本发明专利技术提供了一种副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗，含抗原的比例相等的已灭活的副猪嗜血杆菌血清4型JS株、已灭活的副猪嗜血杆菌血清5型ZJ株、已灭活的副猪嗜血杆菌血清12型HeB株抗原与制备方法。本发明专利技术人分离获得三株副猪嗜血杆菌血清4型、5型和12型的菌株，这三种毒株制备的抗原的浓度含量及其相互比例进行了大量工作和实践，得到了一种抗原间配比及浓度适宜的三价疫苗，可以对我国目前流行的多种副猪嗜血杆菌血清型引起的副猪嗜血杆菌病有较好的预防和治疗效果，特别是可以解决目前由于副猪嗜血杆菌新发病原而导致的现有疫苗治疗效果不佳的问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种副猪嗜血杆菌多价疫苗，特别是指一种副猪嗜血杆菌4型JS株、5型ZJ株、12型HeB株的三价灭活疫苗及制备方法。
技术介绍
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, Hps)引起猪的多发性衆膜炎和关节炎，该病又称为猪革拉泽氏病(Glsser’s Disease)，曾一度被认为是由应激所引起的散发性疾病，后来被证实是由副猪嗜血杆菌所引起。副猪嗜血杆菌可以影响从2周龄到4月龄的青年猪，主要在断奶后和保育阶段发病，通常见于5 8周龄的猪，发病率一般在10% 15%，严重时死亡率可达50%。主要临床症状表现为咳嗽、呼吸困难、消瘦、跛行和被毛粗乱；主要剖检病变表现为纤维素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎和脑膜炎等。此外，副猪嗜血杆菌还可引起败血症，并且在急性感染后可能留下后遗症，即母猪流产、公猪慢性跛行。 早在1910年，德国科学家Glsser就发现了副猪嗜血杆菌与猪的多发性浆膜炎和关节炎之间的联系。随着世界养猪业的发展，该病已成为全球范围内影响养猪业的典型细菌性疾病。西方发达国家在大量分离副猪嗜血杆菌的基础上，发现该菌的血清型复杂多样，按Kieletein-Rapp-Gabriedson(KRG)琼脂扩散血清分型方法,至少可将副猪嗜血杆菌分为15个血清型，另有20%以上的分离株血清型不可定；根据德国、美国、加拿大、日本和西班牙等国家的血清流行病学调查，以血清型4、5、13型最为流行；根据我国血清流行病学调查和分离菌株的鉴定，以4、5型最为流行，其次是12型、13型。近年来，各副猪嗜血杆菌血清群之间交互免疫力不强，接种的疫苗菌株血清群与当时当地流行的副猪嗜血杆菌病的病原血清群不相符，给该病的预防和治疗带来了一定的难度。目前国内用于副猪嗜血杆菌病免疫预防的疫苗有勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司生产的副猪嗜血杆菌病灭活疫苗(Z-1517株)；西班牙海博莱生物大药厂生产的猪副猪嗜血杆菌病I型和6型灭活疫苗和华中农业大学、武汉科前动物生物制品有限责任公司、中牧实业股份有限公司生产的副猪嗜血杆菌病4型和5型灭活疫苗；这些疫苗的应用起到了一定的预防作用，而该病的病原流行株和多种血清型感染已经使现有疫苗很难达到预期的免疫效果，尤其是还没有副猪嗜血杆菌病12型，由于没有合适的毒株制备，加上各个抗原之间存在干扰，一针能够防治副猪嗜血杆菌新病原弓I起的副猪嗜血杆菌病为养殖业迫切需要解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的主要目的在于提供一种解决目前技术缺陷的副猪嗜血杆菌病，由三种抗原和兽医学可接受的佐剂组成，其中，所述的三种抗原为已灭活的副猪嗜血杆菌血清4型JS株、已灭活的副猪嗜血杆菌血清5型ZJ株、已灭活的副猪嗜血杆菌血清12型HeB株抗原。本专利技术使用的抗原来自副猪嗜血杆菌血清4型JS株，保藏号为CCTCC NO M2011172 ;副猪嗜血杆菌血清5型ZJ株，保藏号为CCTCC NO M 2011173 ;副猪嗜血杆菌血清12 型 HeB 株，保藏号为 CCTCC NO M 2011174。优选地，本专利技术所述三种抗原的比例相等，副猪嗜血杆菌血清4型、5型、12型抗原含量各为 2. OX 109CFU/mL。优选地，本专利技术所述的兽医学可接受的佐剂为白油佐剂、氢氧化铝胶佐剂和Montanide IMS1313 VG,Montanide IMS 251C VG,Montanide ISA15A VG及Montanide GELPR聚合物佐剂的一种或几种组成。优选的，本专利技术所述的兽医学可接受的佐剂为水性佐剂Montanide GEL PR。更优地，本专利技术所述的副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗中还含有疫苗总量O. 01% V的硫柳萊。本专利技术还提供了一种如上所述的副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗的制备方法，包括 以下步骤 a.分别将副猪嗜血杆菌血清4型JS株、副猪嗜血杆菌血清5型ZJ株、副猪嗜血杆菌血清12型HeB株菌种繁殖培养，得到4型JS株菌液、5型ZJ株菌液、12型HeB株菌液；b.分别将步骤a培养得到的4型JS株菌液、5型ZJ株菌液、12型HeB株菌液进行灭活，并浓缩菌液；c.将上述已灭活、浓缩的4型JS株菌液、5型ZJ株菌液、12型HeB株菌液等体积比例混合，并加入疫苗总量O. 01 % V的硫柳萊，然后和兽药学上可接受的佐剂进行乳化，其中，副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗抗原含量为灭活前副猪嗜血杆菌血清4型、5型、12型活菌数各为 2. OX 109CFU/mL。