本发明专利技术公开了一种肝细胞生长因子受体活性基团的融合蛋白，利用分子生物学技术，表达多种不同组合的单个或多个肝细胞生长因子受体活性基团与人免疫球蛋白Fc片段的融合蛋白质。肝细胞生长因子受体活性基团的融合蛋白质可高效、特异地与生长因子结合，阻止生长因子与肿瘤细胞的结合，抑制肿瘤细胞的生长和转移，靶向定点治疗肿瘤；由于肝细胞生长因子受体活性基团的多样性，因此通过单个或多个受体活性基团的组合，可得到具有不同亲和力和药物代谢动力学的融合蛋白质。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及融合蛋白，具体涉及编码包含肝细胞生长因子受体(cMet)活性基团和 Fc片段的融合蛋白及其编码DNA。
技术介绍
肝细胞生长因子(h印atocyte growth factor，HGF)，又称扩散因子(scatter factor，SF)，是由一条α重链(相对分子量为69kDa)和一条β轻链(相对分子量为34kDa) 组成的异二聚体。HGF是一种刺激肝细胞增生的有丝分裂原，对肝切除或化学损伤后的肝细胞再生起重要作用。HGF能刺激多种类型细胞分化、增殖、再生、运动及形态的改变，是一种多功能的细胞因子。HGF的受体即肝细胞生长因子受体(cMet)，是1984年Cooper等从NIH3T3细胞中克隆出的一种原癌基因(Proto-Oncogen)，突变可成为一个致癌基因，引发癌症；cMet是由相对分子质量为50kDa的α亚单位和相对分子质量为145kDa的β亚单位通过二硫键连接而形成的一个相对分子质量为190kDa的异二聚体，其中β亚单位C-末端具有酪氨酸激酶功能和若干调节其受体活性的自身磷酸化功能；当cMet与HGF结合后，可快速转移到细胞核，通过钙离子通道传递信息，激活细胞功能，促进细胞组织增长，重生和正常组织结构的重组；并能参与癌症细胞侵润性生长，导致肿瘤细胞侵入周围组织内生长，穿透脏器， 组织层，最终扩展到全身。肝细胞生长因子(HGF)及其受体酪氨酸激酶肝细胞生长因子受体(cMet)已成为肿瘤生长和血管生成的关键因素，肝细胞生长因子(HGF)的表达和在肿瘤细胞的分泌会激活cMet，诱导肿瘤细胞的增殖，迁移，侵袭，减少人体对肿瘤细胞和肿瘤血管内皮细胞抑制； 肝细胞生长因子受体(cMet)会激活肿瘤血管内皮细胞，诱导细胞外基质降解、小血管形成及体内血管新生；在动物实验肿瘤模型中，cMet和肝细胞生长因子可导致动物的肿瘤细胞生长和血管新生。肝细胞生长因子(HGF)和肝细胞生长因子受体(cMet)在肿瘤中的表达经常与肿瘤的分级程度、肿瘤血管密度密切相联，但是其预后差。肺癌在西方国家是排第一位引起人类死亡的肿瘤，80%新诊断的肺癌是非小细胞型(NSCLC)。多数非小细胞型肺癌病人发现时为癌症后期或转移性肿瘤，无法手术切除；其五年成活率很低，化疗是对非小细胞型肺癌后期和转移型的主要的治疗方法。临床对2714 个肺癌病人的研究发现，在开始的12个月内，化疗只对9%的病人有明显的效果。因此，化疗对多数肺癌病人无明显的改善。研究发现肝细胞生长因子受体(cMet)大量表达在非小细胞型肺癌细胞中，对其的药物可能可用于非小细胞型肺癌的治疗。近年来，通过对肿瘤分子生物学和肿瘤发病机理的进一步研究和了解，从而发现了多个潜在的肿瘤分子靶点目标，其可用于新颖的肿瘤靶向定点(Targeted)治疗。这些治疗可抑制肿瘤发展过程的信息传递通道，这些通道只在肿瘤细胞中可激活，但正常细胞将不会被激活。利用肿瘤特定靶点目标(Targeted)治疗法治疗肿瘤比常规的细胞毒类药物的治疗对正常细胞的毒性小，更易被人体接受。表皮生长因子(EGF)受体抑制剂，表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体，酪氨酸激酶抑制剂和抗血管增生类制剂最近在肿瘤治疗中显示明显的优势，利用肿瘤细胞特定的单克隆抗体(如EGFR)进行肿瘤的靶向治疗，取得了较好的效果。对HGF的抑制使得肿瘤生长和肿瘤血管的生成受到抑制。目前已经开发出了许多 HGF调节剂(包括抗体)来治疗涉及HGF活性的多种紊乱，如某些HGF响应的癌症。中国专利文献 CN101460521A(申请号 200780020154. 5，申请日 2007.6. 1)公开了肝细胞生长因子(HGF)的结合蛋白质，该结合蛋白质包含结构⑶RLl-⑶RL2-⑶RL3D的免疫球蛋白轻链可变区及3个互补性决定区的免疫球蛋白重链可变区；所述结合蛋白质抑制 HGF与其同源受体结合，由此中和了 HGF的活性；当施用至哺乳动物时，所述的结合蛋白质能够抑制或减少哺乳动物中肿瘤的生长。当然，我们还需要其他类型的抑制剂。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种可高效、特异地与肝细胞生长因子(HGF) 结合的肝细胞生长因子受体(cMet)的融合蛋白。实现本专利技术目的的技术方案是一种肝细胞生长因子受体活性基团的融合蛋白，由来自肝细胞生长因子受体的直接作为功能基团的活性基团与人免疫球蛋白Fc片段构成， 或者由来自肝细胞生长因子受体的活性基团经组合后的功能基团与人免疫球蛋白Fc片段构成，其中肝细胞生长因子受体的功能基团在氮端，人免疫球蛋白Fc片段在碳端；所述肝细胞生长因子受体的活性基团包括kma蛋白活性基团、MRS蛋白活性基团和IPT蛋白活性基团；所述活性基团经组合后的功能基团包括复数个相同的活性基团组合而成的功能基团以及其中2 3种活性基团单个或复数个任意组合而成的功能基团；所述肝细胞生长因子受体的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO. 14所述，肝细胞生长因子受体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 15所述；肝细胞生长因子受体的义脆蛋白活性基团的核苷酸序列如上述序列表中SEQ ID NO. 14中1-1546核苷酸序列所述，肝细胞生长因子受体的kma蛋白活性基团的氨基酸序列如上述序列表中SEQ ID NO. 15中1-516氨基酸序列所述；肝细胞生长因子受体的MRS蛋白活性基团的核苷酸序列如上述序列表中SEQ ID NO. 14 中1M7-1686核苷酸序列所述，肝细胞生长因子受体的MRS蛋白活性基团的氨基酸序列如上述序列表中SEQ ID N0. 