单克隆抗CXCL13抗体制造技术

本发明专利技术涉及ＣＸＣＬ１３的结合成员，特别是抗体分子。所述结合成员可以用于治疗与ＣＸＣＬ１３相关的病症，包括关节炎病症，如类风湿关节炎。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】单克隆抗CXCL13抗体本专利技术涉及CXCL13的结合成员，特别是抗体分子。所述结合成员 可以用于治疗与CXCL13相关的病症，包括关节病症，如类风湿关节炎。CXCL13是有效的B细胞化学引诱物，其指导幼稚B细胞进入二级 淋巴器官的滤泡，并且由二级淋巴器官的富含B细胞的区域中的滤泡树 突细胞(FDCs)和基质细胞组成型表达。CXCL13也称作吸引B细胞的趋 化因子1(BCA-1)。 CXCL13通过其受体CXCR5传递信号。CXCR5是7 次跨膜的G蛋白偶联的受体，并且是1类GPCR家族的CXC趋化因子 受体亚家族的成员。CXCR5以高水平在幼稚和激活的B细胞，包括外 周血和扁桃体B细胞上表达。它也在激活的外周血CD4+T细胞的一个 亚群和二级淋巴组织中的大多数CD4+细胞上表达。CXCL13是CXCR5 的p舉一已知配体。CXCL13在外周淋巴器官的发育中起作用。例如，Ansel等人。用T细胞依赖性抗原 免疫的CXCL13缺陷小鼠在淋巴结和脾中形成生发中心，但它们^艮小， 并且具有不规则的构造，提示CXCL13是滤泡内B细胞的募集和正确定 位所需要的。CXCL13也在先天免疫中起作用。CXCL13缺陷小鼠缺乏腹膜腔和 胸膜腔Bl细胞，并且缺乏针对体腔细菌抗原的天然抗体的产生(Ansel, KM.等Immunity, 16: 67-76, 2002)。如本文其它地方所讨i仑的，存在证据表明CXCL13参与多种病症。本领域报道了 CXCL13结合成员。例如，MAB801是可商购的鼠抗 人CXCL13单克隆抗体(R & D Systems: MAB801)。 MAB470是大鼠抗小 鼠CXCLB单克隆抗体。通过利用合适设计的选择技术和测定，我们开发了 CXCL13的结合 成员，其抑制CXCL13与其革巴受体CXCR5的结合。本专利技术的结合成员抑制CXCL13与靶受体CXCR5的结合。结合的 抑制可以是直接抑制。本文描述了 CXCL13的结合成员，也称作CXCL13结合成员。该结 合成员结合并且可以中和人CXCL13和非人灵长动物CXCL13,如猕猴 CXCL13。非人CXCL13表示在除人之外的物种中天然存在的CXCL13 的直向同源物。本专利技术的结合成员正常情况下相对于CXC家族趋化因子的其他成 员，包括例如CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL8, CXCL10和/或CXCL12, 对于CXCL13是特异性的，并且因此选择性结合CXCL13。这例如可以 在竟争测定中确定或证明。例如，合适的测定在本文的实施例2.5中描述。并且可以用于治疗与CXCL13相关的病症，例如类风湿关节炎，如本文其它i也方的^M田描述。如下文更详细描述的，已经显示了本专利技术的结合成员能够以高效价中和CXCL13。中和表示抑制CXCL13的生物活性。本专利技术的结合成员 可以中和CXCL13的一种或多种活性。受抑制的生物活性典型是 CXCL13与结合配偶体的结合。例如，受抑制的生物活性可以是CXCL13 与CXCR5的结合。根据本专利技术，可以抑制人或非人CXCL13与CXCR5的结合，例如， 结合成员可以抑制非人灵长动物，如猕猴CXCL13与CXCR5的结合。 CXCR5可以是人或非人的，如非人灵长动物，如猕猴或小鼠的CXCR5。 一方面，CXCR5与CXCL13是同 一物种的。典型地，CXCR5是人CXCR5 。CXCL13与CXCR5的结合的中和例如可以测量为CXCR5信号传递 介导的活性的函数，因为CXCL13与CXCR5的结合刺激所述活性。由于CXCR5是G蛋白偶联的受体，所述活性可以是与G蛋白偶联 的受体相关的活性。