本申请描述了对HGF具有结合特异性的新型设计锚蛋白重复蛋白，以及编码该HGF结合蛋白的核酸，包含该蛋白的药物组合物，以及该蛋白用于治疗疾病的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种对肝细胞生长因子（HGF)具有结合特异性的设计锚蛋白重复蛋 白，以及编码该HGF结合蛋白的核酸，包含该蛋白的药物组合物，以及该蛋白用于治疗疾病 的用途。
技术介绍
MET原癌基因编码受体酪氨酸激酶（MET或c-Met的），也称为肝细胞生长因子受 体（HGFR ;人HGFR具有UniProtKB/SWISS-PROT编号P08581)，其对于胚胎发育和伤口愈合 必不可少。肝细胞生长因子（HGF，也称为分散因子；人类HGF具有UniProtKB/SWISS-PROT 编号P14210)是c-Met的唯一已知配位体。该受体通常由上皮来源细胞表达，而HGF的表 达仅限于间质来源的细胞。当受到HGF刺激时，c-Met诱发多种生物反应，它们共同引发 被称为浸润性生长的程序。癌症中的异常c-Met激活与不良预后具有相关性，其中异常活 性的c-Met触发肿瘤生长，肿瘤细胞存活，血管生成和转移。在许多类型的人恶性肿瘤中， c-Met失控，导致肾癌，肝癌，胃癌，乳房癌，脑癌，它同时也是抵抗其他靶向疗法的主要因 ^ (Bottaro, D. P. , Rubin, J. S. , Faletto, D. L. , Chan, A. Μ. , Kmiecik, Τ. Ε. , Vande ffoude, G. F. and Aaronson, S. A. , Science 251 (4995), 802-804, 1991 ；Comoglio, Ρ. Μ, Giordano, S. and Trusolino, L. , Nat. Rev. Drug Discov. 7 (6), 504-516, 2008)〇 HGF被分泌为单个无活性单链前体多肽（SC-HGF，有时也称为前-HGF)，并由丝氨 酸蛋白酶剪切为69kDa的α链和34kDa的β链。活性HGF是由所述α链和β链组成 的二硫键连接的异二聚体。HGF与凝血因子具有高度同源性，因为其α链包含了纤溶酶 原状的"环形结构域（Kringle) "结构基序，并且所述β链包含丝氨酸蛋白酶的同源结构 域，但缺乏酶活性（Naldini, L.，Weidner, Κ. Μ.，Vigna, Ε.，Gaudino, G.，Bardelli, A.，Ponz etto, C. , Narsimhan, R. P. , Hartmann, G. , Zarnegar, R. , Michalopoulos, G. K. , et al. , EMBO J. 10, 2867-2878, 1991) 〇 HGF通过与其受体结合，介导若干细胞反应，包括各种细胞类型的分散，细管和腔 的形成，上皮间质转变，血管生成，肝再生，伤口愈合和胚胎发育。HGF/c-Met的信号传导 通路也已知在各种疾病中，包括许多人实体瘤中，参与肿瘤发展，侵袭和转移。在人类癌症 中，HGF对c-Met的旁分泌和自分泌的激活，这些分子在肿瘤中的表达，以及HGF流通浓度 升高的循环，均与预后不良相关联，并增加肿瘤转移的风险（Comoglio et al.，2008, Ioc. cit.) 〇 由于HGF在癌症和其他疾病的进程中的活跃作用，阻断HGF活性的药剂可以有利 于消除其影响。各种抗HGF(aHGF)的单克隆抗体（mAb)正在临床开发中，包括AMG102(即 rilotumumab，一种来自安进（Amgen)公司的人源化抗人HGF IgG2)，来自先灵/乐聘 (Schering/Aveo)的 AV 299,和来自千年（Millennium)公司的 TAK-701。 除抗体外，还有可用于特异性结合靶分子，由此充当拮抗剂的新型 结合蛋白或结合域（e. g. Binz, Η. K.