【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程与适体技术，公开了针对筛选细菌N-酰基高丝氨酸内酯类(AHLs)模拟物的噬菌体展示技术。具体而言，特指一种筛选细菌N-酰基高丝氨酸内酯类(AHLs)多肽模拟物的技术，该方法同样也适用于各种类型长、短链AHLs的多肽模拟物筛选。本专利技术中涉及的噬菌体展示技术可适用于例如噬菌体抗体库、环肽、线性多肽等带有随机文库的任何噬菌体文库。涉及的宿主菌为可以被噬菌体文库侵染的雄性F’细菌，例如ER2738、DH5αF’、XL1-Blue等，涉及的载体为感应QS分子诱导细菌携带耐药抗性基因的载体pSB538。属于病原微生物预防与控制领域。
技术介绍
随着细菌耐药的形势日益严峻，替代抗生素的新型抑菌技术和策略的研究和开发迫在眉睫。其中，通过免疫细菌群体感应（QS,quorumsensing）效应分子来提高宿主抗菌能力是一个具有广阔应用潜力的抑菌策略。细菌的群体感应是指细菌根据自身细胞密度变化进行基因表达调控的群体行为，研究发现，自然界中大部分的细菌都存在QS现象...
【技术保护点】
一种筛选N‑酰基高丝氨酸内酯类模拟物的方法，其特征在于：以QS分子C4‑AHL感应诱导抗性载体pSB538，该质粒pSB538由QS感应菌株pSB536衍生而来；带有嗜水气单胞菌群体感应系统AhyRI’和氯霉素抗性性基因Cmr，AhyR蛋白感应C4‑AHL分子或者其模拟多肽时，激活AhyI’启动子，诱导抗性基因表达；在添加含有氯霉素抗性的培养基中培养，只有添加C4‑AHL分子或者产生其模拟多肽才能使细胞存活；利用M13噬菌体不裂解宿主菌并可分泌到胞外的特性，侵染携带pSB538的大肠杆菌，在添加氯霉素抗性的平皿中筛选出可见光下显蓝色，且12小时孵育后能正常生长的噬菌斑；然后...
【技术特征摘要】
1.一种筛选N-酰基高丝氨酸内酯类模拟物的方法，其特征在于：以QS分子C4-AHL感应
诱导抗性载体pSB538，该质粒pSB538由QS感应菌株pSB536衍生而来；带有嗜水气单胞菌群
体感应系统AhyRI’和氯霉素抗性性基因Cmr，AhyR蛋白感应C4-AHL分子或者其模拟多肽时，
激活AhyI’启动子，诱导抗性基因表达；在添加含有氯霉素抗性的培养基中培养，只有添加
C4-AHL分子或者产生其模拟多肽才能使细胞存活；利用M13噬菌体不裂解宿主菌并可分泌
到胞外的特性，侵染携带pSB538的大肠杆菌，在添加氯霉素抗性的平皿中筛选出可见光下
显蓝色，且12小时孵育后能正常生长的噬菌斑；然后将该噬菌体扩增，加入带有pSB536的QS
感应菌株中，通过C4-AHL模拟多肽可诱导生物发光的方法验证，最后测序获得特异模拟多
肽序列。
2.根据权利要求1所述的一种筛选N-酰基高丝氨酸内酯类模拟物的方法，其特征在于：
所述方法具体为：
（1）将含有QS信号分子C4-AHL感应抗生素抗性质粒转导入大肠杆菌ER2738菌株；从划
线平板中分别挑取单菌落ER2738接种至5ml添加有20μg/mL四环素和100μg/mL氨苄青
霉素的LB培养基中，37oC、250rpm振荡过夜，以2%接种量转接到LB培养基中，然后在200
rpm条件下振荡至对数生长中期，含pSB538质粒菌收集1mL菌体后重悬于200μLLB培养基
中待用；
（2）将噬菌体肽库放置冰上化冻，分别取10μL稀释到90μL无菌水中，另取10μL稀释
到990μL无菌水中，再分别将步骤（1）中待用重悬后的200μL菌液与10μL已稀释的噬菌体
肽库轻轻混匀，在室温条件下...
【专利技术属性】
技术研发人员：林向民，姚祖杰，林文雄，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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