幽门螺杆菌分离培养的样本组织的专用保存、运输培养基制造技术

本发明专利技术涉及携带微生物样本的保存运送技术，特别公开了一种携带有幽门螺杆菌的样本组织的专用保存、运输培养基。该组织的保存、运送培养基由Na2HPO4.12H2O(分析纯)、NaH2PO4.H2O(分析纯)、蛋白胨、胰蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、亚硫酸钠、蒸馏水、无水碳酸氢钠、万古霉素、两性霉素按一定要求配比，添加去离子水混合配制而成。本发明专利技术既能杀灭和抑制在采集病灶组织时受到的其它微生物的污染，还能有效保持病变组织内幽门螺杆菌的活性，便于对幽门螺杆菌的分离培养，使检测结果更加可靠。

【技术实现步骤摘要】
(一)
本专利技术涉及携带有微生物的样本的保存运送技术，特别涉及到一种携带有幽门螺杆菌的样本组织的保存、运输培养基。(二)
技术介绍
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，HP)是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤和胃癌等疾病的主要致病因素。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构(WHO/IARC)将幽门螺杆菌定为I类致癌原，是目前唯一被列为致癌因子的原核生物性病原微生物。由于其为微需氧菌，环境氧要求为5～8％，在大气或绝对厌氧环境下不能生存，生长营养条件较高，而普通培养基在保存或运输携带有幽门螺杆菌的样品过程中会造成大量幽门螺杆菌的死亡，给临床检验及相关疾病的研究带来了极大不便。因此，对携带有幽门螺杆菌的样本进行正确保存、运送成为了该微生物分离培养成功与否的关键。目前市场上尚未有单独针对携带有幽门螺杆菌的样本的保存、运送培养基，而常用的保存运送培养基可保存运送的菌种种类广泛，且这类培养基在形态上多为固体或半固体琼脂培养基，虽能在一定程度上保存样本中微生物的活性，但依然存在易破碎、粘附性高、样本中幽门螺杆菌存活率极低等缺点。导致样品保存不完整，最终影响检验结果。本专利技术不仅成功模拟了相似于感染人体体液的环境(pH值在7.35～7.45之间)，更有效抑制了其它微生物的污染，使得携带有幽门螺杆菌的样本组织保存于这种保存、运送培养基中，既能使组织保持活性，又能使存在于该组织内的幽门螺杆菌维持在较高存活和繁殖的水平，明显提高了检验的效率和准确性。(三)
技术实现思路
本专利技术为了弥补针对幽门螺杆菌的样本组织的保存、运输的空白。提供了一种方法简便，且对幽门螺杆菌检存活率较高的保存、运送携带有幽门螺杆菌的样本的培养基。并对该培养基进行了科学系统的生物学性能鉴定。本专利技术是通过如下技术方案实现的：一种幽门螺杆菌分离培养的样本组织专用保存、运送培养基。其特征为，由以下重量份数的原料配制而成：Na2HPO4.12H2O(分析纯)27～32份、NaH2PO4.H2O(分析纯)2～4份、蛋白胨8～12份、胰蛋白胨8～12份、葡萄糖0.5～1.5份、氯化钠6～8份、亚硫酸钠0.05～0.15份、其余为去离子水，共计1000份，无水碳酸氢钠适量调节PH至7.4～7.6，高温高压后加入万古霉素10‰份、两性霉素5‰份。其优选的各原料的重量配比为：Na2HPO4.12H2O(AR)(分析纯)29.04g、NaH2PO4.H2O(分析纯)2.62g、蛋白胨10g、胰蛋白胨10g、葡萄糖1g、氯化钠7g、亚硫酸钠0.1g、其余为去离子水，共计1000ml，无水碳酸氢钠适量调节PH至7.4～7.6，高温高压后加入万古霉素10mg、两性霉素5mg。本专利技术原料中的蛋白胨、胰胨、葡萄糖等物质可给样本组织提供保持活性的必需营养物质，其中氯化钠的含量为0.7％，为幽门螺杆菌存活的最佳渗透压浓度，重亚硫酸钠的水溶液还原性较强，可使幽门螺杆菌的局部环境为微需氧，有利于幽门螺杆菌生长繁殖。使用两种抗生素的目的为抑制和杀灭在采集样本过程中受到的其它微生物的污染，保证和提高样品中幽门螺杆菌的存活率。所述培养基为液体培养基，配制原料中的各种物质发挥各自的作用，达到既保存样本组织自身的活性，又能使幽门螺杆菌在脱离机体后的组织中还能达到较好的存活。(四)具体实施方式实施例1制备方法：1、原材料干燥：将Na2HPO4.12H2O(分析纯)、NaH2PO4.H2O(分析纯)、葡萄糖、氯化钠、亚硫酸钠和无水碳酸氢钠分别置于不锈钢盘中，放入80℃的烘箱中，烘烤至恒重。2、称量：Na2HPO42306g、NaH2PO4456g、蛋白胨2000g、胰蛋白胨2000g、葡萄糖200g、氯化钠1400g、亚硫酸钠20g、无水碳酸氢钠约160g。