，Amstutz, P. and PlUckthun, A.，Nat. Biotechnol. 23, 1257-1268, 2005)。此类不具有Fe的新型结合蛋白或结合域是基于设计 重复蛋白或设计重复域（冊2002/020565出11^，札1(.，厶1118七1^2，？.，1(〇111，厶.，5加11^^，]\1 T. , Briand, C. , Forrer, P. , Griltter, M. G. , and Plilckthun, A. , Nat. Biotechnol. 22, 575-582, 2004 ；Stumpp, M. T. , Binz, H. K and Amstutz, P. , Drug Discov. Today 13, 695-701，2008)。WO 2002/020565描述了如何构建重复蛋白的大型文库及其常见 应用。然而，WO 2002/020565既没有公开具有HGF结合特异性的重复域的筛选，也没有公 开特异性结合HGF的重复域的具体重复模块或重复序列基序。此外，WO 2002/020565没有 暗示具有HGF结合特异性的重复域可以用来调节HGF介导的信号传导通路，从而成功地治 疗疾病。这些设计重复域利用重复蛋白的模块化性质，并且可以具有N端和C端加帽模块， 以防止设计重复域通过屏蔽结构域的疏水核心而聚集（Forrer, P.，Stumpp, Μ. T.，Binz, H. K. and Plilckthun, A. , FEBS letters 539, 2-6, 2003) 〇 本专利技术解决的技术问题在于，鉴定具有HGF结合特异性的新型结合蛋白，例如锚 蛋白重复蛋白或结构域，用于调节HGF介导的信号传导通路，以改进对某些癌症，血管疾 病，血管发生相关疾病和其他病理学病症的治疗。本专利技术通过提供权利要求中所表述的实 施方式来解决该技术问题。
技术实现思路
本专利技术涉及一种重组结合蛋白，包括至少一个锚蛋白重复域，其中所述锚蛋白重 复域与PBS (磷酸盐缓冲液）中的HGF结合的Kd低于10 7M。 更具体而言，本专利技术涉及一种重组结合蛋白，其包括至少一个锚蛋白重复域，所述 锚蛋白重复域与选自SEQ ID NOs: 33至61的锚蛋白重复域竞争与HGF的结合。 本专利技术还涉及一种重组结合蛋白，其包括至少一个锚蛋白重复域，所述锚蛋白重 复域对HGF具有结合特异性，且包括锚蛋白重复模块，该锚蛋白重复模块具有选自SEQ ID N0:12至25的氨基酸序列以及如下序列：在该序列中，SEQ ID N0:12至25中的最多9个氨 基酸被任意氨基酸替代。 特别地，本专利技术涉及一种重组结合蛋白，其包括至少一个锚蛋白重复域，所述锚蛋 白重复域包含至少一个与选自SEQ ID N0s:33至61的任一锚蛋白重复域具有至少90%氨 基酸序列一致性的氨基酸序列，其中所述锚蛋白重复域的位置1上的G和/或位置2上的 S可选缺失；且所述锚蛋白重复域的倒数第二个位置上的L和/或最后一个位置上的N可 选地替代为A。 特别地，本专利技术涉及一种HGF结合重组蛋白，其包含序列SEQ ID NO: 1至25和33 至62中任一种肽。 本专利技术还涉及编码本专利技术所述的结合蛋白的核酸，且包含一种或多种上述结合蛋 白或核酸分子的药物组合物。 本专利技术还涉及一种使用本专利技术的结合蛋白治疗病理症状的方法。【附图说明】 图1.选定DARPin的本文档来自技高网...
【技术保护点】
重组结合蛋白，包括至少一个锚蛋白重复域，其中所述锚蛋白重复域与磷酸盐缓冲液中的肝细胞生长因子以低于10‑7M的解离常数(KD)结合。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：加比·特里西，塔利莎·巴克，道格拉斯·菲利普斯，弗雷德·W·默茨，卡什帕·H·宾茨，
申请(专利权)人：分子组合公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。