本发明专利技术涉及一种表儿茶素单体的制备方法，包括如下步骤：（1）向含有大叶种绿茶儿茶素提取物的溶液中添加单宁酶，在30℃～35℃下静止酶解，间歇搅拌，离心过滤，得酶解液；（2）将酶解液通入装有吸附树脂的层析柱，并用乙醇洗脱剂进行分级洗脱，收集洗脱液，将洗脱液浓缩至16～18波美度，得浓缩液；将浓缩液在0～4°C温度下放置48～72h，添加少量表儿茶素单体结晶和重结晶，离心、干燥得到表儿茶素（EC）单体。本发明专利技术所述方法使用单宁酶对表儿茶素没食子酸酯进行酶解，具有较好的转化效果，是一种转化率高，产品纯度高的制备方法，而且制备周期短，成本低，适宜规模化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于儿茶素的制备领域，具体涉及。
技术介绍
儿茶素是茶叶中最重要的生理活性物质，约占多酚类80%，属黄烷醇类，其基本结构是α -苯基苯并吡喃，分为酯型和非酯型两类，结构上的主要区别在于氢基取代的数量和位置不同。儿茶素主要由表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)和表儿茶素(EC)单体组成。儿茶素具有明显的抗衰老、防癌抗突变、降脂减肥、降低血糖、血脂和胆固醇、预防心血管疾病等药理功能，已广泛应用于食品加工、医药保健和日用化工等领域。卫生部已批准了茶多酚为我国食品添加剂。国内外研究成果表明，EC可防心血管疾病，预防癌症，抗氧化作用，具有明显的抗衰老功能，有望开发成为一种天然的护肤品。从1990开始，由于有关茶多酚/儿茶素的保健与药理功能研究的突破，不仅扩大了绿茶在国际市场上的份额，而且极大地推进了我国茶叶深加工产业的快速发展，为茶叶功能成分的研究与开发奠定了良好的产业与市场基础，目前，我国已经形成年产5000多吨茶多酚/儿茶素的产业规模。儿茶素粗品传统的提取分离工艺主要包括离子沉淀法、有机溶剂萃取法和吸附柱色谱法。由于茶叶的功能成分复杂，从茶叶中制取高纯度的表儿茶素单体具有相当难度。迄今，国内外尚未有表儿茶素(EC)单体制备方面的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供，该方法简便，只使用酒精溶剂，制备周期短，成本低，符合绿色和安全的要求，表儿茶素单体的提取率及产品纯度高，适宜规模化生产。本专利技术提供的技术方案是:，包括如下步骤: (1)加入纯水溶解大叶绿茶儿茶素提取物，配置成浓度为5%w/v的溶液，加入柠檬酸调节pH为4.0?5.0，制得茶汤料液，备用； (2)按照0.025%w/v的比例，在茶汤料液中添加单宁酶，在30°C?35°C下静止酶解，间歇搅拌，得酶解液，离心过滤； (3)将步骤(2)中过滤后的上清液通过装有吸附树脂的层析柱，并用乙醇水溶液进行分级洗脱，收集洗脱液，将所述洗脱液浓缩至16?18波美度，得浓缩液； (4)将所述浓缩液在O?4°C温度下放置48?72h，按照浓缩液总质量0.1?0.2%的比例添加少量表儿茶素单体，对浓缩液进行结晶和重结晶，离心、干燥，得到表儿茶素单体。对上述技术方案的进一步说明:步骤(2)中，加入单宁酶酶解，可以将表儿茶素没食子酸酯(ECG)水解成为表儿茶素和没食子酸，从而提高粗品中表儿茶素的含量，为后续树脂分离工艺提供较高含量底物，同时减少分离过程中表儿茶素没食子酸酯(ECG)的影响。对上述技术方案的进一步限定:步骤(2)中，静置酶解时间为4-6小时，每间歇30分钟搅拌5分钟，在1000 r/min的转速下离心过滤。对上述技术方案的进一步限定:步骤(3)中吸附树脂层析柱中的吸附树脂用量:50倍大叶绿茶儿茶素提取物重量；上柱流速:1.0 BV/h ;解吸溶剂:10%、30%和80%乙醇水溶液；三种不同浓度的乙醇水溶液的用量均为2BV ;解吸流速:1.0 BV/h，收集30%乙醇洗脱液。