一种从茶提取物中分离高纯度儿茶素类化合物的方法技术

本发明专利技术提供了一种从茶提取物中分离儿茶素单体的方法，它以逆流色谱仪作为分离设备；其溶剂系统由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯及水组成，或者由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯、醇、水和乙酸组成。本发明专利技术所采用的设备简单，其溶剂系统由普通溶剂配制，价格也相当便宜，是一种经济的从茶提取物中分离儿茶素单体的方法。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及茶叶深加工领域，特别涉及。茶提取物是从茶叶中萃取的有效成分的混合物，儿茶素是其中最主要的一类活性成分，儿茶素中又以EGCG、ECG、GCG、EGC最具经济价值，已被列为一种潜在的抗癌药物。以往从茶叶中分离提取上述儿茶素单体的方法采用Sephedax-LH20凝胶柱色谱(WilkinsC.K.et al,J.Sci.Food Agri.,22,1977,480.)和Sephedax-LH20初分离-制备型高效液相色谱再分离(Yuyabe F.Etal,Nippon NogeikagakuKaishi,1989,63(4):845)。其局限性是Sephedax-LH20凝胶价格昂贵,再生使用困难，因而单体生产成本较高；而高效液相色谱则不仅色谱柱昂贵，且设备也较复杂，是一种更不经济的方法。本专利技术的目的在于提供一种经济的从茶提取物中分离儿茶素单体的方法。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案它以逆流色谱仪作为分离设备；其溶剂系统由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯及水组成，烷烃与乙酸乙酯的容积比为1∶4～12，水的用量应至少保证使上下相分层，或者所述溶剂系统由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯、醇、水和乙酸组成，烷烃与乙酸乙酯的容积比为1∶1～4，乙酸乙酯与醇的容积比为1∶1～3，乙酸和醇的容积比为1∶4～50，水的用量应至少保证使上下相分层，上述烷烃为单一种烷烃或数种烷烃的混合物，上述醇为丙醇、丁醇、己醇或庚醇；并依次按以下步骤进行1)．配置溶剂系统，待静止分层后，将上、下两相分开备用，将上述溶剂系统的上相注入逆流色谱仪的色谱柱，取上述溶剂系统的部分下相溶解茶提取物；2)．开启逆流色谱仪，注入上述溶解的茶提取物及剩余的下相；其注入顺序可以是先注入上述溶解的茶提取物然后注入剩余的下相，也可以是先注入剩余下相的一部分以预平衡再注入上述溶解的茶提取物然后注入余下的下相，也可以是先注入剩余的下相然后注入上述溶解的茶提取物；3)．定时收集洗脱液。在采用以上技术方案的同时，本专利技术还可采用以下进一步的技术方案所述烷烃以石油醚为最佳，所述醇以正丁醇为最佳。由于采用了上述技术方案，逆流色谱仪为普通仪器，它较高效液相色谱仪远为简单便宜，其溶剂系统由普通溶剂配制，价格也远较现有技术中的色谱柱便宜，因此是一种经济的从茶提取物中分离儿茶素单体的方法。附图说明图1为实施例5、6、7所采用的10L-V高速逆流色谱仪的示意图。下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步的描述。实施例1本实施例的溶剂系统采用石油醚∶乙酸乙酯∶水=1∶8∶20，逆流色谱仪采用国产GS-10A高速逆流色谱仪，茶提取物的组成为EGCG占23.80％、ECG占7.0％、GCG占14.80％、EC占7.22％、EGC占10.90％、DL-C占4.6％、咖啡因占7.57％、其余24％为不明物。取石油醚30ml、乙酸乙酯240ml、水600ml，于1000ml分液漏斗中混合振摇20次，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以10ml/min的流速泵入逆流色谱柱。称取茶提取物3克于50ml试剂瓶中，用40ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至800转/min，然后以1ml/min的流速泵入茶提取物溶液，待进完后改用余下的下相以1ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。用部分收集器按5ml/管或10ml/管收集洗脱液，每种儿茶素单体的流出时间段可在第一次制备时通过监测仪确定。收集各单一组分干燥得儿茶素单体2090mg，其中EGCG720mg纯度81％、ECG220mg纯度87％、GCG占450mg纯度90％、EGC350mg纯度75％、EC+DL-C350mg。实施例2本实施例的溶剂系统采用戊烷∶乙酸乙酯∶水=1∶5∶10，逆流色谱仪采用国产GS-10A高速逆流色谱仪，茶提取物的组成为EGCG占50.80％、ECG占7.01％、GCG占1.80％、EC占1.22％、EGC占5.90％、DL-C占0.6％、咖啡因占1.57％、其余为不明物。