本发明专利技术涉及食用菌种培养技术领域，特别涉及一种用于蜜环菌孢子分离、培养的培养基及方法和应用。所述培养基包括基础培养基：马铃薯150-220份，蔗糖15-25份，琼脂15-25份，水1000份；固体基质：150-200份。所述固体基质为谷类或豆类或杂粮或其组合；所述培养基为斜面培养基。采用所述的培养基进行蜜环菌孢子的分离、培养方法为：先制作基础培养基；再将固体基质在水中浸泡后，装入基础培养基中，消毒灭菌冷却后；接入蜜环菌孢子培养成菌种。本发明专利技术既适于蜜环菌基质，菌索、组织块分离，更适用于孢子的分离，一次性将孢子繁育成原种，从分离到纯化的时间为25-30天，中途不转管，且此菌种既可当试管母种，又可直接当原种用；缩短了蜜环菌种的分离时间和选育周期。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食用菌种培养
，特别涉及一种用于蜜环菌孢子分离、培养及方法和应用。
技术介绍
蜜环菌(Armillariella mellea)是真菌界、担子菌门、层菌纲、伞菌目、白磨科、小蜜环菌属的一种食药用真菌。蜜环菌在自然界中与天麻、猪苓等生物相互作用和协同进化有着密切的关系。在天麻、猪苓栽培中，蜜环菌种的活性或是优劣，直接影响或是决定着它们的产量和质量。蜜环菌种的获得或是分离技术方法，有从低级到高级，简单到复杂的五种技术和方法。一是菌材分离，二是菌索分离，三是种麻分离，四是组织分离，五是孢子分离。目前我国的研究所和菌种生产厂家主要是用菌索和种麻分离，少用组织分离，更少用孢子分离获得菌种。用孢子分离的困难之一是，蜜环菌子实体在自然界中一年只出现一次(即重阳节前后)，且孢子弹射的时间很短(约30个小时左右)，人为采取孢子的季节和时间受到限制。之二是，人工用菌材培育蜜环菌子实体周期长(一至三年)，且有技术难度和环境限制。之三是，分离过程中易感杂，须要有一定的设备和相当的技术。目前蜜环菌种分离和制种工艺是:从分离材料(基质、菌索、子实体)上获得菌种即试管种(15d) —试管种(15d)—原种(45d) —栽培种(50d)。且一支试管种只能扩接原种6瓶左右。有人报道用蜜环菌索为材料的免消毒分离方法所用是PDA培养基(张方玉一种简便的蜜环菌分离方法微生物学通报1995 20(6):382); —种优化的蜜环菌分离与纯化方法(王传华王义敏等一种优化的蜜环菌分离与纯化方法武汉植物学研究2005，23:478?481)，均在不同程度上有效提高了蜜环菌种的分离成功率，其不足点是，前者基质易裂口，皱缩;后者基质胶质状程度不如琼脂。其它杂菌还能深入到此种培养基中生长，因而降低了分离或纯化的成功率。根据蜜环菌生活史特性，孢子一菌丝一菌索一子实体。尤其是菌丝(分解吃料)与菌索(穿越传输)有不同的功能和互相转换的特性，配制的培养基既要满足孢子和菌丝及菌索的生长，还要能抵挡或阻隔其它真菌和细菌的生长。
技术实现思路
本专利技术在于提供，能够分离纯化、利于孢子萌发，进而生长为菌索和菌丝，即菌种。本专利技术的具体方案如下: 一种用于蜜环菌孢子分离、培养的培养基，所述培养基包括按重量份的以下组分: 马铃薯150-220份，鹿糖15-25份，琼脂15-25份，水1000份，固体基质150-220份； 所述固体基质为谷类或豆类或杂粮或其组合。本专利技术优选方案，所述培养基包括按重量份的以下组分: 马铃薯180-210份，蔗糖18-22份，琼脂18-22份，水1000份，固体基质180-200份； 所述谷类为小麦或大麦或燕麦或黑麦或玉米或其组合； 所述豆类为蚕豆或绿豆或赤豆或黑豆或其组合； 所述杂粮为或薏米或高粱或黑米或高粱或荞麦或其组合。所述培养基为斜面培养基。采用所述的培养基进行蜜环菌孢子的分离、培养，所述方法包括以下步骤: 1)将固体基质在水中浸泡，得到物料1; 2)将培养基组分马铃薯切片沸水煮15分钟过滤，过滤液、蔗糖、琼脂溶解于水中，分装至三角瓶中，得到基础培养基； 3)将物料1加入所述步骤2)中的基础培养基中，封口、灭菌、冷却得到用于蜜环菌孢子分尚、培养的培养基； 4)从蜜环菌子实体上收集蜜环菌孢子，挑取蜜环菌孢子接种在所述步骤3)的培养基上进行培养，并剔除感染杂菌的接种瓶； 完成孢子的分尚、培养。所述步骤1)固体基质在水中浸泡浸泡时间为20-30 ho所述步骤4)蜜环菌孢子培养温度为20_22°C，培养时间为10-15天。