一种检测肌酐的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及医学检测技术领域，公开了一种检测肌酐的试剂盒。本发明专利技术提供的检测肌酐的试剂盒包括2，4，6-三硝基苯酚、pH12.5～13.5的缓冲溶液和曲拉通X-100与二甲基亚砜的混合物。曲拉通X-100与二甲基亚砜的混合物可包围2，4，6-三硝基苯酚分子，在pH12.5～13.5的缓冲体系中，减缓2，4，6-三硝基苯酚与NaOH的迅速接触，提高试剂的稳定性，保证肌酐检测结果的准确性。试验表明本发明专利技术所述试剂盒稳定性好，保存期长，应用本发明专利技术所述试剂盒检测肌酐准确性高、精密度好，线性范围宽。本发明专利技术所述试剂盒适用范围广，便于推广使用，可应用于各级医院、卫生预防部门和医学生物科研单位测定血清中肌酐含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学检验测定
，具体的说是涉及一种检测肌酐的试剂盒。
技术介绍
肌酐(creatinine，Cr)是肌肉在人体内代谢的产物，每20g肌肉代谢可产生Img 肌酐。血中肌酐来自外源性和内源性两种，外源性肌酐是肉类食物在体内代谢后的产物；内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。在肉类食物摄入量稳定时，身体的肌肉代谢又没有大的变化，肌酐的生成就会比较恒定。在肌肉中，肌酸主要通过不可逆的非酶脱水反应缓缓地形成肌酐，再释放到血液中，随尿排泄。因此血肌酐与体内肌肉总量关系密切，不易受饮食影响。肌酐是小分子物质，通过肾小球滤过排出体外。在肾小管内很少吸收，每日体内产生的肌酐，几乎全部随尿排出，一般不受尿量影响。肾功能不全时，肾小球过滤降低，造成血清肌酐水平增加在体内蓄积成为对人体有害的毒素。血浆肌酐的正常上限值为ΙΟΟμπιοΙ/L左右。肾单位时间内，把若干毫升血浆中的内生肌酐全部清除出去，称为内生肌酐清除率(Ccr)。临床上检测血肌酐，计算内生肌酐清除率，可反映肾小球滤过功能和粗略估计有效肾单位的数量，因其操作方法简便，干扰因素较少，敏感性较高，为目前临床常用的较好的肾功能试验之一。血清肌酐含量的测定方法有很多，现有技术中主要有酶比色法和Jaffe氏苦味酸测定法。酶比色法的反应原理是以肌酐作为底物，经肌酐脱氨酶催化脱氨生成甲基乙内酰脲，氨与α -酮戊二酸和NADH在谷氨酸脱氢酶的作用生成谷氨酸，NAD和在340nm波长下测定NADH的吸光度变化率，计算其含量。虽然酶比色法广泛应用于肌酐测定，但是酶比色法试剂稳定性不好，检测结果重复性差，且价格昂贵。Jaffe氏苦味酸法的反应原理是样品中的肌酐在碱性环境与苦味酸(2，4，6_三硝基苯酚)反应生成橙红色的复合物，将反应液置于紫外/可见光分析仪下或半、全自动生化分析仪下，检测在主波长510nm处吸光度上升的速度，通过吸光度变化值，测算样品中肌酐的活性。然而现有的Jaffe氏苦味酸法试剂稳定性不好，2，4，6-三硝基苯酚与碱性缓冲溶液混合后Mh内就明显变红，致使检测结果偏高，检测准确性降低。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术目的是针对现有检测肌酐的试剂盒中2，4，6_三硝基苯酚与碱性缓冲溶液混合稳定性差的问题，提供了一种稳定性好的检测肌酐的试剂盒。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案一种检测肌酐的试剂盒，包括2，4，6-三硝基苯酚、pH12. 5 13. 5的缓冲溶液和曲拉通X-100与二甲基亚砜的混合物。2,4,6-三硝基苯酚，又名苦味酸，英文名为 2，4，6-Trinitrophenol,Picric acid,3为淡黄色结晶固体，具有苦杏仁味，分子式为C6H3N3O7，分子量为229. 11。现有的Jaffe氏苦味酸法试剂稳定性差，2，4，6_三硝基苯酚与碱性缓冲溶液混合后Mh内就明显变红。 本专利技术人发现曲拉通X-100与二甲基亚砜的混合物可包围2，4，6_三硝基苯酚的分子，在 PH12. 5 13. 5的缓冲体系中，可以减缓2，4，6_三硝基苯酚与NaOH的迅速接触，提高试剂的稳定性，保证肌酐检测结果的准确性。优选的，本专利技术所述试剂盒中，所述曲拉通X-100与二甲基亚砜体积比为 1 50 1 100。优选的，本专利技术所述试剂盒中，所述二甲基亚砜的加入量为1 20V/V%。试验表明，随着二甲基亚砜加入量的增多，空白吸光度的变化越小，当二甲基亚砜加入量超过IOv/后，S卩加入量为10 20V/V%时空白吸光度基本不再变化。因此，本专利技术所述试剂盒中， 所述二甲基亚砜的加入量优选为9. 