3、球磨：将上述原材料装入球磨桶内球磨6小时，转速控制在每分钟100转。若温度较高，需注意对球磨桶降温。4、分装：将干燥培养基装在干燥、清洁的塑料瓶内，密封。使用方法：1、称取携带有幽门螺杆菌的样本组织的专用保存、运送培养基粉末18.64g，置于三角烧瓶中，加400ml升蒸馏水，充分溶解。2、置于压力蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌20分钟。取出冷却。3、加入万古霉素4mg和两性霉素2mg。充分混匀。4、分装于无菌样品运送管中，每支1ml。冷藏保存。实施例2质量鉴定：1、物理性能鉴定：(1)感官性状：幽门螺杆菌分离培养的样本组织的专用保存、运送培养基干粉呈淡黄色粉未，无潮解结块。(2)pH：7.4～7.6。(3)水份含量：应低于7％。(4)澄清：所制备的保存、运送液呈淡黄色、透明、澄清液体，且无颗粒沉淀。2、生物学性能鉴定(分值鉴定法)：(1)材料A指示菌：金黄色葡萄球菌(ATCC25922)大肠埃希菌(ATCC25923)枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC9372)铜绿假单胞菌(ATCC27853)B培养基：a所述幽门螺杆菌分离培养的样本组织的专用保存、运送培养基。b对照培养基(保密)C器材：15×15中试管(灭菌)；1mL移液管(灭菌)；5mL移液管(灭菌)；L棒；烧杯；平皿(灭菌)；95％乙醇；混匀器；游标卡尺；接种环；酒精灯；三角烧杯(250mL)(2)操作方法：A培养基配制：称取干燥幽门螺杆菌分离培养的样本组织的专用保存、运送培养基粉末18.64g，置于三角烧瓶中，加4.8g纯化琼脂粉，加400ml升蒸馏水，充分溶解。经121℃20min，冷却至45～50℃，倾注平皿，每只平皿20mL(直径为9cm)，备用。称取对照培养基17.67g，置于三角烧瓶中，加蒸馏水400mL，加温溶解后，经121℃20min灭菌，冷却至45～50℃，倾注平皿，每只平皿20mL(直径为9cm)，备用。B稀释液配制：幽门螺杆菌快速生长添加剂10ml，置于三角烧瓶中，加蒸馏水90mL，加蒸馏水450mL。菌株稀释培养：取已复苏的4株菌种，分别接种在对照培养基上，37℃培养24h。进行如下操作：取无菌试管7支，分别标记0～6。其中标记为0的试管中加入已灭菌的稀释液1mL。用接种环挑取单个菌落(直径约2mm菌落2/3个)，接种于试管0中，混合均匀，使菌液浓度约为106cfu/ml。随后在标记1～6的试管中分别用5mL移液管加入稀释液4.5mL。取试管1中菌悬液0.5mL，置于试管2稀释液中，丢弃移夜管，另取一支1mL移液管，置于试管1中吹打均匀(或用混匀器振荡均匀)，稀释度为10-1，并吸取0.5mL菌悬液置于试管2稀释液中，丢弃移液管......重复上述操作进行梯度稀释，使试管6中菌悬液浓度为10-6。取幽门螺杆菌分离培养专用2号培养基和对照培养基平皿各本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特定的针对携带有幽门螺杆菌的样本组织的专用保存、运送培养基，其特征为，由以下重量份数的原料配制而成：Na2HPO4.12H2O(分析纯)27～32份、NaH2PO4.H2O(分析纯)2～4份、蛋白胨8～12份、胰蛋白胨8～12份、葡萄糖0.5～1.5份、氯化钠6～8份、亚硫酸钠0.05～0.15份、其余为去离子水，共计1000份，无水碳酸氢钠适量调节PH至7.4～7.6，高温高压后加入万古霉素10‰份、两性霉素5‰份，低温保存备用。

【技术特征摘要】
1.一种特定的针对携带有幽门螺杆菌的样本组织的专用保存、运送培养基，其特征为，由以
下重量份数的原料配制而成：Na2HPO4.12H2O(分析纯)27～32份、NaH2PO4.H2O(分析
纯)2～4份、蛋白胨8～12份、胰蛋白胨8～12份、葡萄糖0.5～1.5份、氯化钠6～8份、亚硫酸
钠0.05～0.15份、其余为去离子水，共计1000份，无水碳酸氢钠适量调节PH至7.4～7.6，高
温高压后加入万古霉素10‰份、两性霉素5‰份，低温保存备用。
2.根据权利要求1所述的携带有幽门螺杆菌的样本组织的专...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨宁敏，
申请(专利权)人：杭州致远医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33