本发明专利技术提供一种从含有OPC的植物原料中提取低聚原花青素的方法，所述方法的特征在于，在提纯过程中保持无氧或低氧以及低温条件，并且使用避光环境；本发明专利技术还提供由所述方法得到的原花青素，其特征为：富含原花青素低聚体，提取物置于自然条件下会发生自氧化现象；本发明专利技术还提供由上述方法得到的原花青素产品用于清除超氧阴离子自由基O2-，羟基自由基HO·的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种低聚原花青素及其提取的方法，特别涉及到在避光、脱氧及低温 条件下，经溶剂提取和柱层析得到的高活力原花青素的方法以及由所述方法得到的低聚原花青素产品。
技术介绍
1、原花青素的功能原花青素是越橘、葡萄籽等果实中大量存在的一种黄烷醇类多酚类化合物。也是 越橘中最重要的功能成分。其中主要呈色物质由飞燕草色素(delphinidir^De)、矢车菊 色素(cyanidin ；Cy)、牵牛花色素(petunidin ；Pet)、芍药花色素(peonidin ；Peo)和锦葵 色素(malvidin ；Mal)五种色素所衍生的众多花色素苷和乙酰化花色素苷所组成，花色素 苷种类和含量视越橘品种而异。越橘原花青素结构上主要由黄烷醇中的单体(+)_儿茶素 , (_)_表儿茶素和(_) _表儿茶素没食子酸酯 聚合而成，其平均聚合度最高达十五聚体。通常 将二至四聚体称为低聚体(procyanidolic oligomers, 0PC)，将五聚体以上的称为高聚体 (procyaLnido 1 icpo 1 ymers,PPC)。PC各单元间连接主要有C4-C6和C4-C8 二种方式，由于 单体的构象或键合位置的不同，可有多种异构体，且各聚合体和同聚异构体之间极性相近， 因此原花青素的拆分和结构表征一直比较困难。原花青素不仅是越橘的主要功能成分，其他多种重要的保健植物品种，如银杏 (叶)、葡萄(子)、黑加仑、黑豆、密蒙花(刺槐素)、高粱红素、萝卜红、红米素、玫瑰茄红、 桑椹红、可可壳、茶叶(酚)，其主要功效成分也是OPC或其衍生物。1950年，Masquelier 从松树皮中提取出大量的0PC，并在法国将松树皮提取物(其中含有约85%的0PC)注册为 药物，其商品名为Pycnogenl，用于提高血管的抵抗力，降低毛细血管的脆性和通透性。 在随后的实际应用中，欧洲的医生们发现，OPC对诸如花粉过敏、关节炎、胃溃疡等疾病同样 也具有明显的疗效。在德国，用葡萄籽原花青素制成的专利产品已用于治疗微循环疾 病，包括眼睛与外周毛细血管通透性疾病及静脉与淋巴功能不全W]。法国的Bonaure等发 明了以原花青素低聚体或单体为活性物(>1%)的治疗牙周病的制剂并获专利保护。 法国利用葡萄籽原花青素制成了血管保护剂和抗炎剂W]。德国研制出用于治疗酒精中毒 的原花青素制剂并获专利保护。在罗马尼亚，一种商品名为Elldotelon原花青素制剂 已上市并用于治疗毛细血管疾病。法国、意大利也已将原花青素开发研制成化妆品，可 较好地防护紫外线对皮肤的伤害作用。日本开发出用作药品、食品和化妆品抗氧化 剂的原花青素，并获专利保护。1996年日本厚生省批准把葡萄籽提取物列入《天然食品剂 名单中》，并以商品“Gravinal”投入市场。在美国，葡萄籽原花青素作为健康食品的原 料直接制成胶囊等剂型，成为天然植物药十大畅销品之一。由于葡萄籽原花青素具有极强 的抗氧化性成分，因此在欧美被广泛用于各种普通食品如蛋糕、奶酪等，既可作为营养强化 剂，又可作为天然防腐剂使用。越橘原花青素是各类花青素中品质较高的一种，据报道它具有抗氧化、抗炎症、促进视紫红质合成、提高免疫力、抗癌等多种生理功能。原花青素发挥生物活性的主要机制包括以下5个方面1)抗氧化作用。1951年，法国Jacques Masquelier首次发现了 OPC的抗氧化性能。 原花青素具有很强的抗氧化活性，原因在于原花青素分子中具有多电子的羟基，8个酚羟基 均与双键共轭，为氢原子的给予体，且芳环上的共轭双键使电子在分子中得到稳定。