抗淋巴瘤基因家族特异性核酸疫苗组合物制造技术

本发明专利技术抗淋巴瘤基因家族特异性核酸疫苗组合物涉及抗肿瘤核酸疫苗，特别是涉及Ｂ细胞表面免疫球蛋白基因家族的复合核酸疫苗组合物，其制备方法及其在治疗淋巴系统肿瘤特别是非霍奇金Ｂ细胞淋巴瘤，Ｂ细胞白血病和各种自身免疫性疾病中的应用。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术抗淋巴瘤基因家族特异性核酸疫苗组合物涉及抗肿瘤核酸疫苗，特别是涉及B细胞表面免疫球蛋白基因家族的复合核酸疫苗组合物，其制备方法及其在治疗淋巴系统肿瘤特别是非霍奇金B细胞淋巴瘤，B细胞白血病和各种自身免疫性疾病中的应用。
技术介绍
淋巴细胞克隆比例失衡功能异常是自身免疫病和肿瘤发病的重要病因。已有许多证据表明，某些肿瘤特别是某些血液系统肿瘤很难用传统的放射和/或化学方法治愈，而应用抗肿瘤免疫疗法则有可能通过主动免疫，激活机体的特异性免疫反应，在手术和放、化疗的基础上，进一步杀伤残存的瘤细胞最终达到治愈肿瘤的目的。例如，对于某些已经接受传统的抗肿瘤治疗后消退或缓解的实体瘤(如乳腺癌等)，抗肿瘤免疫治疗是一种清除微小残存病灶的有效方法。然而，抗肿瘤治疗的在实践中遇到的一个主要障碍是目前尚未弄清大多数肿瘤的肿瘤相关抗原，从而难于选择和确定适当的免疫原。通常的免疫接种治疗存在反应低下，缺乏足够的特异性等问题。淋巴系统肿瘤，特别是非霍奇金淋巴瘤，与许多其他未知相关抗原的肿瘤不同，肿瘤细胞表面都有免疫球蛋白(Ig)或T细胞受体(TCR)分子的表达，这就为淋巴系统肿瘤的免疫治疗提供了条件。免疫球蛋白分子的基本特征是具有识别特异性抗原的可变区(T细胞受体属于免疫球蛋白超家族，情况类似)。将一种免疫球蛋白可变区与其他免疫球蛋白可变区区分开的特征即为抗体的“个体型”。在抗原的分类和命名中，可变区个体型被称为“独特型”抗原。如同其他蛋白质抗原一样，免疫球蛋白可变区的独特型具有免疫源性，而且各自都能够引发抗独特型免疫反应(即产生针对个别独特型或一组独特型特异的细胞或体液免疫反应)。抗原性质是由各种肽的三维构象限定的，独特型抗原上的一些氨基酸链(短肽)组成的抗原决定簇或者称为T细胞配体(epitope)，决定了独特型的抗原性质。免疫球蛋白的可变区分别由重链(VH)和轻链(VL)基因片段以及它们各自的多变区(D)和结合区(J)基因片段编码，可有多种不同的组合，从而在免疫球蛋白可变区上产生不同的独特型。B淋巴细胞表面免疫球蛋白各自都是不同的。淋巴系统的肿瘤来源于淋巴细胞，和淋巴细胞一样表面有免疫球蛋白。免疫球蛋白可变区构成的所谓独特型抗原，可作为淋巴瘤细胞的免疫原，引发机体的抗淋巴瘤细胞免疫反应，达到治疗目的。淋巴瘤特异性独特型抗原作为肿瘤特异性抗原可以刺激免疫系统，通过抗原呈递细胞(APC)将独特型抗原修饰的抗原决定簇短肽呈递给细胞毒T细胞，细胞毒T细胞就可以识别并且杀伤肿瘤细胞。核酸(DNA)疫苗是免疫治疗的一项新进展，是直接将表达载体的裸DNA注射体内表达相应的抗原而产生免疫反应，独特型抗原的表达基因也可以制备成为核酸疫苗。然而，迄今已报道的几乎所有基于Ig/TCR可变区的核酸(DNA)疫苗都是按照患者个体化的原则设计并制备的，需要针对每一个特定的淋巴瘤个体制备其特定的免疫治疗剂，从而给这类疫苗的生产及其在治疗人类淋巴瘤中的应用带来极大的困难和限制。如果能够在分子水平上进一步明确区分独特型抗原的某些共有抗原决定簇，了解其在个体或人群间的不同组合和变化规律，就有可能设计并制备出适合于某个特定的Ig/TCR独特型群体的，或在某个群体的成员间存在交叉反应性的所谓“通用”疫苗，从而可在对淋巴瘤病人的独特型抗原结构进行大致分组的前提下，有针对性的选择并使用这样的“通用”疫苗。本专利技术人在过去长期从事抗淋巴瘤免疫治疗实践的基础上，深入地分析并比较了淋巴瘤细胞表面Ig可变区独特型的抗原结构和抗原决定簇所在的位置。结果令人惊奇地发现，大部分独特型抗原决定簇并不是象通常所认为的位于免疫球蛋白可变区上的互补决定区(CDR)，而是位于免疫球蛋白重链可变区(IgHv)的框架区域内。在继后的研究中，专利技术人发现淋巴系统肿瘤和正常淋巴细胞的免疫球蛋白可变区的框架区有高度同源性。依据免疫球蛋白的同源性，可以把人类机体内的各种各样的B淋巴细胞群分成免疫球蛋白重链可变区IgHv1-IgHv7 7个基因家族(Lefranc，M.-P.et al.，IMGT，The international ImMunoGeneTicsdatabase，Nucleic Acids Research，29207-209，2001)，淋巴系统肿瘤的IgHv具有同一IgHv基因家族的共同特征。