用于菌种长期保存的液体复合保护剂及其制备、使用方法技术

本发明专利技术涉及医学检验质量控制领域，具体的涉及一种用于菌种长期保存的液体复合保护剂及其制备、使用方法。该种用于菌种长期保存的液体复合保护剂，以100mL溶液剂组成为：乙二醇15‑20mL、甘油10‑15mL、营养肉汤0.5‑1g、海藻糖0.3‑0.8g、脑浸粉0.1‑0.5g、其余为蒸馏水。本发明专利技术提供的用于菌种长期保存的液体复合保护剂，多种细菌菌种的保护性好，与菌种混合后‑20℃及以下即可保证菌种的活性，并且不会影响微生物的生化特征，无需冻干、复溶和避光保藏，使用、操作非常方便于临床细菌检测；本发明专利技术的液体复合保护剂对使用本发明专利技术液体复合保护剂保护的菌种，可以在‑20℃的环境下稳定存活超过1年，‑70℃的环境下稳定存活超过10年，大大方便特殊菌株长期保存。

Liquid composite protective agent for long-term preservation of bacteria and preparation and use method thereof

The invention relates to the field of medical laboratory quality control, in particular to a liquid composite protective agent for long-term preservation of bacteria and a preparation method thereof. This kind of fungus for the long-term preservation of liquid composite protective agent, 100mL solution agent is composed of ethylene glycol 15, glycerol 10 20mL 15mL, 0.5 1g, nutrient broth 0.3 trehalose 0.8g and brain extract 0.1 0.5g, distilled water for the rest of. The invention provides a fungus for long-term preservation of liquid composite protective agent, good protection of various bacterial species and strains, mixed 20 DEG C and below to ensure bacterial activity, and will not affect the biochemical characteristics of microorganisms, without freeze-drying, re dissolution and avoid light preservation, and the operation is very convenient in clinical use bacterial detection; the invention of liquid composite protective agent on the use of the liquid compound protection species that can survive in 20 OC for more than 1 years, 70 OC stable survived more than 10 years, greatly facilitate the long-term preservation of special strains.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学检验质量控制领域，具体的涉及一种用于菌种长期保存的液体复合保护剂及其制备、使用方法。
技术介绍
细菌菌种是一种重要的生物资源，细菌菌种保藏是重要的细菌科研、临床检测的基础工作，我国的专业菌种库采用的保藏方法与国外也基本一致，目前采用的保藏方法主要有定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃冰箱冻结法、液氮超低温冻结法等，目的是为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境，通常采取干燥、低温、缺乏氧气和养料等方式，使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。这些方法普遍需要昂贵的专用仪器，设备成本高，保藏过程成本也高，使用不方便。为解决上述问题，授权公告号为CN102994388B的专利技术专利公开了一种菌种保藏液和菌种保藏方法，该种菌种保藏液，以胰蛋白0.8g-1.2g、酵母粉0.2g-0.6g、氯化钠0.4g-1.0g、葡萄糖0.2g-0.6g、二甲亚砜2mL-10mL、甘油10mL-30mL、其余为水。该种菌种保藏液中通过二甲亚砜和甘油可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。但使用本专利技术的方法在使菌种在-18℃保藏两年以及在25℃复苏一个月均存活。对菌种保藏的时间是决定菌种保藏液质量好坏的重要因素，而因提高菌种保藏时间上，现有的菌种保藏液和菌种保藏方法有待进一步改进。
技术实现思路
为了克服现有问题，本专利技术提供一种用于菌种长期保存的液体复合保护剂及其制备、使用方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：用于菌种长期保存的液体复合保护剂，其特征在于，该液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇15-20mL、甘油10-15mL、营养肉汤0.5-1g、海藻糖0.3-0.8g、脑浸粉0.1-0.5g、其余为蒸馏水。进一步的，该液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇16mL、甘油14mL、营养肉汤0.9g、海藻糖0.5g、脑浸粉0.2g、其余为蒸馏水。进一步的，该液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇18mL、甘油12mL、营养肉汤1mL、海藻糖0.6g、脑浸粉0.3g、其余为蒸馏水。进一步的，该液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇17mL、甘油13mL、营养肉汤0.7mL、海藻糖0.4g、脑浸粉0.4g、其余为蒸馏水。进一步的，所述营养肉汤的成分(g/L)为蛋白胨10.0、牛肉浸粉3.0、氯化钠5。