一种新的多肽——人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶调节亚单位９，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，发育紊乱症，ＨＩＶ感染，免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶调节亚单位９的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。在许多复杂的生命过程，如细胞分化的时空秩序、细胞迁移的指导、组织构型的组成等，都需要细胞间的通讯和细胞间的相互作用与协调，其中涉及许多中间调节分子来传递信号。细胞间的通讯对于多细胞生物体的发生和组织的构建，协调细胞的功能，控制细胞的生长和分裂都是必需的。细胞通讯是指一个细胞发出的信息通过介质传递到另一个细胞产生相应的反应。而细胞识别是细胞通讯过程的一个重要的环节。细胞间信息的传递主要有各种中间传递物来共同传递完成，信息跨膜传递的方式随信号的受体存在部位不同可分为两类亲脂性的信号分子，如甾类激素可穿过质膜与细胞内受体结合以传递各种信息；亲水性的信号分子往往与质膜上特异的受体结合传递信息，其中包括离子通道耦联的受体，具有催化功能的受体和与G蛋白耦联的受体，而后者又分为cAMP信号通路与肌醇磷脂信号通道。与G蛋白耦联的受体就是受体与酶或离子通道的作用，通过与GTP结合的调节蛋白的耦联，在细胞内产生第二信使，从而将外界信号跨膜传递到细胞内。cAMP信号通道即是细胞外信号与其相应的受体结合，导致细胞内第二信使cAMP水平的变化，引起细胞反应的信号通道，其通过腺苷酸环化酶来增高细胞内cAMP的水平，以活化蛋白激酶的活性使特殊蛋白磷酸化，进而引起细胞应答。现已克隆得到了多种生物的不同的蛋白激酶，这些酶的作用由生物体内第二信使cAMP的变化来调控。Ⅰ型和Ⅱ型cAMP依赖的蛋白激酶均由催化亚单位与调节亚单位组成，而其在生物体内的作用亦由这两个亚单位的协同作用来调节完成。当催化亚单位与Ⅰ型和Ⅱ型调节亚单位结合时，其催化活性即被抑制。cAMP信号通道的催化单位上的腺苷酸环化酶结合在质膜上，在有镁离子和锰离子存在的条件下，腺苷酸环化酶催化ATP生成cAMP，从而增加细胞内cAMP的水平。细胞内生成的cAMP与cAMP依赖的蛋白激酶的调节亚单位结合，将抑制调节亚单位的作用，从而促进催化亚单位的作用，使酶行使正常的生理活性，以活化蛋白激酶的活性使特殊的蛋白磷酸化，进而引起相应的细胞应答。而调节亚单位cAMP结合位点的缺失将导致蛋白激酶调节亚单位的过量表达，从而抑制催化亚单位的作用，进而影响一系列相关的信号转导过程。生物体内正是通过这一途径来协调、控制蛋白激酶的作用活性。该酶的催化亚单位及调节亚单位中的任意一个的突变或表达异常都将导致蛋白的作用异常，从而导致信号传导途径的异常，进而引发一系列相关的代谢紊乱性疾病。cAMP依赖的蛋白激酶还在生物体细胞周期过程中其中重要的调节作用。研究发现，降低cAMP依赖的蛋白激酶的活性对于细胞进入细胞周期M期是必需的，当细胞中cAMP依赖的蛋白激酶的催化亚单位失去功能后，细胞即可顺利地进入细胞周期，完成细胞增殖的过程。cAMP依赖的蛋白激酶的调节亚单位即在此过程中起着重要的调节作用，调节亚单位通过与催化亚单位结合，以已知催化亚单位的作用活性及蛋白激酶的催化活性，从而促进细胞进入细胞周期，完成相应的增殖过程。由此可知，cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位在生物体内通过与催化亚单位的协同作用，参与多种重要的生理代谢过程，其表达异常将导致多种代谢途径的异常，从而引发各种相关的疾病。通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株以及未饥饿的L02细胞株中，本专利技术的多肽的表达谱与人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9。由于如上所述人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中1237-1485位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1769位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗恶性肿瘤，血液病，发育紊乱症，HIV感染，免疫性疾病和各类炎症或其它由于人cAMP依赖的蛋白激酶调节亚单位9表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶调节亚单位９，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]