因此本申请人相信并且用实验证实，可以依据IgHv1-IgHv7基因片段的框架区DNA片段为基础，制备适用于某一特定人群的IgHv基因家族特异性核酸疫苗，用以诱发机体的免疫反应，抑制或者杀灭肿瘤性淋巴细胞或者特定某一淋巴细胞家族，治疗淋巴系统肿瘤或者自身免疫病。专利技术目的本专利技术的一个目的是提供一种用于治疗治疗淋巴系统肿瘤或者自身免疫病的核酸(DNA)疫苗组合物，特征在于，所说的疫苗基本上是由携带免疫球蛋白重链可变区(IgHv)基因片段的重组表达载体，以及免疫学上可接受的赋形剂和佐剂组成的。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的免疫球蛋白重链可变区基因片段包括编码免疫球蛋白可变区IgHv1-IgHv7的7个基因家族的特定基因片段。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的免疫球蛋白重链可变区基因片段编码属于同一基因家族的B淋巴细胞表面独特型上共有的抗原决定簇。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的免疫球蛋白重链可变区基因片段主要位于免疫球蛋白重链可变区的框架区编码基因内。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的免疫球蛋白重链可变区基因片段是与细胞生长因子或淋巴因子基因序列融合的。根据本专利技术的一个优选实施方案，所说的细胞生长因子是粒细胞-巨噬细胞生长因子，并且所说的淋巴因子是白介素-2。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的B淋巴细胞表面独特型共有抗原决定簇基因序列与细胞生长因子或淋巴因子基因序列之间可以有一个接头序列。根据本专利技术的一个优选实施方案，其中所说的免疫球蛋白重链可变区基因片段与细胞生长因子或淋巴因子基因融合后表达的蛋白具有如下SEQ ID NO1-SEQID NO14所示的氨基酸序列(以单字母表示)，其中字母X代表任意一个氨基酸，圆点..代表可插入的无关的氨基酸，其中与GM-CSF基因重组后表达形成的融合蛋白的序列包括SEQ ID NO1-7，与IL-2基因重组后形成的融合蛋白序列包括SEQ ID NO8-14。专利技术的另一个目的是提供如上限定的疫苗组合物在治疗B淋巴细胞肿瘤和自身免疫病中的应用，其中所说自身免疫疾病包括但不只限于系统性红斑狼疮、自身免疫性血小板减少性紫癜及多发性硬化症等。附图简要说明附图说明图1显示携带IgHv1(FR)基因片段的重组质粒的酶切鉴定。其中泳道M是分子量标记物；泳道1是IgHv1(FR)/pcDNA3.0；泳道2是IgHv1(FR)-GM-CSF/pcDNA3.0；泳道3是IgHv1(FR)-IL-2/pcDNA3.0；泳道4是pcDNA3.0。图2显示携带IgHv3(FR)基因片段的重组质粒的酶切鉴定。其中泳道M是分子量标记物；泳道1是IgHv3(FR)/pcDNA3.0；泳道2是IgHv3(FR)-GM-CSF/pcDNA3.0；泳道3是IgHv3(FR)-IL-2/pcDNA3.0；泳道4是pcDNA3.0。图3显示接受本专利技术的DNA疫苗本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗淋巴瘤基因家族特异性核酸疫苗组合物是用于治疗淋巴系统肿瘤或者自身免疫病的复合核酸（ＤＮＡ）疫苗组合物，特征在于所说的疫苗基本上是由携带免疫球蛋白重链可变区基因家族特异性片段的重组表达载体，以及免疫学上可接受的赋形剂和佐剂组成的。

【技术特征摘要】
1.抗淋巴瘤基因家族特异性核酸疫苗组合物是用于治疗淋巴系统肿瘤或者自身免疫病的复合核酸(DNA)疫苗组合物，特征在于所说的疫苗基本上是由携带免疫球蛋白重链可变区基因家族特异性片段的重组表达载体，以及免疫学上可接受的赋形剂和佐剂组成的。2.根据权利要求1的复合核酸疫苗组合物，其中所说的免疫球蛋白重链可变区基因家族特异性片段包括编码免疫球蛋白可变区IgHv1-IgHv7的7个基因家族特异性片段。并且它们分别编码有如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.14的序列。3.根据权利要求1的复合核酸疫苗组合物，其中所说的免疫球蛋白重链可变区基因片段编码属于同一基因家族...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱平，
申请(专利权)人：朱平，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]