进一步的，营养肉汤的PH值为7.2±0.2。用于菌种长期保存的液体复合保护剂的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，制备的营养肉汤；步骤2，按照菌种长期保存的液体复合保护剂的原料配比称取原料，并充分混合后获得复合保护剂。优化的，营养肉汤的制备方法如下：称取营养肉汤的原料,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟备用。菌种长期保存的方法，使用上述的用于菌种长期保存的液体复合保护剂，其特征在于：菌种与液体复合保护剂混合后于-20℃及以下保藏。优化的，菌种为革兰阳性、革兰阴性菌中的一种。由上述对本专利技术的描述可知，本专利技术提供的用于菌种长期保存的液体复合保护剂，多种细菌菌种的保护性好，与菌种混合后-20℃及以下即可保证菌种的活性，并且不会影响微生物的生化特征，无需冻干、复溶和避光保藏，使用、操作非常方便于临床细菌检测；本专利技术的液体复合保护剂对使用本专利技术液体复合保护剂保护的菌种，可以在-20℃的环境下稳定存活超过1年，-70℃的环境下稳定存活超过10年，大大方便特殊菌株长期保存。具体实施方式以下通过具体实施方式对本专利技术作进一步的描述。本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术采用的技术方案如下：用于菌种长期保存的液体复合保护剂，其特征在于，该液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇15-20mL、甘油10-15mL、营养肉汤0.5-1g、海藻糖0.3-0.8g、脑浸粉0.1-0.5g、其余为蒸馏水，其中营养肉汤的成分(g/L)为蛋白胨10.0、牛肉浸粉3.0、氯化钠5，且营养肉汤的PH值为7.2±0.2。该种用于菌种长期保存的液体复合保护剂种各种组份原料相互配合，协同作用，实现对菌种的长期保藏，其中乙二醇具有协同保护作用；甘油可降低冰点，使细菌内水分在冻结前透出细菌外，避免细菌损伤；脑浸粉有利于链球菌、肺炎球菌、脑膜炎双球菌保存；营养肉汤提供氮源、维生素和生长因子；海藻糖在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面能形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质分子不变性失活，从而维持生命体的生命过程和生物特征，对多种生物活性物质以及细菌具有非特异性保护作用。用于菌种长期保存的液体复合保护剂的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，制备的营养肉汤，称取营养肉汤的原料,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟备用；步骤2，按照菌种长期保存的液体复合保护剂的原料配比称取原料，并充分混合后获得复合保护剂。菌种长期保存的方法，使用上述的用于菌种长期保存的液体复合保护剂，其特征在于：菌种与液体复合保护剂混合后于-20℃及以下保藏。具体实施例一：液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇16mL、甘油14mL、营养肉汤0.9g、海藻糖0.5g、脑浸粉0.2g、其余为蒸馏水。将本专利技术的液体复合保护剂与一定量的脑膜炎金黄杆菌(菌株号2006.61424)的悬液混合均匀，于-20℃保藏12月、-70℃保藏10年之后复苏，保留的活菌生理生化特征及16sRNA测序鉴定均未发生变异，表明本专利技术的保护剂对该菌株均具有良好的保护作用。具体实施例二：液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇18mL、甘油12mL、营养肉汤1mL、海藻糖0.6g、脑浸粉0.3g、其余为蒸馏水。将本专利技术的液体复合保护剂与一定量的香味类香味菌(菌株号2009.63039)的悬液混合均匀，于-70℃保藏6年之后(2015年)复苏，保留的活菌生理生化特征及16sRNA测序鉴定均未发生变异，表明本专利技术的保护剂对该菌株均具有良好的保护作用。具体实施例三：液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇17mL、甘油13mL、营养肉汤0.7mL、海藻糖0.4g、脑浸粉0.4g、其余为蒸馏水。将本专利技术的液体复合保护剂与一定量的鸟肠球菌(菌株号2014.52483)的悬液混合均匀，于-20℃保藏12月后复苏，保留的活菌生理生化特征及16sRNA测序鉴定均未发生变异，表明本专利技术的保护剂对该菌株均具有良好的保护作用。上述仅为本专利技术的若干具体实施方式，但本专利技术的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本专利技术进行非实质性的改动，均应属于侵犯本专利技术保护范围的行为。本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于菌种长期保存的液体复合保护剂，其特征在于，该液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇15‑20mL、甘油10‑15mL、营养肉汤0.5‑1g、海藻糖0.3‑0.8g、脑浸粉0.1‑0.5g、其余为蒸馏水。

【技术特征摘要】
1.用于菌种长期保存的液体复合保护剂，其特征在于，该液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇15-20mL、甘油10-15mL、营养肉汤0.5-1g、海藻糖0.3-0.8g、脑浸粉0.1-0.5g、其余为蒸馏水。2.根据权利要求1所述的用于菌种长期保存的液体复合保护剂，其特征在于：该液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇16mL、甘油14mL、营养肉汤0.9g、海藻糖0.5g、脑浸粉0.2g、其余为蒸馏水。3.根据权利要求1所述的用于菌种长期保存的液体复合保护剂，其特征在于：该液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇18mL、甘油12mL、营养肉汤1mL、海藻糖0.6g、脑浸粉0.3g、其余为蒸馏水。4.根据权利要求1所述的用于菌种长期保存的液体复合保护剂，其特征在于：该液体复合保护剂以100mL溶液剂组成为：乙二醇17mL、甘油13mL、营养肉汤0.7mL、海藻糖0.4g、脑浸粉0.4g、其余为蒸馏水。5.根据权利要求1或4任意一项所述的用于菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：明德松，
申请(专利权)人：明德松，
类型：发明
国别省市：福建;35