调节多谱系激酶蛋白制造技术

本发明专利技术涉及鉴定调节多谱系激酶蛋白活性和促进细胞存活和死亡的化合物的方法，该方法包括下述步骤：使含有所述的多谱系激酶蛋白的细胞同所述化合物接触；测定所述化合物是否使多谱系激酶蛋白的活性减少；和测定所述化合物是否促进细胞存活。本发明专利技术还涉及可用于治疗神经变性疾病和／和炎症的化合物的鉴定方法。本发明专利技术提供了调节多谱系激酶蛋白活性的方法，该方法包括使含有所述蛋白的细胞与的茚－并或吲哚并－化合物接触；本发明专利技术还提供了治疗神经变性疾病和／和炎症的方法。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
调节多谱系激酶蛋白的制作方法本申请为中国专利申请No.2004100491086的分案申请专利
本专利技术部分涉及调节多谱系激酶蛋白(MLK)家族成员的方法，鉴定能够调节多谱系激酶蛋白和有助于细胞存活或者促进细胞死亡的化合物的方法，鉴定能够用于治疗神经变性疾病和/或炎症的化合物的方法，以及应用能够抑制多谱系激酶蛋白的化合物治疗神经变性疾病的方法。 专利技术的
技术介绍
MLK家族包括一组蛋白，其中家族成员激酶区的蛋白质序列与MAPKKKs极为相似，但是和其它的MAPKKKs相互之间更为相似。MLK的家族成员包含有很复杂激酶串部分，例如产生紧张信号的激酶串，该激酶串特别涉及c-Jun N-终止的激酶(JNK)的调变，所述的调变可依次调节转录因子，这包括c-Jun、ATF2和ELK-1。JNK在USP5,534,426、5,593,884、5,605,808和WO 95/03324中已有描述，本专利技术引用上述各篇专利全文作为参考。MLK家族有部分包括下述各组1)多谱系激酶1(MLK1)；2)多谱系激酶2(MLK2)；3)多谱系激酶3(MLK3)；4)亮氨酸拉链携带激酶(LZK)；5)双亮氨酸拉链携带激酶(DLK)；和6)多谱系激酶6(MLK6)。MLK 1具有和对Tyr和Ser/Thr有特异性的两种激酶类似的催化区。Dorow等人，Eur.J.Biochem.，1993，213，701-710。MLK2也具有和对Tyr或Ser/Thr有特异性的两种激酶类似的催化区。Dorow等人，Eur.J.Biochem.，1993，213，701-710。已知MLK 2也如同是MST。Katoh等人，Oncogene，1995，10，1447-1451。MLK 3含有的蛋白质附加于激酶区，其中含有两个亮氨酸拉链，带有相邻的羧基终止的基本区域，并富含有脯氨酸区。Ing等人，Oncogene，1994，9，1745-1750。已知MLK 3也是SPRK(Gallo等人，J.BioL Chem.，1994，269，15O92-15100)，和PTKI(Eeoe等人，Oncogene，1994，9，935-938)。LZK是亮氨酸拉链支撑的激酶。Sakuma等人，J.Biol.Chem.，1997，272，28622-28629。DLK具有激酶区和两种推定的亮氨酸拉链基序。Holzman、等人，J.Biol.Chem.，1994，269，30808-30817。已知DLK也是ZPK(Reddy、等人，Biochem.Biophys.Res.Comm.，1994，202，613-620)和MUK(Hirai等人，Oncogene，1996，12，641-650)。MLK家族的成员在例如下述专利和文献中已有描述U.S.P5,676,945；5,554,523；WO 93/15201；CA 2,148,898；Diener，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1997，94，9687-9692；DeAizpurua等人，J.Biol.Chem.，1997，272，16364-16373；Tung等人，Oncogene，1997，14，653-659；Sells等人，Trends in Cell Biol.，1997，7，161-167；Mata，等人，J.BioLChem.，1996，271，16888-16896；Hirai等人，J.BioL Chem.，1997，272，15167-15173；Fan等人，].Biol Chem.，1996，271，24788-24793；Blouin等人，DNA and Cell Biol.，1996，15，631-642；Pombo等人，Nature，1995，377，750-754；Kiefer等人，EMBO 1，1996，15，7013-7025；Hu等人，Genes & Dev.，1996，10，2251-2264；Su等人，BMBO J.，1997，16，1279-1290；和Dorow等人，Eur.J.Biochem.，1995，234，492-500。最近，在EST数据库中还鉴定出其它MLK相关的激酶。此克隆体MLK 6的序列用七个重叠的通道(entries)表述。这些克隆体的ID数目是1007489，1460085，510915，666323，F5555，482188和178522，本专利技术引用本段各篇文献全文作为参考。最近，如群体形成试验所测定的，已指出ZPK的稳定表达可减少NIH3T3成纤维细胞的增生能力。Bergeron等人，Biochem.Biophys.Res.Comm.，1997，231，153-155。但是，Bergeron等人没有提供任何数据来说明ZPK可调节ZPK基质的活性，或者说明ZPK是否能够促进细胞的死亡。已有人指出在Swiss 3T3细胞中构成编码Myc-MLK2的表达在注射后大约20小时是能够导致编程性细胞死亡，Nagata等人，EMBOI，1998，17，149-158. 申请人研究了某些吲哚并和茚并化合物，它们可抑制与过度增生状态有关的细胞生长，以及在各种胚胎培养物，如脊神经节、纹状体、高级颈神经中枢和运动神经元中抑制细胞死亡。USP 5,475,110、5,591,855、5,594,009、5,461,146、5,621,100、5,621,101、5,705,511和5,756,494，它们已经转让给本申请人的受让人，本申请引用上述全文作为参考。U.S.P 5,705,511中所述的化合物具有式G结构，本申请引用作为参考，为式I。申请人还指出K-252a衍生物可抑制运动神经元编程性细胞死亡，所述化合物是吲哚并咔唑，它还可以调节紧张信号级联扩增。Maroney等人，J.Neurosci.，1998，18，104-111，本申请引用上述全文作为参考。由于筛选的调节紧张信号级联扩增以及促进细胞死亡和存活的化合物功能不全，因此仍然需要得到新的，筛选化合物的选择性方法。此外，也需要有用于治疗炎症和神经变性疾病的治疗筛选试验方法。本专利技术就涉及了上述目的，以及其它一些重要的目的。专利技术概述本专利技术提供了能够调节多谱系激酶蛋白和促进细胞存活的化合物的鉴定方法，该方法包括使含有多谱系激酶蛋白的细胞与所述化合物接触，测定化合物是不是造成了多谱系激酶蛋白活性的下降，和测定化合物是不是有助于细胞的存活的步骤。本专利技术还提供了能够调节多谱系激酶蛋白和促进细胞死亡的化合物的鉴定方法，该方法包括使含有多谱系激酶蛋白的细胞与所述化合物接触，测定化合物是不是造成了多谱系激酶蛋白活性的提高，和测定化合物是不是促进了细胞的死亡的步骤。本专利技术还提供了用于治疗神经变性疾病的化合物的鉴定方法，该方法包括使含有多谱系激酶蛋白的细胞或细胞萃取物与所述化合物接触，并测定化合物是不是造成了多谱系激酶蛋白活性的下降。本专利技术还提供了用于治疗炎症的化合物的鉴定方法，该方法包括使含有多谱系激酶蛋白的细胞或细胞萃取物与所述化合物接触，并测定化合物是不是造成了多谱系激酶蛋白活性的下降。本专利技术还提供了哺乳动物已有或疑有神经变性疾病的治疗方法，该方法包括给所述的哺乳动物施用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制多谱系激酶蛋白的化合物在制备用于治疗哺乳动物神经变性疾病的药物中的应用，其中所述的的化合物具有以下结构式：＊＊＊其中：Ｚ↓［１］是Ｈ和Ｚ↓［２］是Ｈ或Ｚ↓［１］和Ｚ↓［２］一起构体＝Ｏ；Ｒ↓［１］是Ｈ 或Ｂｒ；Ｒ↓［２］是Ｈ；Ｒ↓［３］是Ｈ，ＣＨ↓［２］ＣＨ＝ＣＨ↓［２］，ＣＨ↓［２］ＣＨ↓［２］ＣＨ↓［２］ＯＨ，或ＣＨ↓［２］ＣＨ↓［２］ＣＨ↓［２］－＊和Ｒ↓［４］是Ｈ，ＣＨ↓［２］ＣＨ＝ＣＨ↓［ ２］或ＣＨ↓［２］ＣＨ↓［２］ＣＨ↓［２］ＯＨ。