15中517-772氨基酸序列所述；肝细胞生长因子受体的IPT蛋白活性基团的核苷酸序列如上述序列表中SEQ ID N0. 14 中1687-2796核苷酸序列所述，肝细胞生长因子受体的IPT蛋白活性基团的氨基酸序列如上述序列表中SEQ ID N0. 15中773-932氨基酸序列所述。上述肝细胞生长因子受体的活性基团经组合后的功能基团为由kma蛋白活性基团、MRS蛋白活性基团和IPT蛋白活性基团依次首尾相连而构成的功能基团，或者为MRS蛋白活性基团和IPT蛋白活性基团首尾相连而构成的功能基团，或者为义脆蛋白活性基团和 MRS蛋白活性基团首尾相连而构成的功能基团，或者为2 3组kma蛋白活性基团和MRS 蛋白活性基团依次首尾相连而构成的功能基团。上述人免疫球蛋白为hlgGl，其Fc片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO. 11所述，其Fc片段的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 12所述。上述功能基团由kma蛋白活性基团、MRS蛋白活性基团与IPT蛋白活性基团组合而成时，功能基团与人免疫球蛋白Fc片段构成的融合蛋白的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO. 1所述，氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 2所述。上述功能基团由义脆蛋白活性基团与MRS蛋白活性基团组合而成时，功能基团与人免疫球蛋白Fc片段构成的融合蛋白的核苷酸序列为序列表中SEQ ID N0.3所述，氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO. 4所述。上述功能基团由两组kma蛋白活性基团与MRS蛋白活性基团组合而成时，功能基团与人免疫球蛋白Fc片段构成的融合蛋白的核苷酸序列为序列表中SEQ ID本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种肝细胞生长因子受体活性基团的融合蛋白，其特征在于：由来自肝细胞生长因子受体的直接作为功能基团的活性基团与人免疫球蛋白Ｆｃ片段构成，或者由来自肝细胞生长因子受体的活性基团经组合后的功能基团与人免疫球蛋白Ｆｃ片段构成，其中肝细胞生长因子受体的功能基团在氮端，人免疫球蛋白Ｆｃ片段在碳端；所述肝细胞生长因子受体的活性基团包括Ｓｅｍａ蛋白活性基团、ＭＲＳ蛋白活性基团和ＩＰＴ蛋白活性基团；所述活性基团经组合后的功能基团包括复数个相同的活性基团组合而成的功能基团以及其中２～３种活性基团单个或复数个任意组合而成的功能基团；所述肝细胞生长因子受体的核苷酸序列如序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１４所述，肝细胞生长因子受体的氨基酸序列如序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１５所述；肝细胞生长因子受体的Ｓｅｍａ蛋白活性基团的核苷酸序列如上述序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１４中１－１５４６核苷酸序列所述，肝细胞生长因子受体的Ｓｅｍａ蛋白活性基团的氨基酸序列如上述序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１５中１－５１６氨基酸序列所述；肝细胞生长因子受体的ＭＲＳ蛋白活性基团的核苷酸序列如上述序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１４中１５４７－１６８６核苷酸序列所述，肝细胞生长因子受体的ＭＲＳ蛋白活性基团的氨基酸序列如上述序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１５中５１７－７７２氨基酸序列所述；肝细胞生长因子受体的ＩＰＴ蛋白活性基团的核苷酸序列如上述序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１４中１６８７－２７９６核苷酸序列所述，肝细胞生长因子受体的ＩＰＴ蛋白活性基团的氨基酸序列如上述序列表中ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１５中７７３－９３２氨基酸序列所述。...
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：周斌，
申请(专利权)人：常州新泉生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32
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