【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种高通量检测活细胞内蛋白相互作用的方法,其特征在于其是顺次按照以下步骤进行:A)BiFC质粒库的构建:将哺乳动物基因的?cDNA克隆入含YFPc?的逆转录病毒表达载体pB?CMV?NC/CC?puro中,获得含YFPc的质粒;B)YFPn?诱饵蛋白稳定表达细胞系构建:将待研究蛋白的cDNA亚克隆融合到逆转录病毒表达载体pB?CMV?CVN/VN?neo中,通过转化、挑取单克隆、质粒提取,获得该诱饵蛋白与YFPn的融合蛋白真核表达载体,经过病毒包装后,使用YFPn载体上的抗生素抗性筛选,获取带有YFPn的诱饵蛋白稳定表达细胞系;C)YFPc?X逆转录病毒包装:将步骤A)获得的带有YFPc的质粒分为若干个库,每个库含等量的不同质粒,然后将这些质粒库进行YFPc?X逆转录病毒的包装,获得对应的病毒库;D)YFPn?诱饵蛋白与YFPc?X共表达的稳定细胞系构建:将上述病毒库分别感染带有YFPn的诱饵蛋白稳定表达细胞,感染后筛选出YFPn?诱饵蛋白与YFPc?X共表达的细胞群;E)BiFC?筛选:对YFPn?诱饵蛋白与YFPc?X共表达的细胞群进非诱导条件下的相互作用筛选或诱导条件下的相互作用 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:松阳洲,
申请(专利权)人:广州美格生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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