本发明专利技术公开了没食子酸乙酯用于制备治疗结肠癌Lovo细胞凋亡药物的应用，药理学及细胞生物学实验表明，没食子酸乙酯可以有效促进结肠癌细胞Lovo染色质浓缩、磷脂酰丝氨酸外翻及细胞核内部DNA发生断裂，诱导细胞凋亡，其作用机理与提高细胞中Caspase-3，Caspase-8，Caspase-9蛋白的表达水平密切相关。本发明专利技术首次揭示并量化分析了没食子酸乙酯对结肠癌细胞Lovo的凋亡诱导作用，有益于没食子酸乙酯从细胞凋亡角度研发具有抗癌活性的新药，有益于探索结肠癌疾病的防治，并为各种肿瘤的治疗提供新的思路。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种没食子酸乙酯在制备治疗人结肠癌凋亡药物中的应用，属于细胞 生物
技术介绍
直结肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，发病率和死亡率在全球恶性肿瘤中位 居第三位，随着人类生活模式、食物结构、饮食习惯等变化，结肠癌症的发病率和死亡率均 呈逐年上升趋势。面对如此严重的社会问题，如何提高结肠癌症患者的生存率已成为国内 外科学工作者的重要课题。目前结肠癌在临床治疗中主要以手术为主，但为了加强治疗效 果，常常需要采用中药治疗来辅助治疗，以期达到较好的治疗效果。 目前在全球范围内结肠癌的病因及发病机理尚未完全阐明，近年来比较公认的 观点是肿瘤是遗传调控和环境因素共同作用而使细胞增殖与凋亡失衡所致。其中细胞凋亡 不仅在肿瘤形成的不同阶段均起着十分重要的作用，同时也与肿瘤细胞放疗敏感性、化疗 疗效及肿瘤细胞耐药性密切相关。诱导细胞凋亡已成为筛选抗癌药物一个重要指标.细胞 凋亡也是受基因调控的精确过程，目前主要有两条途径：通过细胞膜上的死亡受体激活依 赖Caspase的凋亡途径主要包括外源性的死亡受体通路和内源性的线粒体途径。死亡受体 途径是细胞表面死亡受体接受外源信号，启动凋亡的一种死亡方式。Fas/TRAIL等死亡受体 与相应配体结合，在连接蛋白帮助下，激活Caspase-8,将凋亡信号由细胞膜外传递到细胞 衆。Caspase-8进一步活化下游的Caspase_3/Caspase_7.线粒体途径是胞质内线粒体中 细胞色素 C释放激活caspase-9,进而活化caspase-3促进凋亡.死亡受体途径和线粒体 途径又是相关联的。Me Master大学生物化学与生物医学院的研究者们使用荧光成像技术 和体外细胞培养技术研究发现tBid可与线粒体膜上的Bax结合，导致线粒体膜通透性下， 细胞色素 C释放，启动凋亡。而活化的Caspase-8可以剪切Bid蛋白使之裂解为tBid。由 此Bid蛋白将死亡受体途径和线粒体途径巧妙相连。一旦死亡受体通路和线粒体通路被激 活，凋亡的发生将是不可逆转的。 没食子酸乙酯是从狼毒大戟中获得的一种安全性较好的抗肿瘤活性化合物，刘延 麟等通过急性毒性试验未测量出EG的LD5。值，最大安全耐受量倍数为151，相当于成人常 用量的100倍以上，说明EG具有较好的安全性。我们首次发现其对结肠癌细胞Lovo、肺癌 A549、口腔鳞癌Cal-27均有增殖抑制作用，其中对结肠癌细胞Lovo增殖抑制作用最佳，72 小时最大抑制率可达到（74. 67±0. 47)%，没食子酸乙酯的提取分离方法及其对三种细胞 的增殖抑制作用已在中医药信息公开发表。迄今为止，关于没食子酸乙酯诱导结肠癌细胞 Lovo凋亡的作用及在药物中的应用尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供没食子酸乙酯在制备治疗剂辅助治疗结肠癌药物中的应用。 本专利技术所述的没食子酸乙酯可以从市场购买，也可以从狼毒大戟中提取得到，还 可以从其他植物中分离纯化得到，也可以通过化学合成或生物方法得到。结构如下：进一步地，所述药物用于结肠癌疾病的治疗与辅助治疗。 