本发明专利技术涉及对VEGF‑A具有特异性的结合蛋白，特别是包含聚乙二醇部分和结合域的重组结合蛋白，所述结合域抑制VEGF‑Axxx与VEGFR‑2结合。此类重组结合蛋白的实例是包含具有期望的结合特异性的锚蛋白重复域和聚乙二醇部分的蛋白。结合蛋白可用于治疗癌症及其它病理状况，如眼病比如年龄相关性黄斑变性。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对VEGF-A特异的修饰重组结合蛋白，以及包含此类蛋白的药用组合物，和此类蛋白治疗肿瘤和眼病的用途。_2]专利技术背景血管生成即新血管在已有的脉管系统中生长，是几种病理状态的关键过程，包括肿瘤生长和眼病,特别是眼部新生血管性疾病比如年龄相关性黄斑变性(AMD)或糖尿病性黄斑水肿(DME) (Carmeliet, P. , Nature 438，932-936，2005)。血管内皮生长因子 (VEGF)通过激活内皮细胞中的VEGF受体(VEGFR)酪氨酸激酶刺激血管生成和淋巴管生成 (lymphangiogenesis) (Ferrara, N. , Gerber, H. P. ^PLeCouter, J. , Nature Med. 9, 669-676, 2003)。哺乳动物VEGF家族由五种糖蛋白组成，称为VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D (也称为FIGF)和胎盘生长因子(PIGF，也称为PGF)。VEGF-A已显示是抗血管生成疗法的有效靶标(Ellis, L. Μ·和 Hicklin, D. J. , Nature Rev. Cancer 8，579-591，2008)。 VEGF-A配体结合并激活三种结构上类似的III型受体酪氨酸激酶，命名为VEGFR-1 (也称为FLT1)、VEGFR-2 (也称为KDR)和VEGFR-3 (也称为FLT4)。VEGF配体对这些酪氨酸激酶受体中的每一种都具有不同的结合特异性，这促成它们功能的多样性。响应于配体结合， VEGFR酪氨酸激酶激活不同的下游信号传导途径网络。VEGFR-1和VEGFR-2主要见于血管内皮，而VEGFR-3大部分见于淋巴管内皮。这些受体全都具有细胞外域、单个跨膜区和被激酶插入域间断的共有酪氨酸激酶序列。最近神经毡蛋白(NRP-1)，最初被鉴定为神经元导向介质脑信号蛋白/脑衰蛋白家族的受体，显示充当VEGF-A的同种型特异性受体。已知通过VEGF-A基因内八个外显子的可变剪接产生的VEGF-A的各种同种型。所有同种型都含有外显子1-5和 末端外显子——外显子8。外显子6和7，编码肝素结合域，可被包括或不被包括。这产生根据它们的氨基酸数命名的蛋白家族VEGF-A165、VEGF-A121、 VEGF-A189等。但是，外显子8在核苷酸序列中含有两个3’剪接位点，细胞可将其用于产生具有相同长度、但不同C-端氨基酸序列的同种型的两个家族(Varey, A. H. R.等，BritishJ. Cancer 98, 1366-1379，2008)。VEGF-Axxx (“xxx”表示成熟蛋白质的氨基酸数)-促血管生成同种型家族，通过使用外显子8最近端的序列产生(导致包含外显子8a)。最近描述的抗血管生成VEGF-Axxxb同种型是通过使用进一步沿着基因离近端剪接位点66 bp的远端剪接位点产生的。这导致剪除外显子8a,产生编码VEGF-Axxxb家族的mRNA序列。VEGF-A165是优势促血管生成同种型，通常过度表达于多种人类实体瘤。VEGF_A165b 是第一种鉴定的外显子8b-编码的同种型，显示具有抗血管生成效应(Varey等，在上述引文中；Konopatskaya, O.等，Molecular Vision 12，626-632，2006)。它是 VEGF-A 的内源性抑制形式，减少内皮细胞的VEGF-A诱导性增殖和迁移。虽然VEGF-A165b可结合 VEGFRUS VEGF-A165b结合不引起受体磷酸化或下游信号传导途径活化。