一种血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株及其应用，血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株于2016年10月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC No:M2016560；该弱毒株的致病力大大减弱，适合用于制备治疗副猪嗜血杆菌病的药物；所述的血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株的应用，为利用血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株制备治疗副猪嗜血杆菌病的药物；所述药物为疫苗，疫苗的制备步骤包括1)一级种子液制备；2)二级种子液制备；3)原菌液制备；4)制备疫苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株及其应用，属于副猪嗜血杆菌应用

技术介绍
副猪嗜血杆菌病是近年来严重危害养猪业的新发细菌性传染病，引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜脑炎等，发病率一般为10-15％，死亡率可达50％以上，给养猪业带来了巨大的经济损失，引起了人们的日益重视。该病的致病菌副猪嗜血杆菌(Hps)的血清型复杂多样，按Kieleetin.Rapp-Gbarideosn(KRG)琼脂扩散血清分型方法，至少可将Hps分为15个血清型，另有20％以上的分离株血清型不可定。已有的资料表明，Hps具有明显的地方性特征。因副猪嗜血杆菌极易产生耐药性，所以控制该病的有效方式是疫苗接种。文献报道商业疫苗或自家苗的使用可以控制副猪嗜血杆菌的感染。但是也有使用灭活菌苗预防失败的实例，这可能是由于致病菌株与疫苗菌株血清型不同因而缺乏交叉保护。虽然交叉保护是对商品灭活疫苗的基本要求，但是菌株特异性灭活菌苗可能因为猪群中存在不止一种菌株或血清型而缺乏效力，也可能因为后来猪群中引入了新的菌株而失去效力。由于副猪嗜血杆菌血清型的多样性以及占很大比例的不能分型菌株，菌株毒力的差异，以及当前对保护性抗原和毒力因子缺乏深刻认识，还不可能有一种灭活菌苗同时对所有的致病菌株产生交叉保护力。研制具有交叉保护的疫苗是预防和控制副猪嗜血杆菌病的必然要求和大势所趋。疫苗产品的开发除高效的技术要求外，免疫成本必须低廉，不能超出养殖业的承受能力。减(弱)毒活疫苗因具有免疫效价高(可减少抗原剂量)、成本低廉、可开发广谱疫苗(活菌疫苗具有交叉保护性)的新技术优势，是当前多数传染病的研究热点。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的第一个目的在于提供一种血清7型副猪嗜血杆菌HPKP-7(拉丁文学名：HaemophilusparasuisHPKP-7)天然弱毒株，该弱毒株的致病力大大减弱，适合用于制备治疗副猪嗜血杆菌病的药物。实现本专利技术的目的可以通过采取如下技术方案达到：一种血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株，其特征在于：所述血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株于2016年10月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国·武汉·武汉大学内；保藏号为CCTCCNo:M2016560；该分类命名为副猪嗜血杆菌HPKP-7，拉丁文学名：HaemophilusparasuisHPKP-7。本专利技术的第二个目的在于提供一种上述血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株的应用，利用血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株制备治疗副猪嗜血杆菌病的药物。本专利技术的第三个目的在于提供一种治疗副猪嗜血杆菌病的药物，为利用血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株制备治疗副猪嗜血杆菌病的疫苗。实现本专利技术的目的可以通过采取如下技术方案达到：一种如上所述的治疗副猪嗜血杆菌病的药物，所述药物为疫苗。作为优选，所述疫苗通过以下制备步骤获得：1)一级种子液制备：取冻干保存的血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株接种于TSA固体平板，在温度为37℃的条件下培养18～24h；然后挑取单菌落于TSB培养基中，在温度为37℃的条件下振荡培养16～18h，进行纯粹检验合格后，作为一级种子液，置2～8℃保存备用；2)二级种子液制备：取步骤1)得到的一级种子液接种于TSB培养基中，在温度为37℃的条件下振荡培养16～18h，进行纯粹检验合格后，作为二级种子液，置2～8℃保存备用；3)原菌液制备：取步骤2)得到的二级种子培养液，接种于TSB培养基中，在温度为37℃的条件下振荡培养24～28h后，得到原菌液；4)制备疫苗：在步骤3)得到的原菌液中取样，按照《中国兽药典》附录进行纯粹检验和活菌计数；然后将原菌液离心取沉淀的菌体，用无菌生理盐水重悬菌体后洗涤，经洗涤的菌体用生理盐水稀释成浓度为3×107～3×1010CFU/mL的制苗菌液，将制苗菌液与佐剂混合，乳化，得到治疗副猪嗜血杆菌病的疫苗，2～8℃保存备用。其中，再优选地，步骤1)～3)中，所述振荡培养的转速均为120～180rpm。再优选地，所述一级种子液和二级种子液的保存时间均不超过3天。再优选地，步骤2)中，按种子液与培养基的体积比1:20，将一级种子液接种于TSB培养基中。再优选地，步骤3)中，按种子液与培养基的体积比1:100，将二级种子液接种于TSB培养基中。再优选地，步骤4)中，将原菌液在转速为8000～10000rpm的条件下离心10min，取沉淀的菌体。