红细胞生成素脂质体分散液制造技术

本发明专利技术涉及一种红细胞生成素的脂质体基非胃肠组合物，它含有：（ａ）有效量的具有增强骨髓细胞产生网状细胞和红细胞的生物特性的包括红细胞生成素或其可药用衍生物的活性成分；（ｂ）类脂相，含有（ｉ）卵磷脂或氢化卵磷脂；（ｉｉ）任选的带有正电荷或负电荷的类脂化合物；（ｉｉｉ）胆固醇或其衍生物，选自胆固醇酯、胆固醇的聚乙二醇衍生物（ＰＥＧ－胆固醇）和胆固醇的有机酸衍生物；和（ｃ）磷酸盐缓冲剂。本发明专利技术的脂质体基非胃肠剂型通过乙醇注射技术制备。所述组合物避免了使用人血清白蛋白，表现出极佳的稳定性。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及红细胞生成素的脂质体制剂。尤其是，本专利技术涉及通过乙醇注射技术制备的非胃肠脂质体剂型，它具有卓越的稳定性。
技术介绍
红细胞生成素(EPO)是一种糖蛋白，它是与调节红细胞合成有关的主要因子。红细胞生成素在肾脏中生成并通过下列机制起作用刺激骨髓中的前体细胞，使它们分裂并分化为成熟的红细胞。已经使用重组产生的165个氨基酸的糖蛋白作为治疗各种贫血，包括与慢性肾衰、叠氮胸苷治疗HIV感染的患者和化疗的癌症患者有关的贫血的有效治疗剂。糖蛋白通过静脉(IV)或皮下注射(SC)经非胃肠给药。目前，使用的非胃肠制剂通常是用于IV或SC注射的无菌缓冲水溶液，它们含有作为载体的人血清白蛋白(HSA)。这类制剂在美国有市售，商标为EPOGEN和PROCRIT。这些产品含有红细胞生成素，呈1毫升不含防腐剂的单次给药规格或者2毫升的含防腐剂的的多次给药规格(小瓶)。虽然这些制剂获得了很大的成功，但存在着与使用人血清白蛋白作载体有关的某些缺陷。因为HSA由天然来源获得，作为载体由于传染性疾病，例如HIV或肝炎而具有潜在的危险性，因此对材料必须进行仔细筛选。另外，获得适合质量的HSA通常也是个问题。因此，需要一种红细胞生成素注射剂，它不使用HSA作为载体。因此，进行了各种尝试以提供一种改进的红细胞生成素制剂，它不使用HSA作为载体。同时，该制剂应是稳定的并具有较长保存期。另外，该制剂须避免出现活性成分粘附在包装小瓶表面的问题。脂质体是包含以球形双分子层排列的两亲类脂的小室。脂质体可包含许多由水通道分隔的同心的类脂双分子层(多室脂质体或MLVs)；或者它们可包含一个双分子层膜(单室脂质体)，可以是小单室脂质体(SUVs)或大单室脂质体(LUVs)。类脂双分子层由两个类脂分子单层组成，具有疏水性“尾”区和亲水性“头”区。在双分子层膜中，类脂单分子层的疏水性“尾”指向双分子层的中央，但亲水性的“头”指向水相。脂质体可用于包封各种捕获于双分子层内部或双分子层中间的水相中的亲水性化合物，或者捕获于双分子层内的疏水性化合物。因此，它们特别适于通过包封水溶性差或在治疗剂量下表现出不可接受的毒性的化合物从而释放生物活性物质。EP253619公开了一种制备仅有双分子层的脂质体的具体方法。各种活性物质的脂质体制剂是多年来已知的，并建议了红细胞生成素的脂质体制剂。例如，Maitani等，J.Pharm，Sci.，85440-445(1996)公开了口服的红细胞生成素脂质体制剂，所述脂质体通过逆相蒸发法制备。由于该制剂是口服的，因此优选有高百分比的EPO结合到脂质体中。然而，高包封率的单室脂质体形式的该制剂在肝脏表现出高浓度，导致毒性。