进一步地，所述药物由以没食子酸乙酯为活性成分加入药学允许的赋形剂或辅料 制成药物制剂， 进一步地，所述药物剂型包括注射剂、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、口服液、糖 衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、丹剂、滴丸剂、□崩片、微丸。 经药理学实验证明，本专利技术所述的没食子酸乙酯可以有效促进结肠癌细胞Lovo 染色质浓缩、磷脂酰丝氨酸外翻及细胞核内部DNA发生断裂，诱导结肠癌细胞发生凋亡。并 且这种凋亡诱导作用，呈剂量依赖性。 经药理学实验证明，本专利技术所述的没食子酸乙酯可以提高Lovo细胞中 Caspase-3, Caspase-8, Caspase-9蛋白的表达水平，实验结果提示没食子酸乙酯诱导结肠 癌细胞Lovo凋亡的作用机理与激活线粒体通路和死亡受体通路密切相关。 以上试验结果表明，本专利技术的没食子酸乙酯可以诱导结肠癌细胞凋亡，具有抗结 肠癌的功效。 本专利技术的有益效果在于：本专利技术涉及没食子酸乙酯用于结肠癌细胞Lovo凋亡药 物的应用，主要解决目前结肠癌化学治疗毒副作用严重的问题；没食子酸乙酯能有效的抑 制结肠癌细胞增殖，诱导结肠癌细胞Lovo发生凋亡，并考察其作用靶点发现，其可上调 caspase-3、caspase_8、caspase-9的表达，此化合物诱导结肠癌细胞的作用机理与激活线 粒体通路和死亡受体通路密切相关。本专利技术提供的没食子酸乙酯毒性小，安全性高。本发 明寻找到没食子酸乙酯抑制结肠癌增殖的作用机理与作用靶点，为没食子酸乙酯作为药 物进入临床提供了理论依据。【附图说明】 下面结合附图和实施例对本专利技术进一步说明。 图1是没食子酸乙酯对结肠癌Lovo细胞具有凋亡诱导作用的可见光显微镜细胞 形态变化图。 图2是没食子酸乙酯对结肠癌Lovo细胞具有凋亡诱导作用的Α0/ΕΒ荧光染色图。 图3是没食子酸乙酯对结肠癌Lovo细胞具有凋亡诱导作用的流式细胞仪定量检 测图。（注为 DNAmarker，A 为 Control，B 为 EG(10 yg/mL)，C 为 EG (20 yg/mL)，D 为 EG (40 yg/mL))〇 图4是没食子酸乙酯对结肠癌Lovo细胞具有凋亡诱导作用的DNA琼脂糖凝胶电 泳图。（注：A为 Control，B 为EG(10 yg/mL)，C 为EG (20 yg/mL)，D 为 EG (40 yg/mL))〇 图5是没食子酸乙酯上调结肠癌Lovo细胞内Caspase-3蛋白表达的免疫细胞化 学图。 图6是没食子酸乙酯上调结肠癌Lovo细胞内Caspase-8蛋白表达的免疫细胞化 学图。 图7是没食子酸乙酯上调结肠癌Lovo细胞内Caspase-9蛋白表达的免疫细胞化 学图。【具体实施方式】 为进一步说明本专利技术的有益效果，以下提供临床前应用报告中的试验案例。 实验例：本专利技术没食子酸乙酯对结肠癌细胞Lovo凋亡诱导作用的研究 1. 1实验材料 1. 2细胞株：购自中国科学院细胞库。 1. 2主要药品及试剂：没食子酸乙酯(齐齐哈尔医学院天然药物教研室提供）。 DMEM培养基(购自美国Gibco公司）；胎牛血清（Hyclone公司）；DMS0 (二甲基亚砜）（美 国Ameresco公司）；吖啶橙（A0)(上海蓝季科技发展限公司）；溴乙啶（EB)(大连保税 区联合博泰生物技术有限公司）；Annexin V-FITC试剂盒(凯基生物）；DNA Ladder、 BeyoRed DNA上样缓冲液（6X)、当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种没食子酸乙酯用于制备治疗人结肠癌凋亡药物的应用，其特征在于：所述没食子酸乙酯，采用化学合成方法制备得到或者从植物中提取分离获得。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：简白羽，刘吉成，韩翠艳，董岩，张昊，
申请(专利权)人：齐齐哈尔医学院，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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