选方法取采取的一定量碱性土壤，放入装有100 mL无菌水及玻璃珠的250mL三角瓶中，振荡，稀释不同浓度梯度，将不同浓度梯度稀释好的样品分别涂布到含有玉米淀粉的PH值为 10.0的固体培养基平板上，30°C培养36 h。反复进行平板划线分离，重复三次得到纯化的单菌落，供下一步鉴定用。鉴定主要通过1)菌落特征观察在含有玉米淀粉的固体培养基平板上，用肉眼直接观察，在菌落周围有淀粉降解透明圈的菌株。2)个体形态观察用光学显微镜染色观察，挑起有芽孢的菌株。将满足鉴定条件的菌株挑出甘油管保藏。以3%接种量取-70°C甘油管保藏液接种于发酵培养基中，30°C，200rpm摇瓶培养。取30°C摇床培养的36 h的发酵液，10000 rpm，4°C离心10 min。离心结束后，取上清液，采用DNS法，在碱性条件下测定碱性淀粉酶的酶活。通过利用DNS法对碱性淀粉酶进行测定，筛选出一株具有较强耐碱能力且在碱性环境下可高效降解淀粉的菌株，所产碱性淀粉酶酶活为767. 5 U/mL,通过16SrDNA分析可知该菌株为弯曲芽孢杆菌，于2011年保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2011231。实施例2 弯曲芽孢杆菌产碱性淀粉酶最适反应pH的测定DNS法测定碱性淀粉酶酶活1)DNS试剂的配置称取2. 5 g 3，5-二硝基水杨酸溶于少量水中，加入0.5 g苯酚，再溶解0.075 g亚硫酸钠、2. 5 g氢氧化钠、50 g酒石酸钾钠，将其转入500 mL容量瓶中摇勻定容，储存于棕色瓶放置在4°C冰箱中待用。2)麦芽糖标准曲线的制作配制0.2 g/L - 1.0 g/L不同浓度的麦芽糖溶液。取 1 mL不同浓度的麦芽糖与同体积的DNS溶液混合，放入沸水浴中，水浴10 min0用冷水冷却，定容至10 mL，A54tl测定吸光值。以麦芽糖的浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标，制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，堵国成，刘龙，李江华，杨海泉，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：