一种高密度培养副猪嗜血杆菌用于疫苗制备的方法技术

本发明专利技术公开了一种高密度培养副猪嗜血杆菌用于疫苗制备的方法，其步骤是：A、将冻干种子菌4型、5型和（或）13型用TSA平板活化10~16h，至单菌落长出；B、挑取3~6个单菌落至TSB摇瓶一级种子培养基中，培养8~14h至OD600值达到0.4~0.6；C、以1%~5%V/V接种量将一级种子液转接自配二级摇瓶种子培养基，培养8~12h至对数生长期；D、以1%~3%V/V接种量将二级种子液转接发酵罐发酵培养基，通过pH控制，pH为6.8~7.2、OD控制，OD为40%~60%，维持菌体对数生长，至pH值稳定及溶氧回升时，放罐收菌，得到高密度的副猪嗜血杆菌菌体抗原。本发酵方法原料来源广泛、成本低廉，菌体生长快、密度高，易于实现副猪嗜血杆菌抗原的大规模高密度培养。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，更具体涉及。
技术介绍
目前，在规模化养猪场中，细菌感染十分普遍，尤其是在免疫抑制疾病发生的地区较为常见。当前，副猪嗜血杆菌是三大最主要的细菌病之一，具有多血清型，加上耐药性产生频繁，给临床免疫防治带来了困难。该菌在特定条件下可以侵入机体并引起严重的全身性疾病，以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征。至今从北京、黑龙江、辽宁、河南、湖南、宁夏、湖北、陕西等省分离出了副猪嗜血杆菌，以血清4型和5型最为流行，其次为 13型、14型和12型，局部地区的流行呈较高发病率和死亡率，而且在生产中副猪嗜血杆菌致病的情况比链球菌还要严重，也更难控制。过去很长一段时间我国猪场对副猪嗜血杆菌的防治，都依赖于国外进口疫苗(西班牙海博莱等)，而Hiprasuis又没有说明它的疫苗是主要是针对哪几种血清型，所以，对我国当前流行的血清型，效果仍不是很清楚。直到2007年，武汉科前动物生物制品有限责任公司开发出国内第一个获得批准文号的针对我国流行血清型的4型和5型二价灭活疫苗，由于其免疫保护力高，持续时间长，逐步占领了国内副猪嗜血杆菌疫苗市场。但由于我国细菌性疫苗的关键生产技本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种高密度培养副猪嗜血杆菌用于疫苗制备的方法，其步骤是：Ａ、将冻干种子菌４型、５型和或１３型用ＴＳＡ平板活化１０～１６ｈ，至单菌落长出；挑取３～６个单菌落至ＴＳＢ摇瓶一级种子培养基中，培养８～１４ｈ至ＯＤ６００值达到０．４～０．６；以１％～５％Ｖ／Ｖ接种量将一级种子液转接自配二级摇瓶种子培养基，培养８～１２ｈ至对数生长期；以１％～３％Ｖ／Ｖ接种量将二级种子液转接发酵罐发酵培养基，通过ｐＨ控制，ｐＨ为６．８～７．２、ＯＤ控制，ＯＤ为４０％～６０％，维持菌体对数生长，至ｐＨ值稳定及溶氧回升时，放罐收菌，得到高密度的副猪嗜血杆菌菌体抗原；所述的二级种子培养基成分为：酵母粉１０～３０　ｇ／Ｌ、谷氨...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈关平，王杨波，韩进，曹毅，尹争艳，方玉林，徐高原，金梅林，陈焕春，
申请(专利权)人：武汉科前动物生物制品有限责任公司，
类型：发明
国别省市：83