有几种方式抑制VEGF-A信号传导，包括通过抗体中和配体或受体，和用酪氨酸激酶抑制剂阻断VEGF-A受体活化和信号传导。VEGF-A靶向疗法已显示有效作为单药用于AMD、DME、肾细胞癌和肝细胞癌，而对转移性结肠直肠癌、非小细胞肺癌和转移性乳腺癌患者只在与化疗组合时才有益(Narayanan, R.等，Nat Rev. Drug Discov. 5, 815-816， 2005; Ellis和Hicklin,在上述引文中)。除了抗体以外，其它结合域可用于中和配体或受体(Skerra, A. , J. Mol. Recog. 13, 167-187, 2000; Binz, H. K. , Amstutz, P.和 Pliickthun, A. , Nat. Biotechnol. 23，1257-1268，2005)。一种这样的新结合域类别是基于设计的重复域(W0 02/20565; Binz, H. K. , Amstutz, P. , Kohl, A. , Stumpp, Μ. T. , Briand, C. , Forrer, P., Griitter, M. G., 和 Pliickthun, A. , Nat. Biotechnol. 22, 575-582，2004)。WO 02/20565描述可构建多大的重复蛋白库及其一般应用。但是，WO 02/20565既没公开选择具有VEGF-Axxx结合特异性的重复域，也没有公开与VEGF-Axxx特异性结合的重复域的具体重复序列基序。用目前可获得的治疗靶向VEGF-A并非在所有患者或者所有疾病(如表达EGFR的癌症)中有效。甚至越来越明显的是VEGF-A靶向疗法伴随的治疗益处复杂，可能涉及多种机制(Ellis和Hicklin，在上述引文中)。例如，市场上的抗-VEGF药物，比如贝伐珠单抗 (Avastin )或雷珠单抗(Lucentis )(见TO 96/030046, WO 98/045331 和TO 98/045332) 或者临床开发中的药物，比如VEGF-Trap (W0 00/075319)不能区分VEGF-A的促血管生成形式和抗血管生成形式，所以它们两者都抑制。结果是，它们抑制血管生成，但也剥夺基本存活因子即VEGF-Axxxb的健康组织，引起细胞毒性和剂量限制性副作用，这转而限制功效。目前抗-VEGF-A疗法的常见副作用是胃肠穿孔、出血、高血压、血栓栓塞事件和蛋白尿 (Kamba, T.和 McDonald, D. Μ. , Br. J. Cancer 96，1788-95，2007)。另一种市场上治疗AMD的抗-VEGF药物是培加他尼(W0 98/018480; Macugen , Pfizer注册商标)。培加他尼是聚乙二醇化抗-VEGF适体，即与靶蛋白特异性结合的核酸单链。关于新生血管AMD 的治疗，大量证据显示用Lucentis 的视力疗效优于用Macugen ,没有明确证据提示药物之间安全性的差异。结果是，Macugen 是该病的不常用疗法。 总之，需要用于治疗癌症及其它病理状况的改良的抗血管生成剂。本专利技术潜在的技术问题是鉴定新的抗血管生成剂，比如具有VEGF-Axxx结合特异性的重复域，用于改良治疗癌症及其它病理状况，如眼病比如AMD或DME。通过提供在权利要求中表征的实施方案解决这个技术问题。专利技术概述本专利技术涉及包含锚蛋白重复域和至少5 kDa分子量的聚乙二醇部分的重组结合蛋白， 其中所述锚蛋白域以低于KT9M的Kd结合VEGF-Axxx并抑制VEGF-Axxx结合VEGFR-2。本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：HK宾茨，P福雷尔，MT施图姆普，
申请(专利权)人：分子组合公司，
类型：
国别省市：
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