取戊烷60ml、乙酸乙酯300ml、水600ml，于1000ml分液漏斗中混合振摇20次，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以10ml/min的流速泵入逆流色谱柱。称取茶提取物1.5克于50ml试剂瓶中，用40ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至600转/min，然后以1.4ml/min的流速泵入下相30分钟，再将茶提取物溶液以1.4ml/min的流速泵入色谱柱，待进完后改用余下的下相以1.4ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。用部分收集器按5ml/管或10ml/管收集洗脱液，儿茶素单体流出时间段的确定同实施例1。干燥得EGCG800mg纯度87％。实施例3本实施例的溶剂系统采用庚烷∶乙酸乙酯∶水=1∶11∶40，逆流色谱仪采用国产GS-10A高速逆流色谱仪，茶提取物的组成为EGCG占50.80％、ECG占7.01％、GCG占1.80％、EC占1.22％、EGC占5.90％、DL-C占0.6％、咖啡因占1.57％、其余为不明物。取庚烷25ml、乙酸乙酯275ml、水1000ml，于1500ml分液漏斗中混合振摇20次，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以10ml/min的流速泵入逆流色谱柱。称取茶提取物3克于50ml试剂瓶中，用100ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至900转/min，然后以1.4ml/min的流速泵入茶提取物溶液，待进完后改用余下的下相以1.4ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。用部分收集器按5ml/管或10ml/管收集洗脱液，儿茶素单体流出时间段的确定同实施例1。干燥得EGCG1700mg纯度87％。实施例4本实施例的溶剂系统采用石油醚∶乙酸乙酯∶正丁醇∶水∶乙酸=1∶1.5∶3∶12∶0.60，逆流色谱仪采用国产GS-10A高速逆流色谱仪，茶提取物的组成为EGCG占50.80％、ECG占7.01％、GCG占1.80％、EC占1.22％、EGC占5.90％、DL-C占0.6％、咖啡因占1.57％、其余为不明物。取石油醚40ml、乙酸乙酯60ml、正丁醇120ml、水480ml、乙酸24ml，于1000ml分液漏斗中混合振摇20次，静置分层后，将上下两相分别装入试剂瓶。将上相以10ml/min的流速泵入逆流色谱柱。称取茶提取物1.5克于50ml试剂瓶中，用12ml下相溶液溶解。开启逆流色谱仪至400转/min，然后以2ml/min的流速泵入茶提取物溶液，待进完后改用余下的下相以2ml/min流速洗脱柱内的儿茶素组分。用部分收集器按5ml/管或10ml/管收集洗脱液，儿茶素单体流出时间段的确定同实施例1。干燥得EGCG780mg纯度87％。实施例5本实施例的逆流色谱仪采用10L-V高速逆流色谱仪，其结构如下参照附图1。它包括壳体1、可绕其中轴2旋转的分离柱3及与分离柱连接的引入引出管4、5，分离柱的外侧还设有可旋转的引入引出管的固定框架6，其旋转轴与上述中轴同轴线，引入引出管与分离柱的连接端穿过中轴，另一端穿过旋转轴的被动端7。固定框架6的一端设有连接架8，并通过连接架与电机9的动力输出轴10联结，旋转轴的被动端7的轴承11设在壳体1上。中轴的轴承12、13设在固定框架6上，分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从茶提取物中分离儿茶素单体的方法，其特征在于它以逆流色谱仪作为分离设备；其溶剂系统由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯及水组成，烷烃与乙酸乙酯的容积比为１∶４～１２，水的用量应至少保证使上下相分层，或者所述溶剂系统由常温常压下处于液态的烷烃、乙酸乙酯、醇、水和乙酸组成，烷烃与乙酸乙酯的容积比为１∶１～４，乙酸乙酯与醇的容积比为１∶１～３，乙酸和醇的容积比为１∶４～５０，水的用量应至少保证使上下相分层，上述烷烃为单一种烷烃或数种烷烃的混合物，上述醇为丙醇、丁醇、已醇或庚醇；并依次按以下步骤进行：１）．配置溶剂系统，待静止分层后，将上、下两相分开备用，将上述溶剂系统的上相注入逆流色谱仪的色谱柱，取上述溶剂系统的部分下相溶解茶提取物；２）．开启逆流色谱仪，注入上述溶解的茶提取物及剩余的下相；３）． 定时收集洗脱液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杜琪珍，
申请(专利权)人：杜琪珍，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]