本专利技术的疫苗包括但不限于水包油型疫苗、油包水型疫苗、水包油包水型疫苗，可根据需要选择佐剂；作为本专利技术的优选方式，步骤4)中，所述佐剂为铝胶佐剂，并将制苗菌液和铝胶佐剂以体积比4：1混合，转速5000～8000rpm的条件下乳化10～20min。相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：1、本专利技术中血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株，该弱毒株的致病力大大减弱，适合用于制备治疗副猪嗜血杆菌病的药物；2、本专利技术将血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株应用于药物制备方面，制备药物时无需灭活，无需进行灭活检验，条件简单，药物的生产效率更高。附图说明图1为实施例1菌落的在平板上的生长形态图；图2为实施例1显微镜下的菌落形态图；图3为实施例1PCR扩增的凝胶电泳图；所述提供一种血清7型副猪嗜血杆菌天然弱毒株，于2016年10月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国·武汉·武汉大学内；保藏号为CCTCCNo:M2016560；该分类命名为副猪嗜血杆菌HPKP-7，拉丁文学名：HaemophilusparasuisHPKP-7。具体实施方式下面，结合附图以及具体实施方式，对本专利技术做进一步描述：一种血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株，所述血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株于2016年10月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNo:M2016560。将以上血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株制备治疗副猪嗜血杆菌病的疫苗。疫苗的制备方法包括以下步骤：1)一级种子液制备：取冻干保存的血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株接种于TSA固体平板，在温度为37℃的条件下培养18～24h；然后挑取单菌落于TSB培养基中，在温度为37℃的条件下，以转速120～180rpm振荡培养16～18h，进行纯粹检验合格后，作为一级种子液，置2～8℃保存备用，保存时间均不超过3天；2)二级种子液制备：取步骤1)得到的一级种子液，按种子液与培养基的体积比1:20接种于TSB培养基中，在温度为37℃的条件下，以转速120～180rpm振荡培养16～18h，进行纯粹检验合格后，作为二级种子液，置2～8℃保存备用，保存时间均不超过3天；3)原菌液制备：取步骤2)得到的二级种子培养液，按种子液与培养基的体积比1:100接种于TSB培养基中，在温度为37℃的条件下，以转速120～180rpm振荡培养24～28h后，得到原菌液；4)制备疫苗：在步骤3)得到的原菌液中取样，按照《中国兽药典》附录进行纯粹检验和活菌计数；将原菌液在转速为8000～10000rpm的条件下离心10min取沉淀的菌体，用无菌生理盐水重悬菌体后洗涤，经洗涤的菌体用生理盐水稀释成浓度为3×107～3×1010CFU/mL的制苗菌液，将制苗菌液与铝胶佐剂混合，转速5000～8000rpm的条件下乳化10～20min，得到治疗副猪嗜本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株,其特征在于：所述血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株于2016年10月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC No:M2016560。

【技术特征摘要】
1.一种血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株,其特征在于：所述血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株于2016年10月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNo:M2016560。2.一种如权利要求1所述的血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株的应用，其特征在于：利用血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株制备治疗副猪嗜血杆菌病的药物。3.一如权利要求2所述的治疗副猪嗜血杆菌病的药物，其特征在于：所述药物为疫苗。4.如权利要求3所述的治疗副猪嗜血杆菌病的药物，其特征在于：所述疫苗通过以下制备步骤获得：1)一级种子液制备：取冻干保存的血清7型副猪嗜血杆菌弱毒株接种于TSA固体平板，在温度为37℃的条件下培养18～24h；然后挑取单菌落于TSB培养基中，在温度为37℃的条件下振荡培养16～18h，进行纯粹检验合格后，作为一级种子液，置2～8℃保存备用；2)二级种子液制备：取步骤1)得到的一级种子液接种于TSB培养基中，在温度为37℃的条件下振荡培养16～18h，进行纯粹检验合格后，作为二级种子液，置2～8℃保存备用；3)原菌液制备：取步骤2)得到的二级种子培养液，接种于TSB培养基中，在温度为37℃的条件下振荡培养24～28h后，得到原菌液；4)制备疫苗：在步骤3)得到的原菌液中取样，按照《中国兽药典》附录进行纯粹...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾爱卿，廖明，王贵平，樊惠英，
申请(专利权)人：华南农业大学，广东海大畜牧兽医研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44