本发明专利技术公开了一种模拟移动床(SMB)色谱分离提纯表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的方法，其特征在于以茶叶提取物茶多酚为原料，采用模拟移动床色谱系统分离提纯EGCG，该方法设置SMB的基本区带为洗脱带、精制带和吸附带，洗脱带独立，以十八烷基硅烷键合硅胶ODS为固定相，醇与水的混合溶液为流动相，对茶多酚原料液进行两次SMB分离：一次是除去难洗脱杂质；另一次是除去易洗脱杂质。最后经除脱除溶剂处理后，得到EGCG产品。本发明专利技术能规模化、稳健、连续、自动高效地从茶多酚中提纯EGCG，产品回收率超过94％，纯度超过96％，固定相和流动相能反复利用，降低成本，属于绿色环保分离工程。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及天然植物有效组分的分离提纯方法，尤其是一种利用三带模拟移动床色谱提纯表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的方法。
技术介绍
表没食子儿茶素没食子酸酯(简称EGCG，以下称EGCG)是一种抗氧化性和清除自由基功能很强的活性物质，已作为一种抗肿瘤、抗突变、降血压等用途的新药，其提取与应用受到国内外广泛关注。EGCG是茶叶提取的多酚类混合物即茶多酚的主要成分，在茶多酚中，还存在与EGCG化学结构和性质十分相近的其它黄烷醇类化合物，如表儿茶素(EC)；表儿茶素没食子酸酯(ECG)；表没食子儿茶素(EGC)；没食子儿茶素没食子酸酯(GCG) ；DL-儿茶素(DL-C)，而且这些黄烷醇类化合物极易氧化，聚(缩)合，使分离纯化EGCG单体困难。目前，获得高纯度EGCG单体(高于95%)的主要技术是制备色谱分离法，如 CN1319597(—种茶多酚中儿茶素类化合物的分离方法)、CN1603319(儿茶素单体的分离纯化方法)和CN1465572(表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化方法)采用葡聚糖凝胶 SephadexLH-20柱的层析法；CN101381359 ( —种从绿茶中提取高纯度表没食子儿茶素没食子酸酯的方法)采用闪烁硅胶柱的层析法，CN101723927A (—种儿茶素单体EGCG工厂化生产分离纯化方法)采用KR100-5C18柱的层析法，这些方法虽然可以用于工业生产高纯度 EGCG，但都为批处理工艺即间歇提纯工艺，不能连续自动生产，而且吸附剂的利用率低，洗脱剂耗量大，原料的处理量较小，耗时，生产效率低。模拟移动床色谱是提纯化合物的一个强大的具有优势的分离手段。模拟移动床色谱在制备色谱的基础上，引进了特殊的运行机制，使色谱分离过程从间歇变为连续，能够进行高效率的自动化和规模化分离。目前尚无采用模拟移动床色谱技术分离提纯EGCG的报道。
技术实现思路
本专利技术提供了一种模拟移动床(简称SMB，以下称SMB)色谱分离提纯表没食子儿茶素没食子酸酯(简称EGCG，以下称EGCG)的方法，可以连续、自动、高效地提纯EGCG。提纯EGCG的方法，其特征在于以茶叶提取物茶多酚为原料，采用SMB色谱分离提纯EGCG，该方法的技术方案如下(I)SMB 设备SMB设备组成为色谱柱、洗脱液输送泵、进料液输送泵、自控阀、单片机、自动控制系统、多通、管线、接头、储液罐、计算机；色谱柱规格为柱长10 50cm，柱长与直径比为8 20 ；固定相使用十八烷基硅烷键合硅胶0DS，10 60 μ m ；自控阀由电磁阀和止逆阀组成。