Maffei 等对葡萄籽提取物原花青素(GSPE)研究显示，高分子量成分儿茶素寡聚物在0. I-IOmmol/ L时能防止细胞膜中维生素E损失，显著减少膜脂质过氧化，明显推迟溶血的发生时间，能 显著剂量依赖性地在羟基自由基诱导卵磷脂过氧化的自动氧化相中使维生素E再生，且延 缓其消耗，是维生素E的生理再生剂。研究同时证明葡萄籽原花青素抑制卵磷脂(PLC)过 氧化的作用明显强于对照儿茶素，IC50分别为2. 5 μ mol/L和50 μ mol/L.抑制PLC诱导 期和增殖期中共轭双烯形成和增长活性IC50分别为0. 1 μ mol/L和0. 5 μ mol/L,明显强 于阳性对照组α-维生素E，其IC50 (50%自由基失活所需的浓度)分别为1. 5 μ mol/L和 1. 25 μ mol/L,该原花青素还可非竞争性地抑制促进过氧离子形成的黄嘌呤氧化酶IC50为 2.4ymol/L，强于对照的别嘌呤醇。Lotito等以脂质体为模型研究原花青素的抗脂质 过氧化作用，当脂质的氧化作用起始于水相时，原花青素的单体、二聚体、三聚体的抗氧化 作用最大。当氧化发生在脂质区时，原花青素高分子量的多聚体抗氧能力最强，而Cu介导 的低密度脂蛋白氧化中，不同分子量的原花青素的抗氧化能力却没有显著差异。Koga 等研究一次给予CSPEQ5m/kg)对禁食大鼠血浆抗氧化水平影响时，发现摄GSPE可提高血 浆对氧化应激的抵抗力。原花青素的抗氧化活性与其结构有密切相关性，不同聚合度 和构型的原花青素的抗氧化能力也不同。2)清除自由基。原花青素清除自由基的能力与其分子结构、聚合度以及与 培酸酯化的程度有关。而单从原花青素的分子结构来看(以二聚体为例)，每分子 ProcyanidinB-3 (有8个酚羟基)最多可以捕获8个氧自由基，而分子Ve (有1个酚羟基) 仅能捕获1个自由基，每分子Vc (有2个共轭羟基)能扑获2个氧自由基。所以原花青素不 仅能够清除自由基，而且能帮助保存和再生Vc，Ve，同时它也能够通过制造弹性蛋白和胶原 纤维加固毛细血管壁，从而进一步防御自由基的侵蚀。据文献报道原花青素在体内的保留 时间长达72h。而Vc的保留时间仅3h。这将大大增强其抗氧化清除自由基的能力。Bagchi 等研究表明，原花青素具有很高的生物利用性，在抗自由基能力及保护因自由基引起 的脂质过氧化和抗DNA损伤能力显著高于维生素C、维生素E和β胡萝卜素。Castillo等 研究表明在清除自由基、抗氧化活性能力上，原花青素>芦丁>儿茶素>洋芜荽苷 >抗坏血酸。Saint-Cricq De等用3种方法测定原花青素的清除自由基活性，证实其 自由基清除能力依赖于其化学结构和立体结构。采用高压和低压液相色谱分离各寡聚体， 即使浓度很低，仍有较高活性，能有效地清除自由基，发现这些多酚类化合物清除自由基的 能力与它们的化学性质和立体化学结构密切相关。幻抗致突变、抗癌作用。癌症及许多慢性退行性疾病是由多基因突变所致。而 原花青素在抗突变方面有一定的作用。体外实验证明原花青素对Trp R2(食品中致突变 剂)的抑制率达94%，可抑制啤酒酵母线粒体自发性突变和细胞核由刀豆氨酸敏感到耐 刀豆氨酸的自发性突变。而其抗放射线诱变能力依次为原花青素>芦丁>二甲基亚 砜(DMSO) >抗坏血酸>丙基硫氧嘧啶(PTU) >洋芜荽苷。原花青具有抑制TPA( —种皮肤癌促进剂)活性，且抗癌变能力为三聚体>二聚体>单体。原花青素作用于人乳腺 癌MDA-MB468的有本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从含有ＯＰＣ植物原料中提取低聚原花青素的方法，所述方法特征在于在低温环境下进行，并且在提纯过程中保持无氧或低氧以及避光环境。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：董先智，孙波，陈少云，刘翠，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，丹东晨星越橘科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：11
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