本发明专利技术涉及特异结合并中和灵长类ＧＭ－ＣＳＦ的人单克隆抗体或其片段。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的抗体中和剂本专利技术涉及抗体及其片段，其能中和人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的活性。本专利技术进一步涉及包含该抗体及其片段的药物组合物以 及该抗体及其片段用于制备治疗各种病症的药物的用途。粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，最初被描述成粒细胞和巨 噬细胞前体细胞的体外生长和分化的有效刺激物，它是约23 kDa的糖蛋白， 带有4个a螺旋束结构，其能结合由属于1类细胞因子受体家族的亚基构 成的异二聚化的受体。它刺激诸如巨噬细胞、嗜中性白细胞、粒细胞、嗜 曙红细胞和提呈抗原的树突状细胞成熟，增加它们在抗感染方面的功能能 力。在小鼠中的基因消除实验，即静默或敲除感兴趣的基因(本文中的 GM-CSF )的实验，显示GM-CSF对于维持一些巨噬细胞群(如涉及清除肺 中表面活性剂和应答某些种类的感染或免疫应答的那些)的功能活性来说 是必需的。尽管GM-CSF对嗜中性白细胞、嗜曙红细胞、巨噬细胞、以及较次要 的红细胞类和巨核细胞的先祖细胞在体外有有效的刺激活性，而用基因敲 除小鼠得到的体内结果提示GM-CSF的主要生理作用是维持或刺激成熟的 巨噬细胞和粒细胞的功能活性并刺激向免疫系统进行抗原提呈。后一作用 通过直接对树突状细胞和巨噬细胞的产生起作用而达成，也通过增加II类 主要组织相容性复合物和Fc受体在巨噬细胞和树突状细胞上的表达而达 成。GM-CSF刺激嗜中性白细胞、嗜曙红细胞、和单核细胞-巨噬细胞的功 能活性。这些包括增强趋化活性，增加细胞粘附分子的表达和增加与表面 的粘附性，和增加吞噬活性以及抑制和延緩这些细胞的凋亡。嗜中性白细 胞代表了抗入侵防御的第一线。通过包括GM-CSF的原炎性刺激物能延緩 嗜中性白细胞程序性死亡，确保在正确的时间和位置使炎症消退。GM-CSF 也能刺激这些细胞的能力来介导抗体依赖性细胞细胞毒性，并杀死在细胞 内的微生物，并对这些细胞起"引发"效果以增强它们对接下来的氧化爆 发(oxidative burst)(超氧化物阴离子的产生)刺激的应答、脱粒并释放抗微生物剂、并具有化学趋化作用。另外，GM-CSF刺激次级细胞因子和介质 从这些细胞释放，包括从嗜中性白细胞中释》文IL-1、 G-CSF、 M-CSF、和 白细胞三烯，以及从巨噬细胞中释放IL-1、 TNF、 IL-6， G-CSF、 M-CSF、和前列腺素。从以上清楚可知，GM-CSF在活化和维持对抗感染所必需的细胞群中起 关键的作用。可是，在某些情况下，活化这些细胞群是不合需要的。例如， 当未出现病原体的时候，活化以上细胞系在许多情况下导致急性和/或慢性 炎症病情，在极端情况下可危及生命。相似地，过表达GM-CSF可导致过 量免疫活化，造成炎症。在这种情况下，需要中和GM-CSF的活性，从而 消除或至少减轻这些炎症病症的症状。这种中和活性的例子存在于现有技术中。例如发现了，中和抗GM-CSF 抗体能在外周血样品中增加嗜曙红细胞凋亡率(Kankaanranta等(2000) Journal of Allergy and Clinical Immunology 106， 77-83)。由于i曾力口p耆曙纟工纟田 胞存活与哮喘相关，因而预计增加嗜曙红细胞凋亡能减轻哮喘症状。在慢性炎性疾病中，如。孝喘、类风湿性关节炎、和多发性硬化，GM-CSF 的水平会局部增加并在某些情况下全身性增加，而且与这些疾病中的炎症 过程相关。因此，本专利技术的目的是改进对以前技术已知的增加了的和/或不希望的 GM-CSF活性进行中和的模式。因此，本专利技术的一个方面涉及人单克隆抗体或其片段，其特异结合并 中和灵长类GM-CSF。