(2) SMB工作条件SMB运行模式设置SMB系统色谱柱数目总数N，3彡N彡8，设置SMB的基本区带为洗脱带，精制带和吸附带，每个带由1 4根相同的色谱柱串联而成，a为洗脱带色谱柱数目，b为精制带色谱柱数目，c为吸附带色谱柱数目，a+b+c = N,运行模式表示为a-b-c ；流动相组成精制带和吸附带的流动相D为醇与水混合的均相溶液，醇的体积百分含量Cd为10 40% ；洗脱带的流动相P为醇与水混合的均相溶液，醇的体积百分含量Cp 为 Cd 100% ；流动相流速在洗脱带中，洗脱液P流速队为1 20cm/min，萃取液E流速Ue = Up ；在精制带和吸附带中，洗脱液D流速Ud为1 15cm/min，进样液F流速Uf为0. 1 6cm/ min，萃余液 R 流速 Ue = UD+UF ；Ud ^ Up ^ 3UD ；Uf < 2UD ；模拟移动床操作温度室温。(3)分离步骤使用如(1)所述SMB设备在如(2)所述的条件下，进行两次SMB分离一次是从萃取液E除去难洗脱杂质，切换时间ts 5 30min ；另一次从萃余液R除去易洗脱杂质，切换时间 ts :3 25min ；茶多酚用醇含量为0 100%的水溶液溶解，配置浓度为10 lOOmg/mL的均相原料液，作为第一次SMB分离的进样液F ；第一次SMB分离得到的萃余液R或者经过浓缩后、 或者直接作为第二次SMB分离的进样液F ；将除去杂质的EGCG溶液经脱除溶剂处理后，得到EGCG产品。(4)检测方法采用岛津LC-10AT色谱泵，SPD-10A紫外检测器，Agilent Extend色谱柱， 4. 6 X 150mm, ODS填料，粒径5 μ m，流动相为乙腈和水，体积比为15 85，冰醋酸体积百分含量0. 1 %，流速1. OmL/min,检测波长278nm。由EGCG标准品来标定产品中EGCG的含量。所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，流动相中的醇为甲醇、乙醇。所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，固定相0DS，20 30 μ m ；精制带和吸附带的流动相D采用甲醇水溶液，其中甲醇体积百分含量Cd为25 35%。所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，固定相0DS，20 30 μ m ；精制带和吸附带的流动相D采用乙醇水溶液，其中乙醇体积百分含量Cd为10 20%。所述的SMB色谱分离提纯EGCG的方法，由SMB分离得到的EGCG溶液脱除溶剂的过程为或者冷冻干燥、或者重结晶、或者真空干燥、或者减压膜蒸馏。本专利技术提供的用模拟移动床色谱分离提纯EGCG的方法与现有制备色谱分离技术相比，其显著优势在于能规模化、稳健、连续、自动高效地从茶多酚中提纯EGCG，产品回收率超过94%，纯度超过96%，固定相和流动相能反复利用，降低成本，属于绿色环保分离工程。附图说明图1是两次模拟移动床分离过程示意图；图2是茶多酚原料液的HPLC谱图；图3是第一次SMB分离结果，难洗脱杂质的HPLC谱图； 图4是第一次SMB分离结果，脱除难洗脱杂质的EGCG的HPLC谱图5是第二次SMB分离结果，易洗脱杂质的HPLC谱图；图6是第二次SMB分离结果，脱除杂质的EGCG的HPLC谱图。具体实施例方式实施例1(I)SMB 设备8根色谱柱、流动相D输送泵流量O-lOmL/min，压力O-IOMpa ；原料液F泵流量 0-30mL/h，压力0-8Mpa ；流动相P输送泵流量O-lOmL/min，压力O-lOMpa，48个自控阀、一套单片机自动控制系统、5个储液罐(流动相D、原料液F、流动相P、萃取液E、萃余液R各需一个储液罐)、多通、管线、接头、计算机；色谱柱为规格IOcmX Icm ；固定相使用十八烷基硅烷键合硅胶0DS，20 30μπι。