一种新的多肽-人锌指蛋白72和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人锌指蛋白７２，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如实体瘤，神经系统疾病，发育紊乱症，血液病，其它肿瘤，ＨＩＶ感染，免疫性疾病等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人锌指蛋白７２的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--人锌指蛋白72，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。锌指蛋白为生物体内很大的一类转录调节因子，调控着生物体内各组织基因的转录与表达。转录调控因子在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录。编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。锌指蛋白对基因表达的调控主要通过与特定的DNA序列结合来完成，现在发现也有一些锌指蛋白可与RNA结合，在生物体各种重要的信号转导过程中起调节作用。锌指蛋白在生物体内的分别非常广泛，按其结构特征又可分为各种不同的种类及亚家族，不同亚家族的成员在生物体内协同作用，以正确地调节不同基因的转录与表达及一些重要信号转导途径的完成。锌指蛋白为编码锌离子介导的核苷酸结合蛋白多基因家族中的成员，按这些蛋白锌指结构域的不同可将这些蛋白分为不同的类型，其中C2H2型锌指蛋白是分布最广的一类。C2H2型锌指蛋白中有一部分蛋白其蛋白序列中含有果蝇Kruppel基因保守的序列片段，这些蛋白构成了独立的C2H2型锌指蛋白Kruppel亚家族。该亚家族的成员均含有C2H2型锌指蛋白家族共有的由28-30个氨基酸组成的保守的锌指重复基序(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP。此外，该亚家族各成员的锌指结构基序间还由一保守的H/C连接区域连接在一起，该区域含有保守的氨基酸序列TGEKPY/F。1991年，Bellefroid等人指出，该Kruppel亚家族中约有三分之一的成员在其N末端还含有一由75个氨基酸组成的保守基序，并将此基序命名为KRAB(Kruppel-associated box)结构域。该结构域为锌指蛋白N末端与DNA结合的结构域，在进化上高度保守。该结构域由A、B两个盒结构组成，其中富含变化的氨基酸残基，形成两个亲水性螺旋。KRAB结构域为一潜在的转录抑制结构域，其中由45个氨基酸组成的亲水性螺旋片段为转录抑制所必须的，螺旋结构中氨基酸的替换将减弱蛋白对转录的抑制功能，从而导致基因转录表达的失调及引发各种发育及恶性紊乱相关的疾病。人们已从酵母、果蝇、鼠及人等多种生物体中分离得到了各种C2H2型锌指蛋白Kruppel亚家族中的成员。1991年，Bellegroid等人从鼠及爪蟾体内克隆得到了两个KRAB型锌指蛋白；1993年，Bellegroid等人又从人体内克隆得到锌指蛋白Kruppel亚家族的另一个成员ZNF91，该蛋白亦为一含KRAB盒结构的锌指蛋白；1999年，Rosati等人又从人从克隆得到了一新的KRAB锌指蛋白ZNF41。ZNF41蛋白为一潜在的转录抑制物，其蛋白序列中含有一DNA结合结构域及一转录抑制结构域，其在生物体内参与调控各种基因的转录与表达。研究发现，该蛋白在生物体的表达通常与X染色体特定区域的活性相关，其通过调节X染色体特定区域的活性来调节与之相关的特定区域的基因的转录与表达的水平。本专利技术的人的基因与已知人锌指蛋白ZFP41在蛋白水平上有47％的同一性和62％的相似性，且与ZFP41相似，其蛋白序列的N末端亦含有锌指蛋白KRAB亚家族的特征性结构域---KRAB结构域；C末端则含有C2H2型锌指蛋白家族的特征性结构域---C2H2型锌指结构域。基于以上各点，故认为本专利技术的新基因为人锌指蛋白KRAB亚家族中的新成员，命名为人锌指蛋白72。并以此推断其与ZFP41相似，同为锌指蛋白KRAB亚家族中的成员，并具有相似的生物学功能。该蛋白在生物体内与X染色体特定区域的活性的调节相关，其可从染色体水平调节相关基因的转录与表达，该蛋白的表达异常通常与生物体内一些发育紊乱性疾病、相关组织的肿瘤及癌症等疾病的发生密切相关。其还可用于诊断及治疗上述各种疾病。由于如上所述人锌指蛋白72蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白72蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白72蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--人锌指蛋白72以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白72的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白72的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人锌指蛋白72的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--人锌指蛋白72的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--人锌指蛋白72的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人锌指蛋白72异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中146-2119位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-2369位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人锌指蛋白72蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人锌指蛋白72蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人锌指蛋白72表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人锌指蛋白７２，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]