另外，其中采用的制备方法需要特殊原料(例如聚甘油磷脂)并使用有机溶剂。再者，其中使用的逆相方法招致大量未包封的EPO损失，这是不希望的并造成高成本。本专利技术的目的是提供适于EPO的非胃肠制剂，该制剂避免了使用HAS作为载体，为较长的保存期提供长期稳定性，该制剂可通过适于大规模制造的方法进行制备。专利技术概述一种脂质体基的非胃肠组合物，含有(a)有效量的具有增强骨髓细胞产生网状细胞和红细胞的生物特性的包括红细胞生成素或其可药用衍生物的活性成分；(b)类脂相，含有(ⅰ)卵磷脂或氢化卵磷脂；(ⅱ)任选的带有正电荷或负电荷的类脂化合物；(ⅲ)胆固醇或其衍生物，选自胆固醇酯、胆固醇的聚乙二醇衍生物(PEG-胆固醇)和胆固醇的有机酸衍生物；和(c)缓冲水溶液。本专利技术的组合物含有通过如下方法制备的单室双分子层脂质体制备类脂相的醇溶液，将其加压注射到高速匀浆器中的缓冲水溶液中。将如此制备的脂质体与红细胞生成素活性成分孵育(incubate)形成本专利技术的脂质体分散液。活性成分优选是具有增强骨髓细胞产生网状细胞和红细胞的生物特性的红细胞生成素或其可药用衍生物。EPO糖蛋白可由天然来源获得或者用美国专利4703008、5441868、5547933、5618698和5621080中公开的已知方法重组生产，这些文献在此引作参考。本专利技术非常出人意料地发现，在本文所述的温和条件下制备的脂质体EPO组合物表现出改善的稳定性，即脂质体自身是稳定的并且同时生物有效物质的化学降解和凝聚减至最少。另一个出人意料的优点是，EPO活性成分不粘附在瓶壁或IV注射管的表面，即使EPO不是完全被结合到脂质体中，它也是基本上完全被包含在脂质体分散液的间质中。专利技术详述用于本专利技术的活性成分是具有增强骨髓细胞产生网状细胞和红细胞的生物特性的红细胞生成素和其衍生物。本专利技术的脂质体分散液用作治疗以红细胞生成减少或生成有缺陷的红细胞为特征的血液疾病的非胃肠制剂，所述疾病是，例如各种类型的贫血，包括与慢性肾衰、齐多夫定治疗的HIV感染患者和进行化疗的癌症患者有关的贫血。它还可用于治疗各种病症、障碍和血液失调症状，例如镰状红细胞病、β-地中海贫血、囊性纤维化、妊娠和月经障碍、早熟性贫血、脊髓损失、宇航病(flight space)、急性失血和衰老等。本专利技术的EPO组合物优选经非胃肠给药(如IV、IM、SC或IP)。预期有效剂量根据所治疗的病症和给药途径将有较大变化，但预期活性物质的有效剂量范围在0.1(～7U)-100(～7000U)μg/kg体重。治疗贫血的优选剂量为约50-约300单位/kg，每周三次。每100克的本专利技术EPO脂质体分散液通常含有约200，000单位-约1百万单位的EPO糖蛋白。将活性EPO成分分散在下列成分形成的脂质体悬浮液中(a)类脂相，含有(ⅰ)卵磷脂或氢化卵磷脂；(ⅱ)任选的带有正电荷或负电荷的类脂化合物；和(ⅲ)胆固醇或其衍生物，选自胆固醇酯、胆固醇的聚乙二醇衍生物(PEG-胆固醇)和胆固醇的有机酸衍生物；和(b)缓冲水溶液。这类制剂，尤其是按照EP0253619中描述的方法制备的制剂，所显示出来的特性使得它适于替代现有技术的含有HAS的组合物，该文献在此引作参考。卵磷脂可使用纯净形式的天然卵磷脂，或优选使用更稳定的氢化卵磷脂，使用后者可降低稳定剂的浓度。