猪链球菌疫苗组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及兽用生物制品领域。更具体地，本发明专利技术涉及猪链球菌亚单位抗原，和编码其蛋白的氨基酸序列。本发明专利技术还涉及提供了一种猪链球菌疫苗组合物，该疫苗组合物用于预防和/或治疗猪链球菌相关疾病和由猪链球菌造成的感染的相关疾病。

【技术实现步骤摘要】
猪链球菌疫苗组合物及其制备方法和应用
本专利技术涉及兽用生物制品领域。更具体地，本专利技术涉及猪链球菌（Streptococcus suis)的疫苗组合物及其制备方法，所述组合物包含两种猪链球菌免疫抗原。本专利技术还涉及 将所述免疫抗原用于制备预防和/或治疗与猪链球菌相关的疾病和由猪链球菌导致的感 染的组合物和方法中应用。
技术介绍
猪链球菌是一种重要的猪病原体，可导致许多病理疾病诸如关节炎、心内膜炎、脑 膜炎、肺炎和败血病。其还是对于接触污染的猪或它们的副产物的人的重要的动物传染病 病原体，导致脑膜炎和心内膜炎。目前已知基于荚膜抗原的三十三种血清型（1-31型、33和 1/2型），但还不完全了解涉及猪链球菌的发病机理和致病力的机制，所以仍未有有效的疫 苗来防控猪链球菌的感染。 现有的灭活全菌疫苗和活的无毒疫苗，因需要重复多次免疫并且不能抵御异型菌 株的攻击，其保护功效是十分有限的。由于猪链球菌荚膜在致病力中具有重要作用，因此进 行了基于荚膜物质开发疫苗的尝试，然而，这种疫苗因为荚膜多糖的免疫原性较差未取得 令人满意的效果。有人尝试使用溶血素（suilysin)，或溶菌酶释放蛋白（MRP)和细胞外蛋 白质因子（EF)开发亚单位疫苗，然而，在一些地理区域中有显著数量的致病力强的菌株并 不表达这些蛋白质，造成其免疫保护的局限性。本专利技术首次通过将38KDA蛋白与SaoA蛋白 组合使用，针对不同血清型猪链球菌感染有着较好的保护作用，而且只需要免疫一次，避免 多次重复免疫带来的应激反应。通过免疫效力比较试验，意外发现，两种蛋白组合使用，协 同刺激机体免疫反应，有效降低了免疫剂量，大大降低免疫成本。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种预防和/或治疗猪链球菌感染的 疫苗组合物，包含两种猪链球菌免疫保护性抗原和佐剂。 本专利技术提供的预防和/或治疗猪链球菌感染的疫苗组合物包含的两种猪链球菌 免疫抗原为38KDA蛋白和SaoA蛋白。 优选地，本专利技术提供的预防和/或治疗猪链球菌感染的疫苗组合物包含的猪链球 菌免疫抗原38KDA蛋白氨基酸序列如SEQ ID N0 :3所示。 优选地，本专利技术提供的治疗和/或预防猪链球菌感染的疫苗组合物包含的猪链球 菌免疫抗原SaoA蛋白氨基酸序列如SEQ ID N0 :4所示。 本专利技术提供的预防和/或治疗猪链球菌感染的疫苗组合物包含的猪链球菌免疫 抗原38KDA蛋白、SaoA蛋白还可以是与其功能衍生物基本相同的氣基酸序列的多肤。 本专利技术的另一个目的在于提供包含猪链球菌免疫抗原38KDA蛋白、SaoA蛋白或其 功能衍生物基本相同的氨基酸序列的多肽在用于预防和/或治疗动物中猪链球菌相关疾 病或感染的组合物和/或方法中的应用。 本专利技术可以应用的猪链球菌相关疾病的非穷举性列表包括，如关节炎、心内膜炎、 脑膜炎、肺炎和败血症。 术语动物指对链球菌菌株如猪链球菌感染敏感的任何动物。具体地，这样的动 物可以是，但不限于，小鼠、猪、山羊、马和人。更具体地，所述动物由猪组成。 术语预防指通过其与链球菌菌株相关的感染或疾病的症状被阻断或延迟；术语 治疗指通过与链球菌菌株相关的感染或疾病的症状被缓和或完全消除的过程。 术语功能衍生物指具有与完整蛋白/肽序列的生物活性基本类似的功能生物 活性的蛋白/肽序列。换言之，其优选地指当将所述功能衍生物施用于动物时，基本上保留 了激发免疫应答，如针对猪链球菌菌株攻击的保护性反应的能力的多肽或其片段。 术语片段指这样的多核苷酸序列，其是人工构建（例如通过化学合成）或通过 将天然产物裂解成多个小片段（使用限制性内切酶，或机械剪切）构建的本专利技术核酸的分 离的部分，或通过PCR、DNA聚合酶或本领域公知的任何其他聚合技术合成的核酸的部分， 或通过本领域技术人员公知的重组核酸技术在宿主细胞中表达的核酸部分。 术语保护性反应意为在动物中预防猪链球菌相关疾病或由猪链球菌导致的感 染的发作或减轻存在的这样的疾病的严重性。 本专利技术涉及的猪链球菌多肽，其有利地激发动物中的保护性反应。具体地，本专利技术 实施方式的多肽包含与其功能衍生物基本相同的氨基酸序列。 