例如，CXCL13与CXCR5的结合可以通过G蛋白亚基Gai (其抑 制腺苷酸环化酶)的释放导致腺苷酸环化酶活性的下调和细胞cAMP水 平的降低。因此，合适的测定可以包括检测在缺乏结合成员的条件下发 生的细月包cAMP水平的降^氐的抑制，即本文称作cAMP的测定可以测量 CXCL13介导的细胞cAMP水平的抑制(通过本文的结合成员)。典型 地，用于cAMP测定中的细胞是用腺苷酸环化酶激活物如NKH477共刺 激的。用于所述测定中的合适的细胞在本文中描述。合适的(细胞)CAMP测定包括以均相测定形式组合了荧光共振能量转移(FRET)和时间分辨荧光(TRF)技术的那些测定(在本文中称作 TRF/FRET cAMP测定)。TRF/FRET cAMP测定的实例包括HTRF (均 相时间分辨荧光)cAMP测定(CisBio International)(参见例如Gabriel D 等，(2003) Assay and Drug Development Technologies 1(2): 291-303)禾口 LANCE cAMP测定(Perkm Elmer)(参见例如Hemmila等人(1999) J B讓ol Screen 4(6): 303-308)。FRET是指供体荧光团和合适的受体荧光团(FRET供体-受体对) 之间的激发能量的非放射性能量转移。典型地，该测定成分包括标记 的cAMP (示踪剂cAMP)和标记的cAMP特异性抗体。示踪剂cAMP 和抗体都用供体-受体对的一个成员标记。当抗体结合示踪剂cAMP时， 发生FRET,并且通过TRF确定受体发射的信号。样品中的游离cAMP 与示踪剂cAMP竟争结合抗体，并且减少FRET信号。该测定因此包含 确定受体发射的信号。优选地，该测定包括确定供体和受体的特异性信号作为内部对照， 以得到比值测量值，其补偿测定中有色化合物的存在。在本测定中，供体受体对典型地使得供体受到约337-340 nm的光的 激发。典型地，在供体和受体之间的FRET之后，受体发射约665nm的 信号(其可以是时间分辨的)。例如，XL665 (HTRF cAMP测定中的 受体)和Alexa Fluor -647染料(LANCE⑧cAMP测定中的受体)都在 665nm发射荧光信号。例如，供体可以在约615-620nm发射信号。受体可以是例如吸收红色的荧光染料，特别是亲水的吸收红色的染 料(Buschmann等，Bioconjugate Chem. 2003, 14: 195-204)。吸收红色的焚 光染料可以是例如Alexa Fluor -647 (Perkm Elmer),例如用于LANCE cAMP测定中。供体-受体对的实例包括例如用于HTRF cAMP测定中的铕穴状4匕 合物(供体)/XL665 (受体)和例如用于LANCE cAMP测定中的铕螯 合物(供体)/Alexa Fluor -647染料(受体)。示踪剂cAMP或抗体可以用供体或受体标记。因此，测定可以包括 使用(供体标记-示踪剂cAMP )和(受体标记-cAMP特异性抗体)或使 用(受体标记-示踪剂cAMP )和(供体标记-cAMP特异性抗体)。例如， 测定可以包括使用XL665-cAMP和铕穴状化合物-抗-cAMP单克隆抗体，10如在HTRF⑧测定中。测定可以包括使用铕螯合物标记的cAMP和Alexa Fluor -647染料标记的cAMP抗体，如在LANCE⑧测定中。 通过TRF确定TRF/F本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＣＸＣＬ１３的分离的结合成员，其中所述结合成员抑制ＣＸＣＬ１３与ＣＸＣＲ５的结合，并且其中所述结合成员与具有氨基酸序列ＳＥＱ　ＩＤＮＯ：１１的抗体ｓｃＦｖ分子竞争结合ＣＸＣＬ１３。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：W巴克，FA凯斯，
申请(专利权)人：阿斯利康瑞典有限公司，免疫医疗有限公司，
类型：发明
国别省市：SE[瑞典]