5 10. 5V/V%，以降低成本，更优选为10V/V%。由于肌酐与2，4，6_三硝基苯酚在碱性环境下反应才能生成橙红色的复合物，因此为了保证待测样品中的肌酐能与2，4，6_三硝基苯酚反应，本专利技术所述试剂盒还包括 PH12. 5 13. 5的缓冲溶液。作为优选，本专利技术所述pH12. 5 13. 5的缓冲溶液为Trisj^ 酸钠、碳酸氢钠和氢氧化钠的混合溶液。Tris、碳酸钠和碳酸氢钠可以形成缓冲体系，氢氧化钠可以保证缓冲体系为碱性。优选的，所述试剂盒包括体积分数为0. 1 0. 2%曲拉通X-100、体积分数为 9. 5 10. 5%二甲基亚砜、3 10mmol/L 2，4，6-三硝基苯酚、50 100mmol/LTris、25 30mmol/L碳酸钠、2. 5 3. Ommol/L碳酸氢钠和80 120mmol/L氢氧化钠。在一个具体实施方案中，所述是试剂盒包括体积分数为0. 曲拉通X-100、体积分数为10%二甲基亚砜、6mmol/L2，4，6-三硝基苯酚、50mmol/LTrisJ8mmol/L碳酸钠、 2. 8mmol/L碳酸氢钠和100mmol/L氢氧化钠。优选的，本专利技术所述试剂盒还包括硅酸钠。硅酸钠为无色正交双锥结晶或白色至灰白色块状物或粉末，分子式为Na2SiO3 · 9H20，分子量为观4. 20，易溶于水，溶于稀氢氧化钠溶液，主要用于作为防火剂和黏合剂。本专利技术所述试剂盒中硅酸钠可以清除2，4，6_三硝基苯酚和反应产物的残留，避免肌酐与2，4，6_三硝基苯酚反应生成的复合物对检测仪器的影响，保证了仪器检测结果的准确性。优选的，所述硅酸钠浓度为80 120mmol/L，更优选为 100mmol/L。优选的，本专利技术所述试剂盒还包括标准溶液。所述标准溶液优选为150 250 μ mol/L的肌酐溶液，更优选为200 μ mol/L的肌酐溶液。本专利技术提供的检测肌酐的试剂盒可以为单一试剂，也可以为双试剂。例如，将2，4， 6-三硝基苯酚和复合表面活性剂与缓冲液制成稳定的单一试剂；或者，将2，4，6-三硝基苯酚与复合表面活性剂制成第一试剂，将缓冲液制成第二试剂，在利用该试剂盒检测肌酐时， 将第一试剂与第二试剂混合，从而检测待测样品中的肌酐。从上述的技术方案可以看出，本专利技术所述检测肌酐的试剂盒包括2，4，6_三硝基苯酚、pH12. 5 13. 5的缓冲溶液和曲拉通X-100与二甲基亚砜的混合物。曲拉通X-100与二甲基亚砜的混合物可包围2，4，6_三硝基苯酚的分子，在pH12. 5 13. 5的缓冲体系中， 可以减缓2，4，6-三硝基苯酚与NaOH的迅速接触，提高试剂的稳定性，保证肌酐检测结果的准确性。本专利技术所述试剂盒还包括硅酸钠。硅酸钠可以清除2，4，6_三硝基苯酚和反应产物的残留，避免肌酐与2，4，6_三硝基苯酚反应生成的复合物对检测仪器的影响，保证了仪器检测结果的准确性。试验表明，本专利技术所述试剂盒稳定性好，保存期长，应用本专利技术所述试剂盒检测肌酐结果准确性高，精密度好，线性范围宽。本专利技术所述试剂盒适用范围广，便于推广使用，可应用于各级医院、卫生预防部门和医学生物科研单位测定血清中肌酐含量。具体实施例方式本专利技术实施例公开了一种检测肌酐的试剂盒。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的产品进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种检测肌酐的试剂盒，其特征在于，包括２，４，６－三硝基苯酚、ｐＨ１２．５～１３．５的缓冲溶液和曲拉通Ｘ－１００与二甲基亚砜的混合物。

【技术特征摘要】
1.一种检测肌酐的试剂盒，其特征在于，包括2，4，6-三硝基苯酚、PH12. 5 13. 5的缓冲溶液和曲拉通X-100与二甲基亚砜的混合物。2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述曲拉通X-100与二甲基亚砜体积比为 1 50 1 100。3.根据权利要求1或2所述试剂盒，其特征在于，所述二甲基亚砜的加入量为1 20v/v%。4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述二甲基亚砜的加入量为10v/v%。5.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述PH12.5 13. 5的缓冲溶液为Tris、 碳酸钠、碳酸氢钠和氢氧化钠的混合溶液。6.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：董理，
申请(专利权)人：董理，
类型：发明
国别省市：82