本发明专利技术公开了一种辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用。本发明专利技术提供的专用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成。本发明专利技术提供的专用引物可以辅助鉴定和鉴别猪链球菌2型和猪链球菌7型，应用本发明专利技术提供的专用引物进行检测，具有特异、灵敏、快速等优点，可以防患于未然，对人和动物感染猪链球菌的防控具有重要意义。
Specific primers for assisting identification of Streptococcus suis type 2 and Streptococcus suis type 7 and uses thereof
The invention discloses a specific primer for assisting identification of Streptococcus suis type 2 and Streptococcus suis type 7, and its application. The specific primers provided by the present invention are shown in sequence 1 of the order list, DNA, sequence 2 of the sequence table, DNA, sequence of the sequence table 3, sequence of DNA and sequence table 4, and DNA composition. The special primers provided by the invention can assist the identification and identification of Streptococcus suis type 2 and Streptococcus suis type 7, detection of specific primers provided by the invention, is a specific, sensitive, fast, can nip in the bud, has important significance to the prevention and control of human and animal infection of Streptococcus suis.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用。
技术介绍
猪链球菌(Str印tococcus suis, SS)是一种重要的人兽共患病原菌，可侵害各年 龄阶段的猪，病猪通常以败血症、脑膜炎、关节炎、淋巴结炎为主要特征。根据猪链球菌的荚 膜多糖抗原(CPS)可将其分为35个血清型，其中能引起人和动物发病的致病性猪链球菌血 清型主要是1型(SSl)、2型(SS2)、7型(SS7)和9型(SS9)。不同血清型分布不同，加拿大 以2、1/2、3、4、8型流行最广；意大利以2型流行最广，其次是1、9、1/2、3、7、4、8型；荷兰法 国以2和9型为主；巴西以2型流行最广，其次14、9、7、11、8、1、1/2、3、5、6、10型。近年来 这些高致病性血清型菌株的流行呈上升趋势，造成了巨大的经济损失，并引起多例人的感 染和死亡。SS2和SS7都是能够同时感染人和猪的病原菌。但目前对于这两类病原菌血清 型鉴别的报道还相对较少。近些年国外学者对SS2的鉴定研究主要利用限制性片段长度多态性分析、免疫色 谱法、间接荧光抗体试验、ELISA、多位点酶电泳法、脉冲场凝胶电泳法、随机扩增核酸片段 多态性分析以及原位分子杂交等研究方法，这些方法作为科学研究的方法是十分有效和必 要的，但作为SS2的快速诊断就显得无力了。对于SS7亚型的研究，1999年，Smith HE等人， 根据SS7CPS基因的特异性，设计引物并建立了 SS7型PCR诊断方法；2003年，Okwumabua 0 等人，根据GDH基因设计一条可扩增出688bp基因片段长度的引物，可用来检测各种血清型 的SS ；同时根据SS各血清型间CPS基因的差异，建立了 1/2、1、2、7、9型的多重PCR鉴别诊 断方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用。本专利技术提供的辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的专用引物，由序列表 的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4 所示DNA组成。所述专用引物可用于制备辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的试剂盒。本专利技术还保护一种辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的试剂盒，所述专 用引物。所述试剂盒还可包括PCR扩增的常规试剂，琼脂糖凝胶电泳的常规试剂等。所述专用引物或所述试剂盒可用于辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型。本专利技术还保护辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的方法I，包括如下步 骤(1)提取待测细菌的基因组DNA ；4(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，用所述专用引物进行PCR扩增；如果得 到了 211bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌2型；如果得到了 347bp的PCR扩 增产物，待测细菌为候选的猪链球菌7型；如果没有得到211bp或347bp的PCR扩增产物， 待测细菌为候选的非猪链球菌2型且为候选的非猪链球菌7型。