(2) SMB工作条件第一次SMB工作条件如下SMB运行模式设置SMB系统色谱柱数目总数N = 4，设置SMB洗脱带1根色谱柱， 精制带1根色谱柱，吸附带2根色谱柱，运行模式为1-1-2 ；流动相组成精制带和吸附带的流动相D为甲醇与水的混合溶液，甲醇的体积百分含量Cd为30% ；洗脱带的流动相P为甲醇与水的混合溶液，醇的体积百分含量Cp为80% ；流动相流速在洗脱带中，洗脱液P流速Up为3. 2cm/min，萃取液E流速Ue =仏； 在精制带和吸附带中，洗脱液D流速Ud为1.9cm/min，进样液F流速叫为0. 13cm/min，萃余液 R 流速 Ue = UD+UFO切换时间为15min。模拟移动床操作温度15_20°C。第二次SMB工作条件如下SMB运行模式设置SMB系统色谱柱数目总数N = 4，设置SMB洗脱带1根色谱柱， 精本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种提纯表没食子儿茶素没食子酸酯（简称ＥＧＣＧ，以下称ＥＧＣＧ）的方法，其特征在于以茶叶提取物茶多酚为原料，采用模拟移动床（简称ＳＭＢ，以下称ＳＭＢ）色谱分离提纯ＥＧＣＧ，该方法的技术方案如下：（１）ＳＭＢ设备ＳＭＢ设备组成为色谱柱、洗脱液输送泵、进料液输送泵、自控阀、单片机、自动控制系统、多通、管线、接头、储液罐、计算机；色谱柱规格为柱长１０～５０ｃｍ，柱长与直径比为８～２０；固定相使用十八烷基硅烷键合硅胶ＯＤＳ，１０～６０μｍ；自控阀由电磁阀和止逆阀组成；（２）ＳＭＢ工作条件ＳＭＢ运行模式：设置ＳＭＢ系统色谱柱数目总数Ｎ，３≤Ｎ≤８，设置ＳＭＢ的基本区带为洗脱带，精制带和吸附带，每个带由１～４根相同的色谱柱串联而成，ａ为洗脱带色谱柱数目，ｂ为精制带色谱柱数目，ｃ为吸附带色谱柱数目，ａ＋ｂ＋ｃ＝Ｎ，运行模式表示为ａ－ｂ－ｃ；流动相组成：精制带和吸附带的流动相Ｄ为醇与水混合的均相溶液，醇的体积百分含量ＣＤ为１０～４０％；洗脱带的流动相Ｐ为醇与水混合的均相溶液，醇的体积百分含量ＣＰ为ＣＤ～１００％；流动相流速：在洗脱带中，洗脱液Ｐ流速Ｕｐ为１～２０ｃｍ／ｍｉｎ，萃取液Ｅ流速ＵＥ＝Ｕｐ；在精制带和吸附带中，洗脱液Ｄ流速ＵＤ为１～１５ｃｍ／ｍｉｎ，进样液Ｆ流速ＵＦ为０．１～６ｃｍ／ｍｉｎ，萃余液Ｒ流速ＵＲ＝ＵＤ＋ＵＦ；ＵＤ≤Ｕｐ≤３ＵＤ；ＵＦ＜２ＵＤ；模拟移动床操作温度：室温；（３）分离步骤使用如（１）所述ＳＭＢ设备在如（２）所述的条件下，进行两次ＳＭＢ分离：一次是从萃取液Ｅ除去难洗脱杂质，切换时间ｔＳ：５～３０ｍｉｎ；另一次从萃余液Ｒ除去易洗脱杂质，切换时间ｔＳ：３～２５ｍｉｎ；茶多酚用醇体积百分含量为０～１００％的水溶液溶解，配置浓度为１０～１００ｍｇ／ｍＬ的均相原料液，作为第一次ＳＭＢ分离的进样液Ｆ；第一次ＳＭＢ分离得到的萃余液Ｒ或者经过浓缩后、或者直接作为第二次ＳＭＢ分离的进样液Ｆ；将除去杂质的ＥＧＣＧ溶液经脱除溶剂处理后，得到ＥＧＣＧ产品；（４）检测方法采用岛津ＬＣ－１０ＡＴ色谱泵，ＳＰＤ－１０Ａ紫外检测器，Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｘｔｅｎｄ色谱柱，４．６×１５０ｍｍ，ＯＤＳ填料，粒径５μｍ，流动相为乙腈和水，体积比为１５∶８５，冰醋酸体积百分含量０．１％，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长２７８ｎｍ，由ＥＧＣＧ标准品来标定产品中ＥＧＣＧ的含量。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王绍艳，郑斯文，吴秀红，丛景香，唐晓丹，韩冰，杨磊，
申请(专利权)人：辽宁科技大学，
类型：发明
国别省市：21
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