d.对步骤c得到的副猪嗜血杆菌病三联灭活疫苗进行分装。优选地，本专利技术的副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗的制备方法中，所述兽医学可接受的佐剂为白油佐剂、氢氧化铝胶佐剂和Montanide IMS1313 VG、Montanide IMS 251C VG、Montanide ISA15A VG及Montanide GEL PR聚合物佐剂的一种或几种组成。优选地，本专利技术所述的副猪嗜血杆菌病细菌为副猪嗜血杆菌血清4型JS株，保藏号为CCTCC NO M 2011172 ;副猪嗜血杆菌血清5型ZJ株，保藏号为CCTCC NO M 2011173 ；副猪嗜血杆菌血清12型HeB株，保藏号为CCTCC NO M 2011174。本专利技术的另一目的在于提供如上述的副猪嗜血杆菌病三联灭活疫苗在预防和治疗副猪嗜血杆菌相关病的应用。技术效果专利技术人意外地分离获得三株副猪嗜血杆菌血清4型、5型和12型的菌株，通过试验发现这三株副猪嗜血杆菌4型JS株菌、5型ZJ株菌、12型HeB株菌制备获得三联灭活疫苗可以对我国目前流行的多种副猪嗜血杆菌血清型引起的副猪嗜血杆菌病有较好的预防和治疗效果，特别是可以解决目前由于副猪嗜血杆菌新发病原而导致的现有疫苗治疗效果不佳的问题。其次，多价疫苗常常由于抗原的相互影响而导致免疫失败，特别是对于多血清型的副猪嗜血杆菌引起的疾病，由于血清型众多，选择抗原的种类和比例更加困难，而且对于大动物(猪)的免疫学实验往往时间漫长、费用昂贵，这也是一直以来市场上未出现有效的副猪嗜血杆菌多价疫苗的原因。而本专利技术在获得了三株新的副猪嗜血杆菌基础上，通过对这三种毒株制备的抗原的浓度含量及其相互比例进行了大量工作和实践，得到了一种抗原间配比及浓度适宜的三价疫苗，疫苗的免疫效果良好，可以有效治疗和预防副猪嗜血杆菌相关疾病，解决了长期以来的多血清型副猪嗜血杆菌相关疾病的多价疫苗制备困难的问题。最后，本专利技术的三价灭活疫苗使用了氧化铝胶或水型佐剂，特别发现了水性佐剂制备获得三价灭活疫苗)安全性和免疫效果最佳，而且配苗工艺简单，疫苗易注射，安全可靠，克服了以往常用的油性佐剂的缺点。菌株保藏说明本专利技术所用的菌株为副猪嗜血杆菌病血清4型JS株分类命名副猪嗜血杆菌病JS(Haemophilus parasuis JS),保藏号为CCTCCNO M 2011172 ；·副猪嗜血杆菌病血清5型ZJ株分类命名副猪嗜血杆菌病ZJ(Haemophilus parasuis ZJ),保藏号为CCTCCNO M 2011173 ；副猪嗜血杆菌病血清12型HeB株分类命名副猪嗜血杆菌病HeB(Haemophilus parasuis HeB),保藏号为:CCTCCNO Μ 2011174 ；以上本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗，其特征在于，由三种副猪嗜血杆菌抗原和兽医学可接受的佐剂组成。
【技术特征摘要】
1.一种副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗，其特征在于，由三种副猪嗜血杆菌抗原和兽医学可接受的佐剂组成。2.根据权利要求I所述的副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗其中所述抗原为已灭活的副猪嗜血杆菌血清4型JS株、已灭活的副猪嗜血杆菌血清5型ZJ株、已灭活的副猪嗜血杆菌血清12型HeB株抗原。3.根据权利要求I所述的副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗，其特征在于，所述的副猪嗜血杆菌血清4型JS株，保藏号为CCTCC NO M 2011172 ;副猪嗜血杆菌血清5型ZJ株，保藏号为CCTCC NO :M2011173 ;副猪嗜血杆菌血清12型HeB株，保藏号为CCTCC NO M 2011174。4.根据权利要求I所述的副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗，其特征在于，所述三种抗原的比例相等，副猪嗜血杆菌血清4型、5型、12型抗原的含量各为2. OX 109CFU/mL。5.根据权利要求I所述的副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗，其特征在于，所述兽医学可接受的佐剂为白油佐剂、氢氧化铝胶佐剂和Montanide IMS1313 VG、Montanide IMS 251CVG、Montanide ISA15A VG、Montanide GEL PR 佐剂的一种或几种组成。6.根据权利要求I所述的副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗，其特征在于，所述的兽医学可接受的佐剂为水性佐剂Montanide GEL PR。7.根据权利要求I所述的副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗，其特征在于，所述的副猪嗜血杆菌病三价灭活疫苗中还含有疫苗总量O. 01% V/V的硫柳汞。8.—种权利要求I所述的副...
【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，白朝勇，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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