本专利技术还保护辅助鉴定猪链球菌2型和/或猪链球菌7型的方法II，包括如下步 骤(1)提取待测细菌的基因组DNA ；(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR 扩增；如果应用所述引物对甲得到了 211bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌2 型；如果应用所述引物对甲没有得到211bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的非猪链球菌 2型；如果应用所述引物对乙得到了 347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的猪链球菌7 型；如果应用所述引物对乙没有得到347bp的PCR扩增产物，待测细菌为候选的非猪链球菌 7型；所述引物对甲是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引物对； 所述引物对乙是序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对。本专利技术还保护鉴别猪链球菌2型和猪链球菌7型的方法III，包括如下步骤(1)提取待测细菌的基因组DNA ；所述待测细菌为猪链球菌2型或猪链球菌7型；(2)以步骤⑴提取的基因组DNA为模板，用所述专用引物进行PCR扩增；如果得 到了 211bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌2型；如果得到了 347bp的PCR扩增产 物，待测细菌为猪链球菌7型。本专利技术还保护鉴别猪链球菌2型和猪链球菌7型的方法IV，包括如下步骤(1)提取待测细菌的基因组DNA ；所述待测细菌为猪链球菌2型或猪链球菌7型；(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR扩 增；如果应用所述引物对甲得到了 211bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌2型；如果 应用所述引物对乙得到了 347bp的PCR扩增产物，待测细菌为猪链球菌7型。本专利技术还保护一种检测来自死亡动物的样品中是否携带猪链球菌2型和/或猪链 球菌7型的方法V，包括如下步骤(1)提取待测样品的基因组DNA ；(2)以步骤⑴提取的基因组DNA为模板，用所述专用引物进行PCR扩增；如果得 到了 211bp的PCR扩增产物，待测样品疑似含有猪链球菌2型；如果得到了 347bp的PCR扩 增产物，待测样本疑似含有猪链球菌7型；如果没有得到211bp或347bp的PCR扩增产物， 待测样本疑似不含有猪链球菌2型和猪链球菌7型。本专利技术还保护一种检测来自死亡动物的样品中是否携带猪链球菌2型和/或猪链 球菌7型的方法VI，包括如下步骤(1)提取待测样品的基因组DNA ；(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，分别用引物对甲和引物对乙进行PCR 扩增；如果应用所述引物对甲得到了 211bp的PCR扩增产物，待测样品疑似含有猪链球菌2 型；如果应用所述引物对甲没有得到211bp的PCR扩增产物，待测样本疑似不含有猪链球菌 2型；如果应用所述引物对乙得到了 347bp的PCR扩增产物，待测样本疑似含有猪链球菌7 型；如果应用所述引物对乙没有得到347bp的PCR扩增产物，待测待测样本疑似不含有猪链球菌7型；所述引物对甲是序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成的引 物对；所述引物对乙是序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对。所述方法I和/或所述方法II和/或所述方法III和/或所述方法IV和/或所 述方法V和/或所述方法VI中，所述PCR扩增的反应条件为94°C 2min预变性；94°C 10s, 55°C 15s，72°C 15s，30个循环；72°C延伸lOmin。所述方法I和/或所述方法II中，所述待 测细菌可为猪链球菌2型、猪链球菌7型、猪大肠埃希氏菌、猪布氏杆菌或金黄色葡萄球菌。 所述方法V和/或所述方法VI中，所述动物可为猪。所述方法I和/或所述方法II和/ 或所述方法III和/或所述方法IV均可用于待测细菌的分类鉴定。本专利技术提供的专用引物可以辅助鉴定和鉴别猪链球菌2型和猪链球菌7型，应用 本专利技术提供的专用引物进行检测，具有特异、灵敏、快速等优点，可以防患于未然，对人和动 物感染猪链球菌的防控具有重要意义。附图说明图1为SS2特异性引物对和SS7特异性引物对鉴定猪链球菌2型阳性样本的结果； 1 =DNA Marker DL5000 ；2 :SS2特异性引物对；本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．辅助鉴定猪链球菌２型和／或猪链球菌７型的专用引物，由序列表的序列１所示ＤＮＡ、序列表的序列２所示ＤＮＡ、序列表的序列３所示ＤＮＡ和序列表的序列４所示ＤＮＡ组成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘文军，毕玉海，李晶，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：11
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