【技术特征摘要】
US 1998-8-26 60/097,9801.一种抑制多谱系激酶蛋白的化合物在制备用于治疗哺乳动物神经变性疾病的药物中的应用，其中所述的的化合物具有以下结构式 其中Z1是H和Z2是H或Z1和Z2一起构体＝O；R1是H或Br；R2是H；R3是H，CH2CH＝CH2，CH2CH2CH2OH，或 和R4是H，CH2CH＝CH2或CH2CH2CH2OH。2.权利要求1的应用，其中R1，R2，R4，Z1和Z2是H和R3是CH2CH＝CH2。3.权利要求1的应用，其中R1是Br，和R2，R3，R4，Z1和Z2是H。4.权利要求1的应用，其中R1，R2，Z1，和Z2是H；R3和R4是CH2CH＝CH2。5.权利要求1的应用，其中R1，R2，R3，Z1，和Z2是H；R4是CH2CH＝CH2。6.权利要求1的应用，其中R1，R2，Z1和Z2是H；R3和R4是CH2CH2＝CH2O...

【专利技术属性】
技术研发人员：安娜马罗尼，凯文M沃尔顿，克雷格A迪奥纳，尼古拉尼夫，埃梅斯特小奈特，马西A格利克斯曼，
申请(专利权)人：赛福伦公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]