每100克组合物中的卵磷脂含量通常为约0.5-5.0克。氢化卵磷脂优选是不含可检测水平的催化剂的质量良好的产品，催化剂对EPO和脂质体的稳定性具有负面影响。胆固醇被用作脂质体的稳定剂，它在每100克组合物中的用量为0.1-1.0克。除胆固醇外，也可使用其它胆固醇衍生物，例如胆固醇酯、胆固醇的聚乙二醇衍生物(PEG-胆固醇)以及胆固醇的有机酸衍生物，例如半琥珀酸胆固醇。正电性的或负电性的类脂是带有正电荷或负电荷成分的类脂化合物。正电性类脂是油基胺或硬脂基胺。负电性类脂是油酸、磷脂酸，例如二棕榈酰磷脂酸(DPPA)、二棕榈酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酸(DSPA)或二肉豆蔻酰磷脂酸(DMPA)。使用这类带电荷的类脂得到的是确保乳白色分散液不发生脂质体沉淀的带电荷脂质体。如上所述，活性红细胞生成素糖蛋白不粘附在给药用的容器的玻璃壁上或硅质管上的结果是相当出人意料的，即使活性成分不结合在脂质体中，也只以带电荷脂质体的分散液形式中存在。醇类成分包括一至六个碳原子的低级链烷醇，例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇和正丁醇等，在通过用乙醇注射技术制备的组合物中，每100克组合物中通常含有0.5-约5.0本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂质体基的非胃肠组合物，含有： （ａ） 有效量的具有增强骨髓细胞产生网状细胞和红细胞的生物特性的包括红细胞生成素或其可药用衍生物的活性成分； （ｂ） 类脂相，含有： （ｉ） 卵磷脂或氢化卵磷脂； （ｉｉ） 任选的带有正电荷或负电荷的类脂化合物；和 （ｉｉｉ） 胆固醇或其衍生物，选自胆固醇酯、胆固醇的聚乙二醇衍生物（ＰＥＧ－胆固醇）和胆固醇的有机酸衍生物；和 （ｃ） 磷酸缓冲液。

【技术特征摘要】
EP 1998-2-23 98103111.51．一种脂质体基的非胃肠组合物，含有(a)有效量的具有增强骨髓细胞产生网状细胞和红细胞的生物特性的包括红细胞生成素或其可药用衍生物的活性成分；(b)类脂相，含有(ⅰ)卵磷脂或氢化卵磷脂；(ⅱ)任选的带有正电荷或负电荷的类脂化合物；和(ⅲ)胆固醇或其衍生物，选自胆固醇酯、胆固醇的聚乙二醇衍生物(PEG-胆固醇)和胆固醇的有机酸衍生物；和(c)磷酸缓冲液。2．权利要求1的组合物，其中的组合物包含单室双分子层脂质体，所述脂质体是如下制备的制备类脂相的醇溶液，将该溶液加压注入高速匀化器中的缓冲剂水溶液中。3．权利要求1或2的脂质体基制剂，特征在于它还包含稳定剂。4．权利要求3的脂质体基制剂，其中的稳定剂是甘油。5．权利要求1-4任一项的脂质体基制剂，其中的卵磷脂是氢化卵磷脂。6．权利要求1-5任一项的脂质体基制剂，其中的带正电荷或负电荷的类脂化合物选自二棕榈酰磷酸酯(DPPA)、二棕榈酰甘油(DPPG)、油基胺和硬脂基胺。7．权利要求1-6任一项的脂质体基制剂，其中的缓冲剂选自二水合磷酸二氢...

【专利技术属性】
技术研发人员：R奈夫，S德尔梅尼科，A维特尔，FU弗勒特尔，
申请(专利权)人：西拉格国际有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]