所述步骤4)接种的蜜环菌孢子收集方法为: 蜜环菌子实体菌衣开裂25_30h，菌盖边缘成铜罗边时，用消毒的剪刀在紧靠菌褶部位剪去菌柄，将菌盖放在已消毒的滤纸上，菌盖上面盖上一张滤纸，再在上面盖一张干净薄膜； 25-30 h后，蜜环菌孢子大量弹射在滤纸上，得到接种孢子。还包括对所得到的接种孢子优良性的检测方法，所述检测方法为将得到的蜜环菌种，在室内1月上旬培养好菌材，在3月上旬室外栽培天麻，当年10月挖取天麻，并测定天麻产量。所述的培养基在食用菌菌种分离、培养中的应用。本专利技术提供，有益效果如下: 1、本配方培养基，科学地配制出适合蜜环菌菌丝和菌索，分离、培养生长，而不适合其它杂菌生长的培养基配方，既能提供和满足蜜环菌种生长所需的营养物质，又能有效的阻隔其它杂菌类的生长，即其它杂菌不能穿越琼脂生长，只能在琼脂的表层面上生长，但蜜环菌索能穿入琼脂，并深入到被琼脂包裹的固体基质中生长，所以本专利技术培养基与常规培养基比较，不仅能大大提高分离或纯化的成功率，还能最大程度地提高菌丝和菌索生长的数量和质量； 2、本培养基配方既适于蜜环菌基质，菌索、组织块分离，更适用于孢子的分离。用无性时期的料材(基质，菌索、组织块)获得的菌种在生产上易退化，用有性时期的材料(孢子)获得的菌种能恢复和提高物种的活力和抗性，因此，用蜜环菌子实体产生的孢子分离获得的菌种，是新一代的生命个体或群体，因而活力最强，用这种菌种生产蜜环菌原种和栽培种，其活力和抗性(抗杂性、抗逆性)最强，因而能提高菌种的生产效益和经济效益； 3、采用本专利技术技术，不转管扩接成原种，一次性将孢子繁育成原种从分离到纯化的时间为25-30天，中途不转管，一次性将分离的母种扩大50倍，且此种既可当试管母种，又可直接当原种用； 4、采用本专利技术获得的菌种发菌材，由于具有新一代的生命力和生活力，其“吃料”能力，即分解木材的活力旺盛，菌索很快就能缠绕到木材，并钻入到木材的韧皮部和木质部产生菌丝体，菌丝体又形成菌索，木材上长满了菌丝体和菌索，为天麻生长准备好了丰富，纯洁(无杂菌)的食粮即营养物质，因而能显著提高天麻产量和质量； 5、采用本专利技术缩短了蜜环菌种的分离培养时间，常规方法要125-130天，本专利方法只需要70-80天； 6、采用本专利技术缩短了蜜环菌种选育的生产周期，常规方法要750天，时间历经周期三年，本方法只需390天，时间历经周期二年； 7、本专利技术培养基中没有添加其他真菌和细菌抑制药物，组分简单且有利于蜜环菌种的生长； 8、采用本专利技术培养的蜜环菌菌材，栽培天麻，天麻产量提高20%-30%。【附图说明】图1:基础培养基分离培养蜜环菌种状态示意图； 图2:蜜环菌盖不意图； 图3:蜜环菌盖弹射出的孢子示意图。图4:本专利技术专利培养基(斜面)分离培养蜜环菌种状态示意图； 图5:本专利技术专利培养基(直立)培养蜜环菌种状态示意图； 图6:传统方法采用的培养基状态示意图。【具体实施方式】下面结合实施例来进一步说明本专利技术，但本专利技术要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。根据蜜环菌生活史特性，孢子一菌丝一菌索一子实体。尤其是菌丝(分解吃料)与菌索(穿越传输)有不同的功能和互相转换的特性，配制的培养基既要满足孢子和菌丝及菌索的生长，还要能抵挡或阻隔其它真菌和细菌的生长。实施例1基础培养基培养分离培养蜜环菌种 一种用于蜜环菌孢子分离、培养的培养基，其特征在于:所述培养基包括按重量份的以下组分: 马铃薯200份，蔗糖20份，琼脂18份，水1000份； 将培养基组分马铃薯切片沸水煮15分钟过滤，过滤液、蔗糖、琼脂溶解于水中，分装至三角本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于蜜环菌孢子分离、培养的培养基，其特征在于：所述培养基包括按重量份的以下组分：马铃薯150‑220份，蔗糖15‑25份，琼脂15‑25份，水1000份，固体基质150‑220份；所述固体基质为谷类或豆类或杂粮或其组合。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王绍柏，
申请(专利权)人：三峡旅游职业技术学院，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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