如本文一般理解和使用，功能性片段指编码与完整核酸序列的生物活性基本相 似的功能生物活性的核酸序列。换言之，在本专利技术的上下文中，其优选地指基本上保留了编 码这样的多肽/蛋白质能力的核酸或其片段，所述多肽/蛋白质当施用于动物时，激发针对 猪链球菌菌株攻击的免疫应答，和更优选地保护性反应。 当指氨基酸序列时，基本上相同可以理解为本专利技术的多肽优选地具有这样的氨 基酸序列，其与SEQ ID NO :3-4中所示的序列的部分或全部具有至少70%同源性，或甚至 优选地80%同源性，或甚至更优选地90%同源性，或最优选地95%同源性。 在本文中术语同源性还包括与参比序列相同或类似，同时提供任何氨基酸的简 单替换/修饰。可以用BLAST-P (基本局部排比检索工具），本领域技术人员公知的程序进 行该方面的同源性检索。对于相应的核酸序列，同源性涉及在本领域中已知的BLASTX和 BLASTN 程序。 术语佐剂指加入到本专利技术的组合物中以增加组合物的免疫原性的物质。已知 的佐剂包括，但不限于：油佐剂，水乳状液（例如：完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂），水溶 性佐剂，Quil A佐剂，氢氧化铝佐剂，葡聚糖，硫酸葡聚糖，藻酸钠。 本专利技术实施例中使用了水溶性佐剂中的一种gel佐剂，本专利技术所用术语水溶性 佐剂又称水基佐剂或水佐剂，是一种聚合物水溶性分散体，用于提高水溶性疫苗的功 效和安全性，可以由高分子量聚丙烯酸类合成聚合物组成。 优选地，所述疫苗组合物中gel佐剂含量为10%?40% (V/V)。 在一个实施方式中，本专利技术提供一种治疗和/或预防猪链球菌感染的疫苗组合 物，由猪链球菌免疫抗原38KDA蛋白、SaoA蛋白和gel佐剂组成。 本专利技术的另一个目的是提供一种治疗和/或预防动物中猪链球菌相关疾病或感 染的疫苗组合物的制备方法，包括： (1)制备38KDA蛋白和SaoA蛋白抗原； (2)按比例混合抗原，加入佐剂，乳化。 抗原的制备可以通过本领域技术人员已知的多种方法进行，包括基因工程手段， 例如通过包含本专利技术多核苷酸的克隆或表达载体。术语载体涉及被设计用于转导/转 染一种或多种细胞类型的多核苷酸构建体。载体可以是，例如克隆载体，其被设计用于分 离、增殖和复制插入的核苷酸；表达载体，其被设计用于在宿主细胞中表达核苷酸序列； 或病毒载体，其被设计用于生产重组病毒或病毒样颗粒；或穿梭载体，其包含不只一种 类型的载体的性质。适合制备本专利技术猪链球菌抗原的公众可获得的载体包括质粒、腺病毒、 杆状病毒、酵母杆状病毒、植物病毒、腺伴随病毒、反转录病毒、单纯疱疹病毒、α病毒、慢病 毒等，还可以获得构建这样的载体的方法。本专利技术猪链球菌抗原的制备还包括通过人工合 成的方式来实现。 本专利技术的另一个目的是提供一种疫苗组合物在制备治疗和/或预防动物中猪链 球菌相关疾病或感染的药物的应用。 本专利技术疫苗组合物可以进一步包含猪链球菌全菌抗原。 优选本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪链球菌疫苗组合物，其特征在于，所述的疫苗组合物含有38KDA蛋白、SaoA蛋白和佐剂。

【技术特征摘要】
1. 一种猪链球菌疫苗组合物，其特征在于，所述的疫苗组合物含有38KDA蛋白、SaoA蛋 白和佐剂。2. 根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的38KDA蛋白是由SEQ ID NO. 3编码的蛋白；所述的SaoA蛋白是由SEQ ID NO. 4编码的蛋白。3. 根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的38KDA蛋白含量为 10-100 μ g/ml ;SaoA 蛋白含量为 50-300 μ g/ml。4. 一种猪链球菌疫苗组合物，其特征在于，所述的组合物由38KDA蛋白、SaoA蛋白和佐 剂组成。5. 根据权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的38KDA蛋白是由SEQ ID NO. 3编码的蛋白；所述的SaoA蛋白是由SEQ ID NO. 4编码的蛋白。6. 根据权利要求5所述的疫苗组合物，其特征在于，所述的38KDA蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，张海洋，田克恭，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41