对上述技术方案的再进一步限定:所述吸附树脂为ADS-8、HPD-450和HPD-450A之O本专利技术所述的一种制备表儿茶素(EC)单体的方法，采用由单宁酶直接对表儿茶素没食子酸酯(ECG)进行酶解，使得表儿茶素没食子酸酯(ECG)水解为表儿茶素(EC)，成功解决了表儿茶素(EC)与酯型儿茶素(ECG和EGCG)难以分离的技术难题；同时，采用优选的吸附树脂ADS-8、HPD-450和HPD-450A可以有效分离表儿茶素(EC)与表儿茶素没食子酸酯(ECG)，对酯型儿茶素的水解产物没食子酸和其它杂质吸附率低，解决了表儿茶素(EC)与其它杂质的分离，从而成功实现了表儿茶素(EC)单体的制备。本专利技术具有的有益效果:本专利技术方法以大叶绿茶儿茶素提取物为原料，联用酶工程技术，经过单宁酶酶解，吸附树脂柱色谱与结晶、重结晶技术，从绿茶提取物中分离纯化表儿茶素(EC纯度>98%)单体，优化了产品分离纯化工艺流程，单体提取率及产品纯度高。产品可防心血管疾病，预防癌症，抗氧化作用，具有明显的抗衰老功能，有望开发成为一种天然的护肤品。也是许多功能食品开发的重要原料，可单独或者与维生素类、天然植物成分复配应用于保健食品、化妆品等领域。本专利技术方法简便，制备周期短，成本低，符合环保和安全的要求，适宜规模化生产。【具体实施方式】实施例1 1、取大叶绿茶儿茶素提取物100克，配成2000ml儿茶素溶液，加入柠檬酸调节pH为4.0?5.0，向所述溶液中添加0.5克单宁酶，在30?35°C下酶解4小时，每间歇30分钟搅拌5分钟，将酶解液在1000 r/min条件下离心过滤； 2、将步骤I中过滤后的上清液缓慢通过装有ADS-8吸附树脂的层析柱，并分别用10%、30%,80%的乙醇水溶液依次洗脱，吸附树脂用量:50倍大叶绿茶儿茶素提取物重量；上柱流速:1.0 BV/h ;三种不同浓度的乙醇水溶液的用量均为2BV ;解吸流速:1.0 BV/h ;收集30%的乙醇洗脱液，并将所述洗脱液浓缩至16?18波美度，得浓缩液； 3、将所述浓缩液在O?4°C温度下放置48?72小时，按照浓缩液总质量0.1%的比例添加少量表儿茶素(EC)单体对浓缩液进行结晶和重结晶，然后离心、干燥得到10.25g白色固体。将步骤3得到的白色固体与表儿茶素(EC)标准品(购自美国Sigma-Aldrich公司，C15H14O6, M.W.290.27，编号:E4018，纯度彡98% (HPLC))对照鉴定并经高效液相色谱法分析检测(鉴定、检测结果为:所述白色固体，分子量为290，(-)ES1-MS m/z:289 -，熔点240°C，分子式为=C15H14O6，表明所述白色固体为表儿茶素(EC)单体，而且纯度彡98%。实施例2 当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种表儿茶素单体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）加入纯水溶解大叶绿茶儿茶素提取物，配置成浓度为5%w/v的溶液，加入柠檬酸调节pH为4.0～5.0，制得茶汤料液，备用；（2）按照0.025%w/v的比例，在茶汤料液中添加单宁酶，在30℃～35℃下静止酶解，间歇搅拌，得酶解液，离心过滤； （3）将步骤（2）中过滤后的上清液通过装有吸附树脂的层析柱，并用乙醇水溶液进行分级洗脱，收集洗脱液，将所述洗脱液浓缩至16～18波美度，得浓缩液；（4）将所述浓缩液在0～4℃温度下放置48～72h，按照浓缩液总质量0.1～0.2%的比例添加少量表儿茶素单体，对浓缩液进行结晶和重结晶，离心、干燥，得到表儿茶素单体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：叶艳，龙菲菲，罗祥，马松，吴世华，
申请(专利权)人：湖北中鑫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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