本文中所用的术语"特异结合"或相关表述，如"特异的结合"、"特异 地结合，，、"特异结合物"等，指人单克隆抗体或其片段区分出灵长类GM-CSF 和任何数量的其他不同于灵长类GM-CSF的潜在抗原的能力如此之高，从 多种作为潜在结合配偶体的不同抗原的汇聚物中，仅结合或仅显著结合灵 长类GM-CSF。在本专利技术的范围内，"显著，，结合灵长类GM-CSF，是指在从 作为潜在结合配偶体的同样可接触的多种不同抗原的汇聚物中，比任何其 他不同于灵长类GM-CSF的抗原高至少10倍、优选50倍、最优选100倍 或更高频率(在动力学意义上)地结合灵长类GM-CSF的时候。这些动力学测 量可在Biacore设备上进行。 本文中所用的"中和"、"中和剂"、"中和"和其语法上相关的变体指部分或完全减弱GM-CSF的 一种或多种生物学效应。该GM-CSF的 一种或多种 生物学效应的部分或完全减弱可由修饰、阻断和/或消除GM-CSF介导的信 号传导而造成，如例如在细胞内信号传递、细胞增殖或释放可溶性物质、 上或下调细胞内基因活化所显示的，例如导致除了 GM-CSF之外的配体的 表面受体表达的那些。所属领域技术人员能理解的是，存在多种模式来确 定试剂(例如所论及的抗体或其片段)是否能被划分为中和剂。例如，这 一般可通过如下标准体外测试来实现在第一个增殖实验中，其增殖程度 已知取决于GM-CSF活性的细胞系，和一系列含各种浓度的GM-CSF —起 孵育，孵育后测定细胞系的增殖程度。通过这种测量，确定出能使细胞半 最大增殖程度的GM-CSF浓度。然后进行第二个增殖实验，其在每一系列 样品中利用第一个增殖实验中所用的相同数量的细胞、以上确定的GM-CSF 浓度、以及此次使用各种浓度的怀疑是GM-CSF中和剂的抗体或其片段。 再测量细胞增殖以确定足以导致半最大生长抑制的抗体或其片段的浓度。 如果得到的生长抑制相对于抗体(或其片段)浓度的图是S形的，使得随着 抗体(或其片段)浓度增加而降低细胞增殖，则在一定程度上导致抗体依赖性 生长抑制，即以某种程度中和了 GM-CSF活性。在这种情况下，抗体或其 片段可被认为是本专利技术范围内的"中和剂"。其增殖程度已知取决于GM-CSF 活性的细胞系的一个例子是TF-1细胞系，其如Kitamura， T.等(1989). J Cell Physiol 140, 323-34所述。如所属领域普通技术人员所理解的，细胞增殖的程度不是确立中和能 力的唯一参数。例如，测定其分泌水平依赖于GM-CSF的信号传递分子(如 细胞因子)的水平，可用于鉴定可疑的GM-CSF中和剂。可用于确定所论及的抗体或其片段是否是灵长类GM-CSF活性的中和 剂的细胞系的其他例子包括AML-193 (Lange, B.等(1987). Blood 70, 192-9);GF-D8 (Rambaldi, A.等(1993). Blood 81， 1376-83); GM/SO (Oez ， S.等(19卯).Experimental Hematology 18， 1108-11); M07E (Avanzi, G. C.等(19卯).Journal of Cellular Physiology 145, 458-64); TALL-103 (Valtieri, M.等(1987). Journal of Immunology 138, 4042-50); UT-7 (Komatsu, N.等(1991). 本文档来自技高网...
【技术保护点】
人单克隆抗体或其片段，其特异结合并中和灵长类ＧＭ－ＣＳＦ。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：托拜厄斯劳姆，朱莉娅赫普尼亨克尔，伊娃维瑟，西尔克佩奇尼米特尔斯特拉斯，斯蒂文泽曼，安德烈亚斯沃尔夫，桑德拉布鲁克梅尔，
申请(专利权)人：米克罗麦特股份公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。